欖香烯和PD98059誘導(dǎo)人胃癌SCG-7901細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的探討

俞耀軍，盛維為，葉海波，屠洋洋，劉帥，孫維建，游濤，王飛海，鄭志強(qiáng)

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 胃腸外科，浙江 溫州 325027）

欖香烯和PD98059誘導(dǎo)人胃癌SCG-7901細(xì)胞株凋亡及其機(jī)制的探討

俞耀軍，盛維為，葉海波，屠洋洋，劉帥，孫維建，游濤，王飛海，鄭志強(qiáng)

（溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院 胃腸外科，浙江 溫州 325027）

目的：探討欖香烯及PD98059對(duì)人胃癌SCG-7901細(xì)胞株凋亡的影響，及其與ERK1/2、P38MAPK信號(hào)通路的關(guān)系。方法：用不同濃度的欖香烯和PD98059處理人胃癌SCG-7901細(xì)胞，體外細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)（MTT）法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況；Western-blot法檢測(cè)ERK1/2、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）和磷酸化P38（p-P38）的表達(dá)；RT-PCR檢測(cè)bcl-2 mRNA及bax mRNA的表達(dá)；TUNEL法檢測(cè)胃癌細(xì)胞凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù)。結(jié)果：欖香烯和PD98059單獨(dú)作用都有抑制胃癌細(xì)胞增殖的作用，前者呈濃度和時(shí)間依賴性，后者則呈時(shí)間依賴性但無(wú)濃度依賴性，兩藥聯(lián)合作用時(shí)對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的抑制作用顯著大于單一用藥時(shí)（P＜0.05）；隨欖香烯的濃度增加p-ERK1/2蛋白的表達(dá)量增加（P＜0.05），總ERK1/2無(wú)明顯變化；欖香烯（0.08 mg/ mL）、PD98059（50 μmol/L）及欖香烯+PD98059組作用胃癌細(xì)胞24 h，p-P38的表達(dá)均高于對(duì)照組（P＜0.05），且欖香烯+PD98059組較欖香烯組或PD98059組更高（P＜0.05）；隨欖香烯濃度的增加，bax mRNA的表達(dá)增加，bcl-2 mRNA的表達(dá)降低，且欖香烯+PD98059組表現(xiàn)最顯著；實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率均高于對(duì)照組（P＜0.05），具有濃度依賴性（P＜0.05），且欖香烯+PD98059組的凋亡率明顯高于單一作用組（P＜0.05）。結(jié)論：欖香烯及PD98059可以抑制胃癌細(xì)胞增殖，前者具有時(shí)間和濃度依賴性；欖香烯及PD98059還可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。欖香烯抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制包括促進(jìn)ERK1/2磷酸化和上調(diào)p-P38MAPK信號(hào)通路的表達(dá)；PD98059抑制ERK1/2的磷酸化，但通過(guò)上調(diào)p-P38 MAPK信號(hào)通路的表達(dá)而發(fā)揮其細(xì)胞調(diào)節(jié)作用。

胃腫瘤；欖香烯；PD98059；細(xì)胞凋亡；ERK1/2；P38MAPK

欖香烯是從香茅草中提取的有效抗癌成分，具有抗腫瘤譜廣、不良反應(yīng)輕微的突出優(yōu)點(diǎn)。研究[1-4]證明欖香烯對(duì)多種腫瘤，如胰腺癌、肺癌、宮頸癌、乳腺癌、白血病等具有增殖抑制和凋亡誘導(dǎo)作用。有文獻(xiàn)[5-6]報(bào)道，欖香烯抗胃癌作用與下調(diào)生存素表達(dá)，增強(qiáng)天冬氨酸特異性的半胱氨酸蛋白水解酶活性及下調(diào)過(guò)氧化物酶體增殖激活物受體γ mRNA表達(dá)有關(guān)。我們的前期研究[7]發(fā)現(xiàn)欖香烯可以通過(guò)上調(diào)p-P38MAPK信號(hào)通路而抑制胃癌細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。P38MAPK、ERK1/2通路均為絲裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase，MAPK）通路的分支，然而欖香烯是否也通過(guò)ERK1/2通路產(chǎn)生作用，ERK1/2與P38MAPK通路之間是否存在相互作用，目前鮮見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。PD98059為ERK1/2的特異性抑制劑，可以抑制ERK1/2的磷酸化。本研究進(jìn)一步探討欖香烯、PD98059對(duì)人胃癌細(xì)胞SGC-7901凋亡的可能作用機(jī)制。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞株人胃癌SGC-7901細(xì)胞株購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院。

