血清中NSE及S100B蛋白檢測(cè)對(duì)預(yù)測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒膽紅素腦損傷的臨床意義

馬菲　張蕾

[摘要] 目的 探索高膽紅素血癥早產(chǎn)兒血清中神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）及星形膠質(zhì)源蛋白（S100B）的測(cè)定對(duì)預(yù)測(cè)早產(chǎn)兒發(fā)生膽紅素腦損傷的臨床意義。 方法 選擇日齡2～7 d內(nèi)患高膽紅素血癥的早產(chǎn)兒112例作為觀察組，另選擇36例無(wú)膽紅素血癥的早產(chǎn)兒作為對(duì)照組，重氮法檢測(cè)血清總膽紅素（TBiL），酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)NSE及S100B蛋白。對(duì)部分患兒進(jìn)行腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位（BAEP）檢測(cè)，受試者工作曲線（ROC）分析患兒NSE、S100B蛋白、TBiL等檢測(cè)方法與BAEP檢測(cè)的相關(guān)性。 結(jié)果 觀察組NSE、S100B蛋白及TBiL分別為（109.35±33.63）、（3.350±1.677） μg/L及（163.20±77.17） μmol/L，與對(duì)照組的（66.28±21.50）、（1.876±0.744） μg/L及（75.84±36.36） μmol/L比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），且觀察組NSE、S100B蛋白與TBiL之間呈正相關(guān)性。BAEP異常組與BAEP正常組TBiL分別為（299.90±88.30） μmol/L與（303.20±61.20） μmol/L，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；BAEP異常組NSE、S100B蛋白分別為（144.33±33.06）、（4.259±1.195） μg/L，與BAEP正常組的（86.86±25.02）、（3.097±1.557） μg/L比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。對(duì)患有高膽紅素血癥的早產(chǎn)兒根據(jù)TBiL水平判斷BEAP的異常差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.727）；利用NSE、S100B蛋白預(yù)測(cè)患膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的臨界點(diǎn)分別為110.56、3.606 μg/L，NSE、S100B蛋白、TBiL預(yù)測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的靈敏度分別為91.00%、88.67%、53.47%，特異度分別為78.46%、70.13%、42.88%，NSE檢測(cè)的靈敏度和特異度略優(yōu)于S100B蛋白，兩者的靈敏度與特異度均顯著高于TBiL（P=0.003）。 結(jié)論 對(duì)患高膽紅素血癥的早產(chǎn)兒測(cè)定血清中NSE及S100B蛋白的含量對(duì)診斷早產(chǎn)兒膽紅素腦損傷有重要價(jià)值，可作為臨床上判斷膽紅素腦損傷的敏感指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞] 神經(jīng)元特異性烯醇化酶；星形膠質(zhì)源蛋白；高膽紅素血癥；早產(chǎn)兒

[中圖分類(lèi)號(hào)] R722.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）02（c）-0004-04

黃疸是新生兒早期最為常見(jiàn)的癥狀且多數(shù)輕微，但約有25/10萬(wàn)的足月或近足月新生兒可發(fā)生較嚴(yán)重的高膽紅素血癥，輕者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)的功能性損傷如聽(tīng)覺(jué)系統(tǒng)損傷，重者可引起急性膽紅素腦病或核黃疸，造成嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥，甚至危及生命[1-4]。因此，對(duì)患有高膽紅素血癥的新生兒進(jìn)行及早的診斷與治療，防止腦損害的發(fā)生，對(duì)保證新生兒正常發(fā)育和提高新生兒生命質(zhì)量具有重要意義。臨床主要以血清總膽紅素（TBiL）的水平為參考來(lái)制訂高膽紅素血癥新生兒的干預(yù)方案，但有研究顯示新生兒，特別是早產(chǎn)兒TBiL的水平與膽紅素腦損傷的發(fā)生并不完全一致[5]。本研究旨在通過(guò)檢測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒血清中TBiL、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）及星形膠質(zhì)源蛋白（S100B）的含量，分析NSE、S100B蛋白與TBiL的相關(guān)性，明確NSE及S100B蛋白在早期預(yù)測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒腦損傷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2012年11月～2013年11月浙江省臺(tái)州市中心醫(yī)院出生并由新生兒科收治的日齡為2～7 d的112例符合早產(chǎn)兒黃疸干預(yù)標(biāo)準(zhǔn)[6]的早產(chǎn)兒作為觀察組，其中，男60例，女52例，胎齡（34.2±1.9）周，日齡（2.20±1.58） d，出生體質(zhì)量（1.96±0.66） kg，剖宮產(chǎn)36例、順產(chǎn)76例；所有相關(guān)檢查患兒家長(zhǎng)知情并同意。同時(shí)取36例TBiL小于觀察組干預(yù)標(biāo)準(zhǔn)的早產(chǎn)兒作為對(duì)照組，其中，男20例，女16例，胎齡（34.6±1.7）周，日齡（2.22±1.55） d，出生體質(zhì)量（2.08±0.73） kg，剖宮產(chǎn)17例、順產(chǎn)19例。兩組的性別、胎齡、日齡、出生體質(zhì)量及分娩方式等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 剔除標(biāo)準(zhǔn)

