吡格列酮對高脂血癥大鼠主動脈核因子-κB/單核細(xì)胞趨化因子1表達(dá)的影響

劉春麗 商瑋 趙凌杰 姚茹冰 沈思鈺 董曉蕾 趙智明 蔡輝

.基礎(chǔ)研究.

吡格列酮對高脂血癥大鼠主動脈核因子-κB/單核細(xì)胞趨化因子1表達(dá)的影響

劉春麗 商瑋 趙凌杰 姚茹冰 沈思鈺 董曉蕾 趙智明 蔡輝

目的 觀察吡格列酮對高脂血癥大鼠主動脈核因子-κB/單核細(xì)胞趨化因子1(NF-κB/ MCP-1)表達(dá)的影響，并探討其作用機(jī)制。方法 將26只雄性SD大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分成普通飼料對照組(n=9)和高脂飼料組(n=17)，高脂飼料組喂養(yǎng)12周后再按照隨機(jī)數(shù)字表法分成模型組(n=8)和吡格列酮組(n=9)。分組干預(yù)4周后，平行檢測各組血脂、血糖水平，HE染色觀察主動脈組織形態(tài)學(xué)改變，免疫組化法檢測主動脈NF-κB/MCP-1的表達(dá)。結(jié)果 高脂飼料組大鼠喂養(yǎng)12周后，與對照組比較，三酰甘油、總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇水平明顯升高［(1.729±0.472)mmol/ L比(0.929±0.150)mmol/L，(2.981±0.318)mmol/L比(1.831±0.226)mmol/L，(0.499±0.337) mmol/L比(0.195±0.051)mmol/L，均為P＜0.05］；給藥4周后，與模型組相比，吡格列酮組血清三酰甘油、總膽固醇水平明顯降低［(0.731±0.319)mmol/L比(1.534±0.172)mmol/L，(1.720±0.249) mmol/L比(3.084±0.984)mmol/L，均為P＜0.05］，且主動脈內(nèi)皮組織基本完好，偶有脫落，平滑肌增生不明顯。與對照組相比，模型組NF-κB、MCP-1表達(dá)水平也明顯升高(0.506±0.083比0.215± 0.021，0.378±0.100比0.167±0.012，均為P＜0.01)；與模型組相比，吡格列酮組NF-κB、MCP-1表達(dá)水平明顯下降(0.250±0.033比0.506±0.083，0.171±0.012比0.378±0.100，均為P＜0.01)。結(jié)論 吡格列酮能夠減輕高脂血癥對動脈內(nèi)膜的損傷。

吡格列酮； 血脂異常； 動脈粥樣硬化； NF-κB； 單核細(xì)胞化學(xué)吸引蛋白質(zhì)類

近年來對動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)研究的一個重要進(jìn)展就是確立了AS是一種慢性血管炎性疾病，當(dāng)血液流變學(xué)發(fā)生改變以及血管內(nèi)皮細(xì)胞受損時(shí)，血管壁黏附分子分泌劇增，黏附炎性細(xì)胞轉(zhuǎn)變成巨噬細(xì)胞，吸收脂質(zhì)后成為泡沫細(xì)胞。單核細(xì)胞趨化因子1(monocyte chemotactic factor-1，MCP-1)在其上游轉(zhuǎn)錄因子核因子-κB(nuclear factor，NF-κB)作用下，對單核/巨噬細(xì)胞有趨化和激活作用，并使其在粥樣斑塊中大量聚積，吞噬氧化性脂質(zhì)后形成泡沫細(xì)胞，參與血管慢性炎性反應(yīng)，促進(jìn)血管內(nèi)膜增厚，引發(fā)AS。吡格列酮(pioglitazone，TZDs)是一種過氧化酶增殖物激活受體γ (peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPAR-γ)激動劑，能改善胰島素抵抗和糖代謝，常用于糖尿病患者。研究發(fā)現(xiàn)，它可以多靶點(diǎn)作用于心血管系統(tǒng)，但具體機(jī)制尚不明確。本研究通過高脂飲食建立高脂血癥大鼠AS模型，并行吡格列酮干預(yù)，觀察其對高脂血癥大鼠主動脈NF-κB/MCP-1表達(dá)水平的影響，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

