HPLC法測(cè)定參蘇片中柚皮苷的含量

劉 巖

（山東藥品食品職業(yè)學(xué)院，山東 威海 264210）

參蘇片為感冒類非處方藥藥品，狀態(tài)為淡棕色的片狀劑型，其氣香，味微苦，由黨參、紫蘇葉、葛根、前胡、茯苓、姜半夏、陳皮、枳殼、桔梗、甘草、木香、大棗、生姜等13味藥材組成。具有疏風(fēng)散寒，祛痰止咳之功。主要用于體弱風(fēng)寒感冒，惡寒發(fā)熱，頭痛鼻塞，咳嗽痰多，胸悶嘔逆［1］。風(fēng)熱感冒者不適用。風(fēng)寒感冒，臨床上多表現(xiàn)為微惡風(fēng)，發(fā)熱重，口渴，有汗，鼻流濁涕，咽喉紅腫熱痛，咳吐黃痰，但若伴有肝病、糖尿病、心臟病、高血壓、腎病等慢性病嚴(yán)重者、孕婦或正在接受其他治療的患者應(yīng)慎用或在醫(yī)師指導(dǎo)下服用。由于參蘇片制劑中君藥為枳殼，其主要活性成分之一為柚皮苷［2］，為保證參蘇片制劑的內(nèi)在控制質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)制劑參蘇片處方中枳殼藥材的有效活性成分柚皮苷進(jìn)行含量測(cè)定，獲得比較滿意的效果，該方法重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，有助于控制該制劑的質(zhì)量，確保臨床用藥的有效性和安全性［3］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 電子天平（AUW20D，島津）；高效液相色譜儀（1100，安捷倫）；紫外可見分光光度計(jì)（UV-2550，島津島津公司）；超聲波清洗器（KQ-50B，昆山市超聲波有限公司）；恒溫水浴鍋（HH-4，金壇市榮華儀器制造有限公司）；索氏提取器（JOYN-SXT-02，上海喬躍電子有限公司）；微孔濾膜過(guò)濾器（ZHAA-1000，北京中慧天誠(chéng)科技有限公司）。

1.2 試藥 柚皮苷對(duì)照品（批號(hào)：110922-200309中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）；參蘇片（3批，批號(hào)：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司）；乙腈為色譜純，甲醇、乙醇、丙酮等其他試劑均為分析純，水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：BDS C18Hypersil（250nm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（21.5∶80.5）；檢測(cè)波長(zhǎng)：283nm；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 取干燥至恒重的柚皮苷對(duì)照品一定量，精密稱定后，置棕色量瓶中，然后加一定量甲醇進(jìn)行超聲波溶解，再加甲醇定容制成濃度15μg/mL的溶液，作為柚皮苷對(duì)照品溶液備用。