有家族聽(tīng)力障礙史者；有圍生期耳毒性藥物用藥史者；分娩時(shí)有窒息缺氧史；患顱內(nèi)感染或顱內(nèi)出血、缺氧及缺血性腦病等；先天畸形或遺傳代謝性疾?。粐?yán)重心肺疾?。粚m內(nèi)感染TORCH（風(fēng)疹病毒、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、弓形蟲(chóng)及其他）等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 標(biāo)本處理 所有病例股靜脈采血3 ml，置無(wú)抗凝劑的干燥管中靜置30 min，標(biāo)本于1 h 內(nèi)3000 r/min離心10 min，吸出血清檢測(cè)TBiL，置-80℃冰箱內(nèi)保存血清1.0 ml用于檢測(cè)NSE及S100B蛋白。溶血標(biāo)本除外。

1.3.2 TBiL、NSE及S100B蛋白的檢測(cè) 重氮法檢測(cè)TBiL，采用日本產(chǎn)AU2700型全自動(dòng)生化分析儀（奧林巴斯公司，日本）進(jìn)行。NSE及S100B蛋白的檢測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附法，儀器為550型酶標(biāo)儀（Bio-RAD 公司，美國(guó)），試劑盒購(gòu)自瑞士CanAg公司，操作按照說(shuō)明書(shū)嚴(yán)格進(jìn)行。

1.3.3 腦干聽(tīng)覺(jué)誘發(fā)電位（BAEP）的檢查 進(jìn)行BAEP檢測(cè)的患兒均經(jīng)家屬知情并同意。儀器為Viking Onset Ⅳ型聽(tīng)覺(jué)腦干誘發(fā)電位檢查儀（Nicolet公司，美國(guó)）。檢測(cè)前常規(guī)清潔外耳道，口服10%的水合氯醛溶液0.5 ml/kg誘導(dǎo)患兒入睡，以擦拭凝膠（abrasive gel）擦去皮膚皮脂后貼上電極，測(cè)試在本院電屏蔽隔聲室中進(jìn)行。檢測(cè)結(jié)果由專業(yè)電測(cè)聽(tīng)?zhēng)焻⒖寂擞掣５萚7-8]的標(biāo)準(zhǔn)評(píng)判：①主波Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ分化不良或消失，重復(fù)性差；②Ⅰ、Ⅲ、Ⅴ波間期或潛伏期>對(duì)照數(shù)據(jù)x±2.5s；③雙側(cè)Ⅴ波潛伏期差值>0.4 ms；④Ⅲ～Ⅴ/Ⅰ～Ⅲ的波間期比值>1；⑤同側(cè)Ⅴ波與Ⅰ波波幅比值<0.5。上述五項(xiàng)其中一項(xiàng)異常，該患兒即屬于BAEP異常。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用x±s表示，采用t檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)、秩和檢驗(yàn)。TBiL與NSE、S100B蛋白之間的關(guān)系采用直線相關(guān)性分析。采用受試者工作曲線（ROC）計(jì)算曲線下面積（AUC）。分析比較TBiL、NSE及S100B蛋白對(duì)預(yù)測(cè)BAEP是否異常采用Youden指數(shù)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組TBiL、NSE、S100B蛋白含量的比較