出生21 d SD(Sprague Dawley)雄性健康大鼠，體質(zhì)量55～68 g，由南京軍區(qū)南京總醫(yī)院動物實(shí)驗(yàn)中心提供［實(shí)驗(yàn)動物使用許可證號SYXK(蘇)2003-0032］。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)藥品和試劑

三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。鹽酸吡格列酮片(15 mg/片)由杭州中美華東制藥生產(chǎn)，批號:081103。SP雙染試劑盒由福州邁新生物科技有限公司生產(chǎn)，批號:kit-9999。蘇木素染色液購自南京建成公司，批號:D005。兔抗人NF-κB-p65一抗購自Santa Cruz公司，批號:sc-114。兔抗大鼠多克隆抗體MCP-1購自武漢博士德生物技術(shù)有限公司，批號:BA1255。中性樹膠購自福州邁新生物科技有限公司，批號:DAB-0033。多聚賴氨酸購自福州邁新生物科技有限公司，批號:GLU-0041，用蒸餾水配制成10%多聚賴氨酸。二甲苯、甲醇、枸櫞酸三鈉等其他試劑，均為國產(chǎn)分析純。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

組織切片機(jī)，美國Reichert HistoSTAT；孵箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號:THZ-312；顯微鏡，日本Nikon，型號:E200；天平，德國賽多利斯，型號: E200；耐高溫塑料染色架，福州邁新，型號:RAK-2001。Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 高脂血癥大鼠模型的建立及分組 26只實(shí)驗(yàn)用大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為高脂飼料組(n =17)和普通飼料對照組(n=9)，高脂飼料組給予高脂飼料(魚粉3%、豬油12%、雞蛋12%、膽固醇2%、膽酸鹽0.5%、甲硫氧嘧啶0.2%和72.3%的基礎(chǔ)飼料)，對照組給予標(biāo)準(zhǔn)大鼠基礎(chǔ)飼料。分別喂養(yǎng)12周后，通過眼眶靜脈叢取血，平行檢測血脂水平，確定高脂飼料組17只大鼠均符合高脂血癥模型［1］。17只成模高脂血癥大鼠再按照隨機(jī)數(shù)字表法分成模型組(n=8)和吡格列酮組(n=9)，自實(shí)驗(yàn)第13周起，吡格列酮組大鼠給予吡格列酮混懸液(將10 mg.kg-1.d-1量的吡格列酮溶于1.5 ml/100 g體質(zhì)量的蒸餾水中制成混懸液)，連續(xù)灌胃4周，對照組和模型組則給予1.5 ml/100 g體質(zhì)量的蒸餾水灌胃，干預(yù)期間模型組和吡格列酮組繼續(xù)喂飼高脂飼料。每天進(jìn)食量控制在15 g/100 g體質(zhì)量，早、中、晚三餐定時(shí)定量，對照組仍繼續(xù)給予普通飼料。實(shí)驗(yàn)第16周末，禁食24 h后，用20%氯胺酮，以1 ml.100 g-1.d-1體型劑量麻醉后，剪開胸腔，暴露心臟，左心室穿刺取血5 ml，室溫靜置1 h后，3 000 r/min離心5 min，分離血清，置-20℃冰箱保存，待測相關(guān)指標(biāo)；冰盤中分離大鼠主動脈，置液氮中保存，待行免疫組化檢測及組織形態(tài)學(xué)觀察。

1.4.2 血脂測定 TG用TPO-PAP法，TC用CHOD-PAP法，HDL-C和LDL-C用選擇性沉淀法。

1.4.3 主動脈組織形態(tài)學(xué)改變 采用HE染色法，主動脈HE染色由南京凱基生物科技發(fā)展有限公司完成。于大鼠主動脈弓與胸主動脈交界處取材，10%中性甲醛固定，石蠟包埋，水平橫切面制備石蠟切片(厚度4 μm)，蘇木素伊紅(HE)染色、風(fēng)干，中性樹膠封片，×200光鏡下觀察。

