輸血前不規(guī)則抗體篩查與直接抗人球蛋白試驗(yàn)的意義

曾學(xué)平

(?？谑薪夥跑姷?87醫(yī)院輸血科，?？?571159)

現(xiàn)今輸血技術(shù)大大提高了輸血的臨床療效，血液的配合型輸注不單單指ABO血型系統(tǒng)的相互配合，同時(shí)還包括Rh多種少見血型系統(tǒng)的配合，通過血型鑒定可大大降低速發(fā)型溶血反應(yīng)的概率。不規(guī)則抗體是指血清中除抗-A、抗-B抗體外其他血型的抗體，引起溶血性輸血反應(yīng)，溶血較輕時(shí)會導(dǎo)致患者出現(xiàn)發(fā)熱、寒戰(zhàn)癥狀，降低臨床治療效果，嚴(yán)重時(shí)甚至危機(jī)到患者的生命安全。直接抗人球蛋白試驗(yàn)(direct antiglobulin test，DAT)陽性表明人體內(nèi)的紅細(xì)胞受到不完全抗體致敏，導(dǎo)致交叉配血過程出現(xiàn)凝集反應(yīng)，給配血帶來困難。最近幾年，國外已經(jīng)廣泛應(yīng)用微柱凝膠技術(shù)。本研究對收治的住院后需要輸血患者的臨床資料進(jìn)行分析，對其運(yùn)用微柱凝膠法對DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，同時(shí)對陽性患者的血液抗體特異性進(jìn)行鑒定。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇?？谑薪夥跑姷?87醫(yī)院于2010年4月至2013年1月收治的住院后需要輸血的患者3454例，其中男2014例、女1440例，年齡1～88(54.2±6.3)歲。其中1022例有輸血史，2432例無輸血史；女性患者中235例有妊娠史，1205例無妊娠史；運(yùn)用微柱凝膠法對患者的DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，同時(shí)對陽性患者的血液抗體特異性進(jìn)行鑒定。

1.2儀器與試劑 儀器主要包括專用卡式離心機(jī)、37 ℃孵育箱、微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡等，均由長春博訊生物技術(shù)有限公司提供。檢測不規(guī)則抗體的試劑為人紅細(xì)胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，主要包括C，c，D，E，M，N，e，s，PL，Lea，Leb，k，Jka，Jkb，F(xiàn)ya，F(xiàn)yb共16種抗原。

1.3方法

1.3.1不完全抗體的鑒定與篩查 將微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡取出，標(biāo)記上Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，將患者50 μL的血清樣本加入孔中，再分別將0.8%的檢測細(xì)胞(50μL)加入其內(nèi)，保持溫度恒定在37 ℃，經(jīng)過15 min的孵育，在離心機(jī)的離心半徑26 cm條件下,900 r/min持續(xù)2 min、1500 r/min持續(xù)3 min離心約5 min觀察結(jié)果，檢測的細(xì)胞如未出現(xiàn)凝集現(xiàn)象即為陰性，如出現(xiàn)凝集即為陽性結(jié)果，進(jìn)而再用譜細(xì)胞鑒定不完全抗體的特異性，操作時(shí)嚴(yán)格按照說明書及參考文獻(xiàn)執(zhí)行。

1.3.2DAT定性 將50 μL濃度為0.5%～0.8%的待檢紅細(xì)胞懸液加入到微柱凝膠抗人球蛋白檢測卡(抗IG+C3d)中，立刻在離心半徑24 cm條件下，900 r/min持續(xù)2 min、1500 r/min持續(xù)3 min共離心約5 min，對結(jié)果進(jìn)行觀察，DAT陽性結(jié)果運(yùn)用抗IgG+C3d、抗C3d及抗IgG試劑進(jìn)行分型。

2 結(jié) 果

3454例患者中共檢測出6例為不規(guī)則抗體，陽性率為0.17%，其中2例為抗-E、1例為抗-C、1例為抗-c1、1例為抗-s1、1例為抗-Jka，且有輸血史較無輸血史者不規(guī)則抗體檢出率高(P<0.01)，女性有妊娠史者較女性無妊娠史者不規(guī)則抗體檢出率高(P<0.01)；35例為DAT陽性，陽性率為1.01%，其中18例為IgG型抗體、7例為C3型抗體、10例為IgG+C3型抗體,且有輸血史較無輸血史者DAT陽性率高(P<0.01)，女性有妊娠史者較女性無妊娠史者DAT陽性率高(P<0.01)(表1)。

表1 3454例需輸血患者DAT及不規(guī)則抗體篩選的結(jié)果 [例(%)]

3 討 論

隨著社會的發(fā)展，醫(yī)療技術(shù)水平的不斷進(jìn)步，以及醫(yī)院實(shí)施的各種節(jié)約用血措施的實(shí)施，同樣的手術(shù)需要輸血的可能性越來越小，需血量也在逐漸降低，雖然如此，但是用血的不確定性在逐漸升高，因而對于醫(yī)院來說，手術(shù)通知單下達(dá)的備血數(shù)量只是一個(gè)參考值，并不是提前根據(jù)通知單上的要求備好血液，進(jìn)行交叉配血實(shí)驗(yàn)主要是在術(shù)中隨機(jī)應(yīng)變，但是速度要求快，這樣可以確保手術(shù)的順利實(shí)施[1]。但是，特殊情況時(shí)會遇到不規(guī)則抗體導(dǎo)致的配血不和現(xiàn)象，短時(shí)間內(nèi)很難找到適合的血液，這樣會對臨床用血造成困擾，耽誤患者的最佳治療時(shí)間，嚴(yán)重者甚至危及到患者的生命安全，因此要在輸血前的1～2 d對患者的血清中的不規(guī)則抗體進(jìn)行篩選，以保證出現(xiàn)緊急情況時(shí)可迅速輸注血液。