觀察組的TBiL水平、NSE和S100B蛋白含量明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表1）。

2.2 相關(guān)性分析

觀察組NSE與TBiL呈正相關(guān)（r=0.348，P=0.012），S100B蛋白與TBiL呈正相關(guān)（r=0.601，P=0.019）。

2.3 BAEP的檢測(cè)結(jié)果

觀察組共有63例患兒接受BAEP檢測(cè)，其中BAEP異常組34例，BAEP正常組29例。BAEP異常組TBiL水平與BAEP正常組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=1.077，P=0.727）；BAEP異常組NSE及S100B蛋白含量均明顯高于BAEP正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）（表2）。說(shuō)明在診斷早產(chǎn)兒膽紅素腦損傷時(shí)NSE及S100B蛋白較TBiL有較高的準(zhǔn)確性，也說(shuō)明僅靠TBiL水平測(cè)定作為早產(chǎn)兒膽紅素血癥干預(yù)的標(biāo)準(zhǔn)是不足的。

2.4 TBiL、NSE、S100B蛋白的ROC分析結(jié)果

以BAEP檢測(cè)為金標(biāo)準(zhǔn)，TBiL、NSE及S100B蛋白檢測(cè)的靈敏度及特異度比較如圖1，其中NSE的ROC最接近左上角。NSE和S100B蛋白的ROC中AUC值分別為0.822及0.813，遠(yuǎn)大于TBiL的0.433。根據(jù)TBiL水平判斷BEAP的異常差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.727），說(shuō)明僅靠TBiL水平預(yù)測(cè)早產(chǎn)兒膽紅素血癥腦損傷的發(fā)生是不可靠的。NSE、S100B蛋白預(yù)測(cè)膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的臨界點(diǎn)分別為110.56、3.606 μg/L，NSE、S100B蛋白、TBiL預(yù)測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的靈敏度分別為91.00%、88.67%、53.47%，特異度分別為78.46%、70.13%、42.88%，NSE、S100B蛋白的靈敏度與特異度均顯著高于TBiL（P=0.003），且NSE檢測(cè)的靈敏度和特異度略優(yōu)于S100B蛋白。

3 討論

高膽紅素血癥是新生兒期的常見(jiàn)病。目前認(rèn)為，高膽紅素血癥可引起心臟、肝腎等多臟器損傷，其主要危害是對(duì)于神經(jīng)系統(tǒng)，特別是中樞神經(jīng)系統(tǒng)（主要是聽(tīng)力的損害）的毒性作用。膽紅素對(duì)中樞神經(jīng)的毒性一般分為聚集、結(jié)合、沉淀三個(gè)步驟，其中前兩個(gè)步驟對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損害是可逆的，而沉淀對(duì)神經(jīng)細(xì)胞的損害是不可逆的，此時(shí)患兒可出現(xiàn)典型的神經(jīng)系統(tǒng)異常癥狀即核黃疸。而核黃疸癥狀一旦發(fā)生，出現(xiàn)后遺癥的可能性極大。目前臨床上主要以TBiL的水平為基礎(chǔ)，制訂新生兒高膽紅素血癥的干預(yù)與治療方案，同時(shí)用膽紅素動(dòng)態(tài)曲線監(jiān)測(cè)TBiL的變化。但膽紅素引起的腦損傷存在個(gè)體差異，TBiL水平的高低與腦損傷并不一致，特別是對(duì)早產(chǎn)的低體重兒和超低出生體重兒，其生理范圍的TBiL水平也有發(fā)生膽紅素腦病的危險(xiǎn)性，而在較高水平時(shí)不一定發(fā)生腦損傷[9-11]。隨著對(duì)新生兒高膽紅素血癥研究的深入，如何有效判斷及監(jiān)測(cè)高膽紅素血癥患兒，特別是早產(chǎn)兒腦細(xì)胞的損傷和中樞神經(jīng)毒性成為重要的問(wèn)題。由于高膽紅素血癥引起的腦損傷及膽紅素腦病缺乏早期的臨床特異度表現(xiàn)，許多早產(chǎn)兒在出現(xiàn)膽紅素腦病典型癥狀前已經(jīng)發(fā)生了神經(jīng)毒性損傷，導(dǎo)致治療的滯后性。因此臨床醫(yī)師迫切需要找到一些更為敏感及客觀的指標(biāo)，判斷新生兒，尤其是早產(chǎn)兒體內(nèi)的膽紅素是否對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生損傷作用及損傷程度，以便盡早發(fā)現(xiàn)并祛除高危因素，減少后遺癥的發(fā)生。