1.4.4 主動脈NF-κB/MCP-1表達(dá) 采用SP法，胸主動脈根部取材至10%甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)4 μm切片。二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后，不同濃度乙醇水化，PBS浸泡并清洗數(shù)次后。將放有切片的耐高溫塑料染色架放入盛有抗原修復(fù)緩沖液中，20 min后取出，自然冷卻。PBS浸泡、清洗，3%H2O2-甲醇溶液處理，再次PBS浸泡、清洗后加入一抗100 μl，放至37℃濕盒孵育2 h。相關(guān)處理后，加入HRP標(biāo)記二抗50 μl。新鮮配制的二氨基聯(lián)苯氨(DAB)液進(jìn)行顯色，鏡下觀察染色深淺，染好立即中止，用自來水輕柔沖洗15 min用蒸餾水終止顯色反應(yīng)。蘇木素復(fù)染，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行結(jié)果觀察。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)第12周末各組大鼠血脂、血糖水平

經(jīng)不同飼料喂養(yǎng)12周后，高脂飼料組大鼠的TC、TG、LDL-C水平顯著高于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.05，表1)，高脂飼料組17只大鼠均符合高脂血癥模型［1］。

表1 第12周末兩組大鼠血脂、血糖水平(±s，mmol/L)

表1 第12周末兩組大鼠血脂、血糖水平(±s，mmol/L)

注:與對照組比較，aP＜0.05

組別大鼠(只)血糖TG TC HDL-C LDL-C對照組 9 3.497±0.672 0.929±0.150 1.831±0.226 1.255±0.092 0.195±0.051高脂飼料組17 3.545±0.835 1.729±0.472a2.981±0.318a1.356±0.198 0.499±0.337at值-0.148-6.407-9.608-1.763-3.633 P值＞0.05 0.000 0.000＞0.05 0.035

2.2 實(shí)驗(yàn)第16周末各組大鼠血脂、血糖水平

經(jīng)吡格列酮干預(yù)4周后，實(shí)驗(yàn)第16周末，各組大鼠的TG、TC水平差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.05)。模型組TC和TG水平較對照組升高，吡格列酮組TC和TG水平較模型組降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.05)，見表2。

表2 實(shí)驗(yàn)第16周末各組大鼠血脂、血糖改變(ˉ±s，mmol/L)

表2 實(shí)驗(yàn)第16周末各組大鼠血脂、血糖改變(ˉ±s，mmol/L)

注:與對照組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.05

組別大鼠(只)血糖TG TC HDL-C LDL-C對照組 9 3.423±1.402 0.798±0.195 1.690±0.318 1.187±0.148 0.153±0.050模型組 8 3.753±1.212 1.534±0.172a3.084±0.984a1.168±0.065 0.214±0.124吡格列酮組9 3.480±1.286 0.731±0.319b1.720±0.249b1.204±0.206 0.230±0.079 F值0.152 28.600 14.991 0.124 2.073 P值＞0.05 0.000 0.000＞0.05＞0.05

2.3 各組大鼠主動脈組織形態(tài)學(xué)觀察

對照組血管壁三層結(jié)構(gòu)清晰，血管內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞完整，內(nèi)膜下可見少量泡沫細(xì)胞，中膜厚度均一，中膜平滑肌細(xì)胞與彈力板近似平行相間排列(圖1A)；模型組血管內(nèi)皮連續(xù)性受損，管壁局部向管腔突出，內(nèi)膜有大量脂質(zhì)和泡沫細(xì)胞堆積，部分內(nèi)膜增厚，中層結(jié)構(gòu)紊亂，平滑肌細(xì)胞明顯增生，排列紊亂(圖1B)；吡格列酮組內(nèi)膜未見明顯改變，內(nèi)皮細(xì)胞偶有脫落，內(nèi)膜分布少量泡沫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞尚完整，中膜厚度適中，平滑肌細(xì)胞輕度增生，分布較均勻，形態(tài)基本正常(圖1C)。

2.4 各組大鼠主動脈NF-κB/MCP-1陽性顆粒平均光密度的改變

NF-κB/MCP-1表達(dá)陽性指SP染色后細(xì)胞胞漿中呈現(xiàn)棕黃色顆粒。NF-κB免疫組化染色結(jié)果顯示，在模型組大鼠主動脈細(xì)胞胞漿中有明顯的棕黃色顆粒染色，而吡格列酮組和對照組未見明顯棕色顆粒染色(圖2)。MCP-1免疫組化染色結(jié)果顯示，在模型組大鼠主動脈細(xì)胞胞漿中有明顯的棕黃色顆粒染色，而吡格列酮組和對照組未見明顯棕色顆染色(圖3)。