輸血在臨床的治療過程中占據(jù)著重要的位置，輸血的安全性已經(jīng)受到社會的廣泛關(guān)注。雖然大多數(shù)人不存在不規(guī)則抗體，但是其為導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)及遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因，美國食品藥品管理局對由于輸血導(dǎo)致死亡的患者進(jìn)行報(bào)道時(shí)指出，死亡患者中約55.5%是由于溶血性輸血反應(yīng)導(dǎo)致的，然而其中的14%是由于不完全抗體導(dǎo)致的[2]。本研究結(jié)果顯示，3454例患者中共檢測出6例為不規(guī)則抗體，陽性率為0.17%，與徐繼勛[3]報(bào)道的有妊娠史或者輸血史的數(shù)值比較偏低，與戴芳等[4]報(bào)道的基本一致。本研究中6例不規(guī)則抗體陽性的患者都有過妊娠史及輸血史，表明不規(guī)則抗體表現(xiàn)為陽性主要與患者的妊娠史及輸血史有關(guān)，也說明輸血或者妊娠過程中的免疫刺激導(dǎo)致不規(guī)則抗體的出現(xiàn)，因而對于曾有過妊娠史及輸血史的患者要特別注意篩查不規(guī)則抗體。

本文研究的結(jié)果可以看出其中6例患者為不規(guī)則抗體，具體有抗-E、抗-C、抗-c1、抗-s1、抗-JKa，35例為DAT陽性，陽性率為1.01%，其中包括三型抗體，分別為IgG型抗體、C3型抗體、IgG+C3型抗體。不規(guī)則抗體有輸血史較無輸血史者不規(guī)則抗體檢出率高，女性有妊娠史者較女性無妊娠史者不規(guī)則抗體檢出率高；35例為DAT陽性，有輸血史較無輸血史者DAT陽性率高；女性有妊娠史者較女性無妊娠史者DAT陽性率高。

本研究對6例不完全抗體陽性的樣本進(jìn)行了特異性抗體鑒定，經(jīng)過分析得出，不規(guī)則抗體多數(shù)為Rh血型系統(tǒng)，主要以除抗-D以外的抗體為主，如抗-C、抗-E等不規(guī)則抗體的檢出率相對較高，大多數(shù)醫(yī)院以將D抗原作為輸血前的常規(guī)檢查，防止進(jìn)行輸血過程中D抗原導(dǎo)致免疫反應(yīng)，因此抗-D產(chǎn)生有所降低，而沒有對Rh(C，c，E，e)的檢測進(jìn)行定性要求，抗-E、抗-C等已經(jīng)成為現(xiàn)今妊娠后及多次輸血后常見的抗體類型[5-6]。由此可見，輸血前要常規(guī)對不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，當(dāng)抗體篩查出現(xiàn)陽性反應(yīng)時(shí)，要對抗體的特異性類型進(jìn)行確定，選擇輸注相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞，防止出現(xiàn)溶血性輸血反應(yīng)，以此來保證患者的輸血安全性。

DAT是診斷自身免疫性溶血性貧血的重要依據(jù)，但是引起患者紅細(xì)胞DAT陽性的因素很多，如溶血性貧血、藥物因素、慢性肝炎、自身免疫性疾病以及癌癥等[7]。DAT陽性可導(dǎo)致微柱凝膠法交叉配血主側(cè)、次側(cè)同時(shí)凝集，也可以出現(xiàn)次側(cè)凝集的現(xiàn)象，引起配血有一定難度[8]。運(yùn)用吸收試驗(yàn)將患者血清中的自身抗體清除，再運(yùn)用這個(gè)血清進(jìn)行主側(cè)交叉配血試驗(yàn)，對患者的紅細(xì)胞做放散試驗(yàn)，將放散掉的自身抗體紅細(xì)胞進(jìn)行交叉配血次側(cè)試驗(yàn)，如果將干擾因素排除，交叉配血試驗(yàn)相合，就可以進(jìn)行輸血，避免由于輸血不相合的血液導(dǎo)致溶血性輸血反應(yīng)。

綜上所述，進(jìn)行輸血前要對DAT及不規(guī)則抗體進(jìn)行篩查，特別是有妊娠史及輸血史的患者，這樣可以確保臨床輸血的安全性，同時(shí)降低出現(xiàn)溶血反應(yīng)的概率，具有重要的臨床意義。

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[2] 趙莉.不規(guī)則抗體篩查在預(yù)防溶血性輸血反應(yīng)中的作用[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2011,5(20):2339-2340.

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[5] 鄧麗敏,周麗梅.尿毒癥患者反復(fù)輸血對交叉配血的影響[J].中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè),2010,22(32)：75-76.

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[8] 嚴(yán)根興,查榮寶,周建華,等.微柱凝膠技術(shù)篩檢不規(guī)則抗體的臨床應(yīng)用與分析[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2009,36(4):91-93.