1.2 試劑和藥品RPMIl640培養(yǎng)基（美國(guó)Gibcol公司）；胰蛋白酶-EDTA（美國(guó)Gibicol公司）；體外細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)（MTT）試劑盒（美國(guó)Sigma公司）；二甲基亞砜（DMSO）（美國(guó)Sigma公司）；欖香烯注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字H109601 15，大連金港制藥有限公司）；兔抗人p-P38、兔抗人ERK1/2及p-ERK1/2一抗、辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的羊抗兔二抗（美國(guó)Cell Signaling Technology公司）；PD98059（美國(guó)Sigma公司）；TUNEL試劑盒（美國(guó)Roche公司）；細(xì)胞裂解液Trizol（Invitrogen公司）；反轉(zhuǎn)錄試劑盒（日本TaKaRa公司）；SYBR Green（美國(guó)Roche公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)：采用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 mg/L鏈霉素的RPMIl640培養(yǎng)基，在37 ℃、CO2體積分?jǐn)?shù)為5%、相對(duì)濕度95%條件下培養(yǎng)胃癌SGC-7901細(xì)胞株。用0.05%胰蛋白酶-EDTA消化傳代細(xì)胞。選用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3.2 MTT法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，以4 000個(gè)/孔接種于96孔板，每孔體積100μL，置37 ℃、5% C02及95%相對(duì)濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，按照實(shí)驗(yàn)要求分為空白組、對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組包括欖香烯組、PD98059組、欖香烯+PD98059組，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔?？瞻捉M不種細(xì)胞；對(duì)照組不做干預(yù)；欖香烯組欖香烯終濃度分別為0.02、0.04、0.08和0.16 mg/mL；PD98059組PD98059終濃度分別為25、50、75和100μmol/L；欖香烯+PD98059組為0.08 mg/mL的欖香烯+50μmol/L PD98059。分別培養(yǎng)6、12、24和48 h，每孔加入5 mg/mL MTT試劑20 μL，繼續(xù)孵育4 h后，吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加150μ L DMSO振蕩混勻，選擇492 nm波長(zhǎng)，在自動(dòng)酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度（A值），計(jì)算抑制率。細(xì)胞增殖抑制率=[1-（實(shí)驗(yàn)組A值-空白組A值）/（對(duì)照組A值-空白組A值）×100%]。

1.3.3 Western-blot法：對(duì)照組、欖香烯組（0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL）、PD98059組（50μ mol/ L）、欖香烯+PD98059組（0.08 mg/mL欖香烯+50 μmol/L PD98059）作用24 h，提取總蛋白，并計(jì)算出上樣體積。變性后SDS聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳，電轉(zhuǎn)膜，5%脫脂奶粉封閉，TBST洗膜，然后分別加入ERK1/2（1:1 000）、p-ERK1/2（1:1 000）、p-P38一抗（1:500）4 ℃孵育過(guò)夜，TBST洗膜后加入HRP標(biāo)記的IgG二抗（1:6 000）室溫孵育2 h，應(yīng)用超敏ECL化學(xué)發(fā)光試劑盒曝光，以tubu-lin蛋白作為內(nèi)參照。采用ImageTool凝膠圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析。觀察ERK1/2、p-ERK1/2、p-P38蛋白的表達(dá)情況。