經(jīng)Image-Pro Plus 6.0圖像分析系統(tǒng)對各組主動脈NF-κB/MCP-1陽性顆粒平均光密度值的定量分析，結(jié)果顯示模型組的NF-κB/MCP-1陽性顆粒平均光密度明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.01)，吡格列酮組則低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P＜0.001)，而與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表3 各組大鼠主動脈NF-κB/MCP-1陽性顆粒平均光密度值改變(ˉ±s)

表3 各組大鼠主動脈NF-κB/MCP-1陽性顆粒平均光密度值改變(ˉ±s)

注:與對照組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.001

組別大鼠(只)NF-κB MCP-1對照組 6 0.215±0.021 0.167±0.012模型組 5 0.506±0.083a0.378±0.100a吡格列酮組6 0.250±0.033b0.171±0.012bF值52.923 25.920 P值0.000 0.000

3 討論

Ross［2］“AS的炎性反應(yīng)損傷”學(xué)說的建立，使人們認(rèn)識到AS是由多因素共同參與的慢性炎性疾病，血脂水平升高和發(fā)生在血管內(nèi)皮細(xì)胞下的炎癥反應(yīng)是動脈粥樣斑塊形成的兩大誘因。NF-κB是調(diào)節(jié)AS血管炎癥相關(guān)基因的重要轉(zhuǎn)錄因子，對AS形成過程中的多種促炎細(xì)胞因子、黏附分子和趨化因子具有關(guān)鍵性的調(diào)控作用。AS血管中NF-κB含量和活性的升高，增強(qiáng)炎性因子的轉(zhuǎn)錄和生成，血管炎癥反應(yīng)程度的加劇和斑塊易損性的增高［3］。

外周血中的單核細(xì)胞向動脈壁內(nèi)膜損傷部位的遷移、聚集、黏附，繼而發(fā)生活化是AS形成早期的中心事件，單核細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附是AS的起始環(huán)節(jié)，MCP-1在這一過程中發(fā)揮重要作用。MCP-1屬于C-C家族，是最具代表性的成員之一，主要參與單核細(xì)胞聚集和遷移，同時(shí)還作用于T細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞等。MCP-1在AS發(fā)生、發(fā)展中作用的發(fā)現(xiàn)來源于對MCP-1基因敲除小鼠的研究。研究發(fā)現(xiàn)MCP-1或其作用受體的基因缺失均能夠減輕LDL受體或載脂蛋白E(apoE)基因缺失小鼠主動脈的脂質(zhì)沉積及AS病變程度［4-5］。Ni等［6］通過N端缺失的MCP-1基因突變子轉(zhuǎn)染apoE基因缺失小鼠后發(fā)現(xiàn)，AS形成明顯增加，當(dāng)抑制基因轉(zhuǎn)染后，顯著減少apoE基因缺失小鼠AS的發(fā)生。在有斑塊形成的小鼠體內(nèi)，抑制基因轉(zhuǎn)染，增加AS斑塊的穩(wěn)定性，因此指導(dǎo)以MCP-1為靶點(diǎn)的抗AS治療。

圖1 各組大鼠主動脈組織形態(tài)學(xué)觀察(HE染色，×200)

圖2 各組大鼠主動脈NF-κB免疫組化染色(光鏡，×400)

圖3 各組大鼠主動脈MCP-1免疫組化染色(光鏡，×400)

血脂紊亂以及氧化型脂質(zhì)沉積，如高膽固醇血癥、氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)水平升高均是AS發(fā)生、發(fā)展及泡沫細(xì)胞形成的重要因素［7］。高脂血癥是AS的重要危險(xiǎn)因素之一，血清中TC含量升高時(shí)，促使氧自由基生成，誘發(fā)內(nèi)皮功能障礙。LDL是TC的主要攜帶者，當(dāng)大量LDL沉積于血管壁時(shí)，可被氧化修飾成的ox-LDL，有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性，能增強(qiáng)MCP-1表達(dá)，趨化單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下，促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成和內(nèi)膜增生，進(jìn)而促進(jìn)AS發(fā)生［3］。