通過(guò)膽紅素神經(jīng)毒性的研究可知，膽紅素在低濃度即可誘發(fā)腦損傷，且在腦損傷的早期可表現(xiàn)為神經(jīng)細(xì)胞的代謝異常，因此檢測(cè)高膽紅素血癥患兒血漿中某些特異性神經(jīng)生化指標(biāo)的變化，對(duì)于早期發(fā)現(xiàn)亞臨床型腦損傷可能具有一定的意義[12-13]。本研究借鑒國(guó)內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)[14-16]，嘗試以NSE、S100B蛋白這兩種蛋白作為膽紅素腦損傷的標(biāo)志物，進(jìn)行高膽紅素血癥與早產(chǎn)兒腦損傷的相關(guān)性研究。NSE是一種糖酵解酶，存在于神經(jīng)元及神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)中，NSE是神經(jīng)元損傷非常敏感的標(biāo)志物[16]。當(dāng)神經(jīng)元細(xì)胞受損時(shí)，胞質(zhì)中的NSE釋放并進(jìn)入腦脊液中。在血-腦脊液屏障受損或發(fā)育不成熟的情況下，腦脊液中的NSE可進(jìn)入血液中，使血中NSE升高。S100B蛋白主要分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的星形細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞，腦干和小腦核已有一定分布。它主要由腦內(nèi)活化的膠質(zhì)細(xì)胞分泌，是星形膠質(zhì)細(xì)胞激活的標(biāo)志之一[17-18]。由于NSE主要在神經(jīng)元而S100B蛋白主要分布于星形膠質(zhì)細(xì)胞，當(dāng)膽紅素腦損傷發(fā)生時(shí)，膽紅素對(duì)神經(jīng)細(xì)胞及星形膠質(zhì)細(xì)胞均有一定損害，造成上述兩種蛋白明顯升高，本研究結(jié)果顯示患高膽紅素血癥與未患病的早產(chǎn)兒比較，血清中NSE、S100B蛋白明顯升高且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明NSE、S100B蛋白這兩種蛋白可以作為膽紅素腦損傷的標(biāo)志物。

本研究借鑒相關(guān)文獻(xiàn)[19-20]報(bào)道，選擇BAEP變化作為金標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測(cè)膽紅素對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的損傷，同時(shí)比較NSE、S100B蛋白檢測(cè)與TBiL檢測(cè)的相關(guān)性。結(jié)果顯示TBiL水平在BAEP異常組與BAEP正常組的比較中并差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明單一利用TBiL水平監(jiān)測(cè)早產(chǎn)兒膽紅素腦損傷結(jié)果并不可靠。而NSE及S100B蛋白檢測(cè)結(jié)果顯示，BAEP異常組明顯高于BAEP正常組且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。同時(shí)NSE與S100B蛋白預(yù)測(cè)膽紅素腦損傷AUC分別為0.822、0.813，預(yù)測(cè)高膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的靈敏度為91.00%、88.67%，特異度為78.46%、70.13%，檢測(cè)效能、靈敏度及特異度均高于TBiL，皆具有較好的診斷價(jià)值，是臨床上可以幫助醫(yī)師判斷早產(chǎn)兒膽紅素腦損傷的敏感指標(biāo)，且NSE檢測(cè)的靈敏度和特異度略優(yōu)于S100B蛋白。同時(shí)測(cè)得NSE、S100B蛋白預(yù)測(cè)膽紅素血癥早產(chǎn)兒聽(tīng)力損害的臨界點(diǎn)分別為110.56、3.606 μg/L，這些臨界值對(duì)早期判斷、發(fā)現(xiàn)早產(chǎn)兒膽紅素神經(jīng)系統(tǒng)毒性并予積極干預(yù)有重要意義。