1.3.4 Real-time PCR：將對(duì)照組、欖香烯組（0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL）、PD98059組（50μ mol/ L）、欖香烯+PD98059組（0.08 mg/mL欖香烯+50 μ mol/L PD98059）細(xì)胞按照1×104/孔密度接種于6孔板，待細(xì)胞貼壁后分別加藥物作用24 h，采用Trizol法提取各孔中總的RNA，產(chǎn)物加入20 mL DEPC水溶解，測(cè)OD值，OD260/OD280均在1.8～2.0之間。按照TaKaRa反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，RT-PCR檢測(cè)采用10μL體系，成分為：SYBR Green 5μ L，上下引物分別為0.5μ L，稀釋后的模板DNA 2μ L，無(wú)菌ddH2O 2μ L。反應(yīng)條件為：95 ℃15 min，95 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，45個(gè)循環(huán)；最后95 ℃ 1 min，55 ℃ 1 min，95 ℃ l min。同時(shí)擴(kuò)增β-actin作為內(nèi)參對(duì)照，觀察bcl-2 mRNA、bax mRNA的表達(dá)情況。bcl-2上游引物為5’-CGCAGAGGGGCTACGAGT-3’，下游引物為5’-GTTGACGCT CTCCACACACAT-3’；bax上游引物為5’-TTTCTGACGGCA ACTTCAACTG-3’，下游引物為5’-CAACCACCCTGGTCTTG GAT-3’；內(nèi)參基因β-actin上游引物為5’-CGTGGACA TCCGCAAAGAC-3’，下游引物為5’-AAGAAAGGGTGTAACG CAACTAAG-3’。結(jié)果判定：實(shí)驗(yàn)組相對(duì)于對(duì)照組的表達(dá)量=2-ΔΔCt。

1.3.5 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡：對(duì)照組、欖香烯組（0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL）、PD98059組（50 μ mol/L）、欖香烯+PD98059組（0.08 mg/mL欖香烯+50 μmol/L PD98059）以l×104個(gè)/mL的密度將細(xì)胞接種于預(yù)先放置蓋玻片的6孔板中，于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，過(guò)夜后各孔加藥物干預(yù)作用24 h。按TUNEL檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作并加以改進(jìn)，取出帶有細(xì)胞的載玻片，用4%多聚甲醛室溫固定1 h，PBS洗2 min×3次，0.3% H202室溫作用30 min，PBS洗5 min×3次，體積分?jǐn)?shù)0.1% Triton×100，4 ℃作用2 min。PBS洗5 min×3次，滴加TUNEL反應(yīng)液50 μL。在濕盒內(nèi)37 ℃溫育l h，PBS洗后加過(guò)氧化物酶轉(zhuǎn)化劑，37 ℃溫育30 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。TUNEL反應(yīng)液中不加TdT酶作為陰性對(duì)照，用DNase I部分降解的標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照組，細(xì)胞核呈棕褐色或棕黑色的為凋亡細(xì)胞。在高倍鏡下隨機(jī)取5個(gè)視野，總細(xì)胞數(shù)＞1 000個(gè)，計(jì)算凋亡指數(shù)，凋亡指數(shù)=陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。計(jì)量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析及LSD檢驗(yàn)；組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 欖香烯、PD98059對(duì)胃癌細(xì)胞SGC-790l細(xì)胞的增殖抑制作用MTT法檢測(cè)顯示欖香烯、PD98059能夠顯著抑制細(xì)胞增殖，前者隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)抑制率逐漸增加，呈現(xiàn)濃度和時(shí)間依賴性，后者呈時(shí)間依賴性，而二者聯(lián)用較單一作用效果更明顯（見(jiàn)圖1、表1）。

圖1 不同濃度欖香烯及PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞的增殖抑制曲線

2.2 Westren-blot法檢測(cè)ERK1/2、p-ERK1/2、p-P38的表達(dá)情況

2.2.1 不同濃度欖香烯作用胃癌SCG-7901細(xì)胞24 h后各組ERK1/2、p-ERK1/2表達(dá)情況：隨著欖香烯濃度的增加，REK1/2的表達(dá)無(wú)明顯變化，p-ERK1/2的表達(dá)逐漸增加，濃度為0.08 mg/mL后，p-ERK1/2被迅速激活，p-ERK1/2相對(duì)表達(dá)量為對(duì)照組的2.68倍。詳見(jiàn)圖2、表2。