研究發(fā)現(xiàn)，包括MCP-1在內(nèi)的多種因子基因啟動子和增強(qiáng)子中存在一個或多個NF-κB序列，這些基因活化前提是NF-κB激活。在AS過程中，MCP-1表達(dá)受到NF-κB調(diào)控，活化的NF-κB能夠促使MCP-1表達(dá)增強(qiáng)，從而導(dǎo)致單核/巨噬細(xì)胞浸潤，當(dāng)NF-κB激活后由細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)位至胞核，能調(diào)節(jié)MCP-1釋放，促進(jìn)血管炎癥過程的發(fā)生、發(fā)展，導(dǎo)致血管壁損傷，最終引起AS損傷。研究顯示，在正常冠狀動脈中NF-κB表達(dá)很少或幾乎不表達(dá)，而在AS斑塊中，NF-κB高度表達(dá)于斑塊的肩部及纖維帽處，尤其在巨噬細(xì)胞和泡沫細(xì)胞浸潤處表達(dá)最明顯，表明NF-κB可能在單核/巨噬細(xì)胞浸潤及粥樣硬化斑塊形成過程中發(fā)揮重要作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，NF-κB/MCP-1不僅在單核/巨噬細(xì)胞浸潤方面發(fā)揮重要作用，而且也是參與內(nèi)膜增生的重要調(diào)節(jié)因子［5］。

PPAR-γ屬于核內(nèi)激素受體家族成員，也是一種轉(zhuǎn)錄因子。PPAR-γ基因定位于3p25，在內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等許多血管壁細(xì)胞中均有表達(dá)。PPAR-γ不僅能夠誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞分化、凋亡，增加胰島素敏感性［8］，在糖脂代謝的調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用［9］，也對內(nèi)皮組織有抗炎和血管保護(hù)作用［10］。大量的研究結(jié)果提示，PPAR-γ具有抗AS作用和穩(wěn)定粥樣硬化斑塊作用。PPAR-γ激活后可以通過抑制NF-κB途徑發(fā)揮抗炎、抗氧化應(yīng)激以及抗AS作用，從而發(fā)揮保護(hù)血管作用［11-12］。吡格列酮作為PPAR-γ激動劑，通過其特殊配體，發(fā)揮改善胰島素抵抗以及抑制血管炎癥作用［13-14］。吡格列酮能改善多種代謝性和炎癥相關(guān)性心血管疾病，包括血脂異常、內(nèi)皮功能紊亂等。PPARs由于能夠被氧化修飾的脂肪酸選擇性地激活而被看作脈管系統(tǒng)的還原敏感轉(zhuǎn)錄因子［15］，PPARs通過調(diào)節(jié)單核細(xì)胞的基因表達(dá)，在動脈粥樣硬化和再狹窄有關(guān)的炎癥過程中發(fā)揮作用［16］。Kasai等［17］發(fā)現(xiàn)，吡格列酮能通過NF-κB依賴MCP-1途徑，明顯抑制豬冠狀動脈內(nèi)膜增厚，表明吡格列酮可通過降低血糖以外的途徑保護(hù)血管，防止血管內(nèi)皮細(xì)胞過度增生。

本實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠主動脈內(nèi)膜NF-κB/ MCP-1表達(dá)較之對照組明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明高脂喂養(yǎng)造成的高脂血癥能夠誘導(dǎo)主動脈內(nèi)皮NF-κB/MCP-1的表達(dá)，可能與高脂血癥引起機(jī)體嚴(yán)重的氧化應(yīng)激狀態(tài)、細(xì)胞內(nèi)活性氧類增加和激活NF-κB［18］，誘導(dǎo)MCP-1的表達(dá)增高有關(guān)。模型組大鼠內(nèi)膜下及平滑肌層均可見到大量的巨噬細(xì)胞沉積，內(nèi)膜、平滑肌層增生明顯，平滑肌結(jié)構(gòu)紊亂。當(dāng)用吡格列酮干預(yù)后，高脂血癥大鼠主動脈NF-κB/ MCP-1表達(dá)明顯減少，內(nèi)膜下泡沫樣細(xì)胞明顯減少，血管壁結(jié)構(gòu)基本正常，表明吡格列酮能夠通過抑制高脂血癥大鼠主動脈NF-κB/MCP-1表達(dá)，有效抑制內(nèi)膜下單核細(xì)胞聚集、遷移，減少泡沫細(xì)胞形成和血管壁細(xì)胞的異常增生，從而達(dá)到血管保護(hù)的作用。當(dāng)然，本實(shí)驗(yàn)也存在不足之處，如在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方面，樣本量較小，且無陽性藥物對照組，吡格列酮組未設(shè)多個劑量組，檢測方法較單一，這些均可能對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響。