2.2.2 供試品溶液 取裝量差異項(xiàng)下的參蘇片，粉碎，過(guò)篩，粉末混勻，研細(xì)，取3.0g，精密稱定后，置于具塞的錐形瓶中，再精密加入甲醇50mL，密塞，稱定重量，采用恒溫回流提取1.5h，放冷，密塞，再稱定重量，并用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用濾紙過(guò)濾，收集續(xù)濾液，低溫蒸干，將蒸干后的殘?jiān)由倭克芙猓锰崛∥锼芤?，提取物水溶液通過(guò)聚酰胺色譜柱洗脫，以水為洗脫液洗滌多次，棄去水溶液后，再用甲醇50mL為洗脫液分次洗滌，收集甲醇洗脫液，取一定量的甲醇洗脫液用0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾，得到濾液作為供試品溶液備用。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性范圍考察 取已制備好的柚皮苷對(duì)照品溶液，分別精密吸取1、3、5、7、9μL的柚皮苷對(duì)照品溶液，依次注入高效液相色譜儀，并記錄測(cè)得的色譜圖，然后測(cè)定其峰面積，以柚皮苷質(zhì)量為橫坐標(biāo)（X），以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：Y=25 856X－600.2（Y，峰面積，X，質(zhì)量），r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，柚皮苷對(duì)照品在0.015～0.135μg范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取已制備好的柚皮苷對(duì)照品溶液（15μg/mL）5μL，按正文色譜條件，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定柚皮苷的峰面積，計(jì)算5次測(cè)定柚皮苷峰面積的平均值為56 878.8，RSD=0.5％（n=5）。結(jié)果表明，測(cè)定儀器的精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 配制同一供試品溶液（批號(hào)：20120601），精密吸取10μL，按正文色譜條件分別在0、2、4、8、12h測(cè)定供試品溶液峰面積，計(jì)算得柚皮苷峰面積的平均值為562 128.21，RSD=1.1％（n=5）。結(jié)果表明，供試品溶液在12h內(nèi)化學(xué)性質(zhì)較穩(wěn)定，其穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取柚皮苷提取物（批號(hào)：20120601）的樣品共5分，分別按照供試品溶液制備方法制備，按照正文色譜條件測(cè)定，分別按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品溶液中柚皮苷的質(zhì)量，其質(zhì)量的平均值為0.185mg，RSD=2.54％（n=5）。結(jié)果表明，測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量的同一批號(hào)樣品（批號(hào)：20120601）5分，精密稱定，再分別精密加入柚皮苷對(duì)照品（配制成溶液加入），按照正文供試品溶液的制備方法，制備測(cè)定加樣回收率的供試品溶液，然后再分別測(cè)定5分樣品溶液的含量，最后計(jì)算加樣回收率，計(jì)算得其加樣回收率的平均值為98.53％，RSD=0.5％（n=5）。結(jié)果表明，本方法具有較好的加樣回收率。

2.3.6 樣品含量測(cè)定 按照對(duì)照品溶液正文制備方法制備對(duì)照品溶液，按照供試品溶液正文制備方法制備供試品溶液3批（批號(hào)：120601、120602、120603，成都九芝堂金鼎藥業(yè)有限公司），按照正文色譜條件進(jìn)行測(cè)定，分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5μL，注入高效液相色譜儀，并記錄相應(yīng)的色譜圖，以樣品中柚皮苷峰面積來(lái)計(jì)算柚皮苷的含量，樣品中的柚皮苷含量分別為0.19mg/g（批號(hào)：120601）、0.21mg/g（批號(hào)：120602）、0.22mg/g（批號(hào)：120603）。

3 結(jié)論

3.1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 取柚皮苷對(duì)照品適量，加甲醇制備成適宜濃度的溶液，進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)范圍掃描，結(jié)果目標(biāo)成分在283nm波長(zhǎng)處吸收值最大，因此選擇283nm為測(cè)定波長(zhǎng)。

3.2 提取溶劑、方法、時(shí)間的選擇 取樣品適量，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別考察了甲醇、95％乙醇、80％乙醇、丙酮4種提取溶劑，得到提取物收率最高的溶劑為甲醇，故選擇甲醇為提取溶劑；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別考察了冷浸、超聲、回流3種提取方法［4-8］，得到提取物收率最高的提取方法為回流提取，故選擇提取方法為回流提??；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別考察了提取時(shí)間為1h、1.5h和2h所獲得的收率［9-11］，得到提取物收率最高的時(shí)間為1.5h，故選擇提取時(shí)間為1.5h。根據(jù)以上考察，最后確定以甲醇為溶劑回流提取1.5h，收率大，雜質(zhì)干擾小。

3.3 流動(dòng)相的選擇 通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究，最后選擇了2個(gè)流動(dòng)相系統(tǒng)：A甲醇∶1％冰醋酸（30∶70），B乙腈∶水（21.5∶80.5）；A系統(tǒng)液相色譜圖表現(xiàn)為饅頭峰，改變?yōu)锽系統(tǒng)后峰形得到很大改善，也無(wú)拖尾現(xiàn)象，保留時(shí)間適中，且主峰與雜質(zhì)峰分離度符合要求，故選擇乙腈-水（21.5∶80.5）作為流動(dòng)相。

本研究建立了高效液相方法測(cè)定參蘇片中柚皮苷的含量，方法穩(wěn)定可行，專屬性強(qiáng)，精密度高，重復(fù)性好，其他組分干擾小，回收率高。該研究可為參蘇片的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供理論依據(jù)。

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