表1 不同濃度欖香烯及PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞株增殖的影響（n=5）

圖2 不同濃度欖香烯作用24 h后ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)情況

表2 不同濃度欖香烯作用胃癌SCG-7901細(xì)胞后各組ERK1/ 2、p-ERK1/2蛋白相對(duì)表達(dá)量

2.2.2 欖香烯、PD98059及欖香烯+PD98059作用SCG-7901細(xì)胞后各組ERK1/2、p-ERK1/2表達(dá)情況：作用24 h后與對(duì)照組比較，欖香烯（0.08 mg/mL）組SCG-7901細(xì)胞p-ERK1/2表達(dá)明顯增加（P＜0.05），PD98059（50μ mol/L）組p-ERK1/2表達(dá)明顯降低（P＜0.05），欖香烯+PD98059組則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但欖香烯+PD98059組較欖香烯組p-ERK1/2表達(dá)降低，較PD98059組則表達(dá)增加（P＜0.05）。各組間ERK1/2表達(dá)水平差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），詳見(jiàn)圖3、表3。

圖3 各組ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表達(dá)情況

表3 欖香烯、PD98059及欖香烯+PD98059作用SCG-7901細(xì)胞后各組ERK1/2、p-ERK1/2、p-P38相對(duì)表達(dá)量

2.2.3 欖香烯、PD98059及欖香烯+PD98059作用SCG-7901細(xì)胞后各組p-P38表達(dá)情況：作用24 h后與對(duì)照組比較，欖香烯（0.08 mg/mL）組、PD98059（50μ mol/L）組及欖香烯+PD98059組p-P38表達(dá)均明顯增加（P＜0.05），且欖香烯+PD98059組較單一用藥組p-P38表達(dá)量增加（P＜0.05），詳見(jiàn)圖4、表3。

圖4 各組p-P38蛋白表達(dá)情況

2.3 TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組細(xì)胞呈多邊形或多角形，染色質(zhì)呈顆粒狀，染成淡藍(lán)色，極少數(shù)細(xì)胞被染成棕褐色，經(jīng)欖香烯、PD98059、欖香烯+PD98059處理后的SGC7901細(xì)胞明顯變小，染色質(zhì)呈團(tuán)塊狀，邊聚核固縮被染成棕褐色，呈凋亡的形態(tài)改變，詳見(jiàn)圖5。與對(duì)照組相比，欖香烯（0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL）組及PD98059（50μmol/L）組、欖香烯+PD98059組凋亡率明顯增高，且隨欖香烯濃度增高，凋亡率明顯增高。對(duì)照組細(xì)胞凋亡指數(shù)為3.25%±0.24%，0.02、0.04、0.08、0.16 mg/mL的欖香烯組凋亡指數(shù)分別為8.26%±0.54%、17.34%±0.68%、25.87% ±1.04%、35.67%±0.84%，PD98059組為15.05% ±0.25%，PD98059+欖香烯組為41.34%±0.89%，實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組明顯增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其余各組間相比差異亦均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

圖5 TUNEL法檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況（×400）

2.4 RT-PCR結(jié)果隨著欖香烯濃度的升高，bax mRNA的表達(dá)增加，而bcl-2 mRNA的表達(dá)降低；PD98059組及欖香烯+PD98059組相比于對(duì)照組，bax mRNA的表達(dá)增加，bcl-2 mRNA的表達(dá)降低。欖香烯濃度為0.02 mg/mL時(shí)bax mRNA的表達(dá)量為對(duì)照組的1.3985倍，到0.16 mg/mL時(shí)為3.4382倍，欖香烯+PD98059組升高最明顯，為對(duì)照組的4.8636倍（見(jiàn)表4）。欖香烯濃度為0.02 mg/mL時(shí)bcl-2 mRNA表達(dá)水平為對(duì)照組的0.9634倍，到0.16 mg/mL時(shí)為0.3020倍，欖香烯+PD98059組下降最明顯，為0.1763倍（見(jiàn)表4）。