［1］Zhang XM，Wei XB，Wu BJ.Drug Screening Assays for treatment of dyslipidemia and atherosclerosis［M］，Methodology of Pharmacological Experiment，3rd Ed.Beijing:people's medical publishing house，2001，1201-1206.(in Chinese)張岫美，魏欣冰，吳葆杰.調(diào)血脂藥及抗AS藥的篩選［M］//徐叔云，卞如濂，陳修主編.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)，第3版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001，1201-1206.

［2］Ross R.Atherosclerosis—an inflammatory disease［J］.N Engl J Med，1999，340:115-126.

［3］Bai Y，Li J，Wang L，et al.Relationships between expression of Nuclear factor-kappa B and vascular cell adhesion molecule-1 in atherosclerotic plaques of coronary vessels and stability of coronary plaques［J］，Journal of Xinxiang Medical University，2010，27:144-147.(in Chinese)白玉，李晉，王璐，等.核因子-κB與血管細(xì)胞間黏附分子-1在人冠狀動脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)及其與斑塊穩(wěn)定性的關(guān)系［J］.新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27:144-147.

［4］Gu L，Okada Y，Clinton SK，et al.Absence of monocyte chemoattractant protein-1 reduces atherosclerosis in low density lipoprotein receptor-deficient mice［J］.Mol Cell，1998，2: 275-281.

［5］Dawson TC，Kuziel WA，Osahar TA，et al.Absence of CC chemokine receptor-2 reduces atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice［J］.Atherosclerosis，1999，143:205-211.

［6］Ni W，Egashira K，Kitamoto S，et al.New anti-monocyte chemoattractant protein-1 gene therapy attenuates atherosclerosis in apolipoprotein E-knockout mice［J］.Circulation，2001，103: 2096-2101.

［7］Steinberg D.Conner Memorial Lecture.Oxidative modification of LDL and atherogenesis［J］.Circulation，1997，95:1062-1071.

［8］Miller YI，Choi SH，F(xiàn)ang L，et al.Lipoprotein modification and macrophage uptake:role of pathologic cholesterol transport in atherogenesis［J］.Subcell Biochem，2010，51:229-251.

［9］Nicholls SJ，Tuzcu EM，Wolski K，et al.Lowering the Triglyceride/High-Density Lipoprotein Cholesterol Ratio Is Associated With the Beneficial Impact of Pioglitazone on Progression of Coronary Atherosclerosis in Diabetic Patients［J］. J Am Coll Cardiol，2011，57:153-159.

［10］Magnone M，Bruzzone S，Guida L，et al.Abscisic acid released by human monocytes activates monocytes and vascular smooth muscle cell responses involved in atherogenesis［J］.J Biol Chem，2009，284:7808-7818.

［11］Cuzzocrea S，Pisano B，Dugo L，et al.Rosiglitazone，a ligand of the peroxisome proliferator-activated receptor-gamma，reduces acute inflammation［J］.Eur J Pharmacol，2004，483:79-93.

［12］Zoete V，Grosdidier A，Michielin O.Peroxisome proliferatoractivated receptor structures:ligand specificity，molecular switch and interactions with regulators.Biochimica et Biophysica Acta (BBA)［J］.Biochim Biophys Acta，2007，1771:915-925.

［13］Hirano M，Nakamura T，Kitta Y，et al.Rapid improvement of carotid plaque echogenicity within 1 month of pioglitazone treatment in patients with acute coronary syndrome［J］. Atherosclerosis，2009，203:483-488.

［14］Leonhardt W，Pfützner A，Müller J，et al.Effects of pioglitazone and/or simvastatin on low density lipoprotein subfractions in nondiabetic patients with high cardiovascular risk:A sub-analysis from the PIOSTAT study［J］.Atherosclerosis，2008，201:155-162.

［15］Berger JP，Akiyama TE，Meinke PT，et al.PPARs:therapeutic targets for metabolic disease［J］.Trends Pharmacol Sci，2005， 26:244-251.

［16］Argmann CA，Cock TA，Auwerx J.Peroxisome proliferatoractivated receptor gamma:the more the merrier［J］？Eur J Clin Invest，2005，35:82-92.

［17］Kasai T，Miyauchi K，Yokoyama T，et al.Pioglitazone attenuates neointimal thickening via suppression of the early inflammatory response in a porcine coronary after stenting［J］. Atherosclerosis，2008，197:612-619.

［18］Emple RK，Chatterjee VK，O'Rahilly S.PPAR gamma and human metabolic disease［J］.J Clin Invest，2006，116:581-589.

(本文編輯:譚瀟)

.專家答疑.

問：擴(kuò)張型心肌病伴心房顫動，導(dǎo)管消融術(shù)效果如何？

答：心房顫動(房顫)和充血性心力衰竭(心衰)是本世紀(jì)人類面臨的心血管領(lǐng)域兩大挑戰(zhàn)。研究表明，房顫和心衰常同時(shí)存在，房顫首次診斷時(shí)，26%的患者曾伴有或并存心衰，16%的患者可能會發(fā)展為心衰；而心衰首次診斷時(shí)，24%的患者曾伴有或并存房顫，17%的患者以后發(fā)展為房顫，隨著心功能NYHA分級增加，合并房顫的比例也顯著增加。

擴(kuò)張型心肌病心衰合并房顫是心血管疾病治療中的一個難點(diǎn)，隨著人口老齡化和其他心血管疾病的流行，心衰合并房顫的發(fā)生率會逐漸增加。盡管經(jīng)導(dǎo)管消融已經(jīng)從陣發(fā)性房顫進(jìn)展到持續(xù)性房顫，三維標(biāo)測技術(shù)也日臻成熟，但規(guī)范化的藥物治療仍是改善擴(kuò)張型心肌病心衰合并房顫患者癥狀和預(yù)后的基礎(chǔ)，包括ACEI/ARB、β受體阻滯劑以及抗凝治療等。對于藥物治療效果不滿意的患者，非藥物治療是重要的替代治療方法。已有的研究結(jié)果提示，經(jīng)導(dǎo)管射頻消融轉(zhuǎn)復(fù)并維持竇性心律可明顯改善心衰合并房顫患者的癥狀和心功能狀況。由于這類患者的房顫類型多數(shù)為持續(xù)性，并常有多種合并癥，醫(yī)療中心和臨床醫(yī)師的房顫消融經(jīng)驗(yàn)對手術(shù)的療效和安全性至關(guān)重要?？赡苡绊憣?dǎo)管消融房顫成功率的因素包括患者心衰的原因及程度、心臟大小、房顫持續(xù)時(shí)間、患者年齡以及是否合并其他疾病等，應(yīng)綜合評估手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)及患者可能的獲益。

Haissaguerre等早在2004年就報(bào)告了房顫合并心衰導(dǎo)管消融的成功率與單純房顫相比無顯著降低，心衰患者房顫導(dǎo)管消融術(shù)后左心室功能、左心室內(nèi)徑、運(yùn)動耐量、癥狀和生活質(zhì)量均顯著改善。Boris和Chen等也報(bào)道了導(dǎo)管消融能明顯改善房顫伴左心功能不全患者的心功能。2008年的PABA-CHF研究表明，房顫導(dǎo)管消融組在左心室EF值﹑6 min步行距離和生活質(zhì)量評分方面均明顯優(yōu)于房室結(jié)消融+雙心室起搏組。但由于各臨床試驗(yàn)的樣本數(shù)較少，且隨訪的時(shí)間并不很長，故而有關(guān)導(dǎo)管消融對擴(kuò)張型心肌病心衰患者預(yù)后的影響尚有待進(jìn)一步證實(shí)。

擴(kuò)張型心肌病的房顫患者，合并心衰、心臟擴(kuò)大，是血栓栓塞并發(fā)癥的高危人群，應(yīng)加強(qiáng)和規(guī)范圍術(shù)期的抗凝治療，防止并發(fā)癥的發(fā)生。術(shù)前應(yīng)常規(guī)采用華法林抗凝3周以上，使國際標(biāo)準(zhǔn)化比率(INR)維持在2.0～3.0；術(shù)后繼續(xù)應(yīng)用華法林抗凝不少于3個月。