表4 不同濃度欖香烯及PD98059對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞bax mRNA、bcl-2 mRNA表達(dá)的影響（n=3）

3 討論

全球胃癌發(fā)病率高，由胃癌導(dǎo)致的死亡人數(shù)僅次于肺癌，在惡性腫瘤中位居第二，而在我國(guó)各種惡性腫瘤中居首位[8]。目前治療以手術(shù)聯(lián)合細(xì)胞毒性化療藥物為主，而化療對(duì)重要器官的損傷和腫瘤耐藥是臨床經(jīng)常遇到的難題。大量研究表明欖香烯能夠抑制包括胃癌在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞的增殖[1-7，9-11］。欖香烯發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，其具體作用機(jī)制尚不清楚。

Liu等[12]研究了β-欖香烯對(duì)人胃癌細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)及其機(jī)制，認(rèn)為β-欖香烯通過(guò)抑制PI3K/Akt/ mTOR通路，一方面抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)凋亡，另一方面激活一個(gè)保護(hù)性的自噬體從而避免細(xì)胞凋亡。Qu等[13]研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌細(xì)胞中，激活ERK信號(hào)通路可以上調(diào)DR4、DR5的表達(dá)，從而通過(guò)腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-related apoptosisinducing ligand，TRAIL）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

本研究采用不同濃度的欖香烯作用胃癌細(xì)胞株SGC-7901，發(fā)現(xiàn)隨著藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，胃癌細(xì)胞的增殖抑制率逐漸增加，而采用不同濃度的PD98059作用于胃癌細(xì)胞，胃癌細(xì)胞的增殖抑制率并不隨其濃度的增加而增加，而是隨時(shí)間的延長(zhǎng)而增加；當(dāng)欖香烯和PD98059同時(shí)作用于胃癌細(xì)胞時(shí)，其對(duì)細(xì)胞株的增殖抑制率明顯比同一濃度的欖香烯或PD98059單一作用時(shí)高。我們通過(guò)Westren-blot法檢測(cè)ERK1/2蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)隨著欖香烯濃度的增加，p-ERK1/2的表達(dá)逐漸增加，總ERK1/2則沒(méi)有明顯變化，說(shuō)明欖香烯可以通過(guò)促進(jìn)ERK1/2的磷酸化而發(fā)揮作用，同樣，在加入ERK1/2磷酸化抑制劑PD98059后，更能證明這一結(jié)論。我們還發(fā)現(xiàn)欖香烯及PD98059都能明顯促進(jìn)p-P38MAPK的表達(dá)，并且二者合用比單一用藥時(shí)效果更顯著，這一結(jié)果同文獻(xiàn)[14-15]的報(bào)道一致。

bcl-2、bax為癌基因家族的成員之一，前者是凋亡抑制基因，后者則是促凋亡基因。二者的比值決定細(xì)胞接受刺激信號(hào)后是凋亡還是存活[16]。本研究通過(guò)TUNEL法觀察到欖香烯促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，其凋亡率隨欖香烯濃度的增高而增高。PD98059亦可促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡，且二者聯(lián)合作用較單一作用明顯。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)bax mRNA的表達(dá)隨欖香烯濃度的增高而增加，但是bcl-2 mRNA的表達(dá)則降低，這提示欖香烯及PD98059可能通過(guò)RAS/RAF/ERK、P38MAPK通路誘導(dǎo)SGC-7901胃癌細(xì)胞凋亡[17-19]。本研究結(jié)果表明，欖香烯抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖、誘導(dǎo)其凋亡與p-ERK1/2以及p-P38表達(dá)增加、bcl-2表達(dá)下降和bax表達(dá)增加有關(guān)；PD98059抑制人胃癌細(xì)胞SGC-7901增殖、誘導(dǎo)其凋亡與p-P38表達(dá)增加、bcl-2表達(dá)下降和bax表達(dá)增加有關(guān)，聯(lián)合欖香烯和PD98059作用后效果更加明顯。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)研究表明，欖香烯及PD98059可以抑制胃癌細(xì)胞增殖，前者具有時(shí)間和濃度依賴性；欖香烯及PD98059還可以促進(jìn)胃癌細(xì)胞凋亡。欖

香烯抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的機(jī)制包括促進(jìn)ERK1/2磷酸化和上調(diào)p-P38MAPK信號(hào)通路的表達(dá)；PD98059抑制ERK1/2的磷酸化，但通過(guò)上調(diào)p-P38 MAPK信號(hào)通路的表達(dá)而發(fā)揮其細(xì)胞調(diào)節(jié)作用。

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（本文編輯：丁敏嬌）

The mechanism of elemene and PD98059 inducing apoptosis of human gastric cancer cell line SCG-7901

YU Yaojun, SHENG Weiwei, YE Haibo, TU Yangyang, LIU Shuai, SUN Weijian, YOU Tao, WANG Feihai, ZHENG Zhiqiang.Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University, Wenzhou, 325027

Objective:To explore the effect of elemene and PD98059 on the apoptosis of human gastric cancer cell line SGC-790l and the relationship of ERK1/2, P38MAPK signal pathway.Methods:SGC-790l cells were treated with elemene and PD98059. MTT assay was used to detect the proliferation of SGC-790l cells. The expression of ERK1/2, phosphorylation REK1/2 (p-ERK1/2) and phosphorylated P38 (p-P38) was detected by western-blot.The bcl-2 mRNA and bax mRNA was detected with RT-PCR. The gastric cancer cell apoptosis index was detected by TUNEL method.Results:Elemene and PD98059 alone effectively inhibited the proliferation of gastric cancer cells SGC-7901, and the former was in a dose-dependent and time-dependent manner, the latter was in a time-dependence but no in dose-dependent manner, and the combined effects of the two drugs on gastric cancer cell proliferation inhibition was significantly greater than that of single agent (P<0.05). The expression of p-ERK1/2 protein was increased (P<0.05), and the total ERK1/2 was no significant change with the concentration of elemene increased. The expression of p-P38 of elemene group, PD98059 group and the combined group were significantly higher than that of the control group (P<0.05), and the combined group was the highest (P<0.05). The mRNA of bcl-2 expression was down-regulated while the expression of bax mRNA was up-regulated and both changes had good dose-dependent tendency, and the combined group was most significantly. Cell in experimental groupsapoptosis rate was higher than that in the control group (P<0.05), and in a dose-dependent manner with elemene (P<0.05).The apoptosis rate of elemene+PD98059 group was significantly higher than that of the single-action group (P<0.05). Conclusion: Elemene and PD98059 can inhibite the proliferation of gastric cancer cells SGC-7901, and the former was in a dose-dependent and time-dependent manner. Elemene and PD98059 can also promote the apoptosis of gastric cancer cells. Elemene promotes apoptosis and inhibites the proliferation of gastric cancer cells by up-regulating the expression of p-ERK1/2 signaling pathway and p-P38MAPK signaling pathway. PD98059 inhibites the ERK1/2 phosphorylation, but can promote the expression of p-P38 MAPK signaling pathway, then inhibites the proliferation and promotes gastric cancer cell apoptosis.

gastric cancer; elemene; PD98059; apoptosis; ERK1/2; P38MAPK

R735.2

A

1000-2138（2014）04-0258-07

2013-11-05

浙江省衛(wèi)生廳科研基金資助項(xiàng)目（2011KYA112）。

俞耀軍（1977-），男，浙江紹興人，主治醫(yī)師，碩士。

鄭志強(qiáng)，教授，碩士生導(dǎo)師，Email：zzq652992@163.com。