由于患者心功能狀態(tài)明顯減退，在房顫導(dǎo)管消融的圍術(shù)期應(yīng)加強(qiáng)藥物治療以控制心衰、防止在手術(shù)過程中突發(fā)心衰急性發(fā)作，影響手術(shù)的順利進(jìn)行。因此，患者在術(shù)前和術(shù)后均應(yīng)接受充分的藥物治療，包括利尿劑、ACEI或ARB以及卡維地洛等，改善心功能。建議使用8 mm溫控射頻導(dǎo)管進(jìn)行消融，而不是使用常規(guī)的冷鹽水灌注導(dǎo)管，以防止大量鹽水進(jìn)入體內(nèi)而誘發(fā)急性左心衰。由于房顫時(shí)間長、心功能差、左心房明顯增大、心肌纖維化等改變常較明顯，術(shù)中需要進(jìn)行的消融范圍大，在隔離肺靜脈的基礎(chǔ)上，有可能還需要增加消融線或進(jìn)行CFAE電位消融。術(shù)中應(yīng)密切觀察患者的情況，包括生命體征和癥狀，尤其是患者心功能差，加之術(shù)中應(yīng)用鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜藥物，術(shù)程中有可能出現(xiàn)血壓偏低，并及時(shí)透視心影以排除心包填塞等可能。長時(shí)間高功率消融也可能造成皮膚低溫燙傷，表現(xiàn)為背部電極板處皮膚破損滲液。

總之，對擴(kuò)張型心肌病合并房顫的患者，實(shí)施導(dǎo)管消融手術(shù)的風(fēng)險(xiǎn)高于其他房顫患者，且手術(shù)成功率亦相對較低，因此，術(shù)前要與患者及其家屬進(jìn)行充分交流、溝通。

（北京大學(xué)人民醫(yī)院心臟中心 張海澄）

Influence of Pioglitazone on NF-κB/MCP-1 expression in hyperlipidem ia rat

Liu Chunli，Shang Wei，Zhao Lingjie，Yao Rubing，Shen Siyu，Dong Xiaolei，Zhao Zhiming，Cai Hui.
Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command，PLA，Nanjing 210002，China

Objective To investigate the influence of pioglitazone on expressions of NF-κB/MCP-1 in aorta of rats with hyperlipidemia.M ethods The 26 male SD rats were divided into control group(n=9) and high-fat diet group(n=17)according to random number table.Rats in high-fat diet group fed with hypercholesterol diet for 12 weeks，then divided into model group(n=8)and pioglitazone treated group(n =9)according to random number table.4 weeks later，serum lipid level and blood glucose of all rats were measured and expressions of NF-κB/MCP-1 in aorta of all rats were analyzed by immunohistochemical method.Results After feeding for 12 weeks，serum lipid levels of high-fat diet group were significantly higher than control group［(1.729±0.472)mmol/L vs.(0.929±0.150)mmol/L for TG，(2.981± 0.318)mmol/L vs.(1.831±0.226)mmol/L for TC and(0.499±0.337)mmol/L vs.(0.195±0.051) mmol/L for LDL-C，all P＜0.05］，and aortic endothelial tissue was largely intact，occasionally dropping，proliferation of smooth muscle cells was not obvious.Intervention with pioglitazone for 4 weeks，compared with model group，serum levels of TC and TG in pioglitazone treated group were significantly decreased［(0.731±0.319)mmol/L vs.(1.534±0.172)mmol/L and(1.720±0.249)mmol/L vs.(3.084± 0.984)mmol/L，both P＜0.05］，and expressions of NF-κB/MCP-1 were also reduced significantly［(0.506±0.083)vs.(0.215±0.021)and(0.378±0.100)vs.(0.167±0.012)，both P＜0.01］. Compared with control group，expressions of NF-κB/MCP-1 in pioglitazone treated group were significantly decreased［(0.250±0.033)vs.(0.506±0.083)and(0.171±0.012)vs.(0.378±0.100)，both P＜0.01］.Conclusions Pioglitazone can inhibit arterial intimal injury in rats with hyperlipidemia.

Pioglitazone； Dyslipidemias； Atherosclerosis； NF-kappa B； Monocyte chemoattractant proteins

Cai Hui，Email:caihuiphd@163.com

2013-08-12)

10.3969/j.issn.1007-5410.2014.02.013

210002中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合科

蔡輝，電子信箱:caihuiphd@163.com