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    自體CIK 細(xì)胞治療肝郁脾虛型慢性乙型肝炎療效觀察

    2014-03-23 02:24:56王少揚(yáng)陳德良
    關(guān)鍵詞:回輸肝郁證型

    陳 劍 王少揚(yáng)△ 王 賢 陳德良 林 文

    1.福建中醫(yī)藥大學(xué)教學(xué)醫(yī)院南京軍區(qū)福州總醫(yī)院感染科(福建 福州,350003) 2.福清市醫(yī)院感染科

    肝郁脾虛是CHB 患者中最常見(jiàn)的證型,已有研究表明肝郁脾虛型CHB 患者細(xì)胞免疫功能明顯低下,存在明顯的免疫耐受。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)細(xì)胞具有非人類(lèi)主要組織相容性復(fù)合體限制性、高增殖性、高細(xì)胞毒性以及細(xì)胞來(lái)源豐富等諸多特點(diǎn),目前已應(yīng)用于治療CHB,且已有報(bào)道取得一定療效[1]。本研究將CIK 細(xì)胞治療與中醫(yī)辨證分型相結(jié)合,觀察肝郁脾虛型CHB 患者接受CIK 細(xì)胞治療的療效及不良反應(yīng),現(xiàn)報(bào)道如下。

    1 資料與方法

    1.1 病例收集 收集2011年12 月-2012年12 月南京軍區(qū)福州總醫(yī)院感染科門(mén)診和住院的初治HBeAg 陽(yáng)性CHB 患者72 例,其中男52 例,女20 例,年齡19~56 (29.64 ±9.63)歲。診斷符合2010年《慢性乙型肝炎防治指南》中所制定的標(biāo)準(zhǔn)[2]。并排除HAV、HCV、HDV 和HIV 等病毒合并或重疊感染,以及酒精性肝炎、自身免疫性肝炎和其他肝臟疾病造成的肝損害、合并其他重要臟器嚴(yán)重疾病者。中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)符合1991年中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)內(nèi)科肝病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)制定的《病毒性肝炎中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)》[3]中“肝郁脾虛證”辨證要點(diǎn)。

    1.2 分組及治療 按照就診先后順序隨機(jī)將患者分為兩組,治療組42 例,接受CIK 細(xì)胞治療,但不采取保肝治療或聯(lián)合其他抗病毒措施;對(duì)照組30 例,采用口服恩替卡韋分散片(正大天晴公司生產(chǎn))0.5mg,每日1 次。療程24 周。兩組患者均簽署知情同意書(shū)。

    1.3 CIK 細(xì)胞的培養(yǎng)、制備和回輸 使用成分血細(xì)胞分離機(jī)采集患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)約1~4 ×109個(gè),在不同時(shí)間加人一定劑量的重組人干擾素γ (200U/ml)、白細(xì)胞介素(IL)-2 (1000U/m1)和抗CD3 單克隆抗體(50ng/ml)等各種細(xì)胞因子(北京新明泰利科技有限公司),37℃、5%CO2,懸浮培養(yǎng)。每例患者CIK 細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中均進(jìn)行多次真菌、細(xì)菌和支原體檢測(cè),結(jié)果均為陰性,確保了細(xì)胞培養(yǎng)和回輸?shù)陌踩A魇郊?xì)胞儀檢測(cè)CD3+CD56+細(xì)胞數(shù)占整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)的比例在30% 以上,CD3+細(xì)胞數(shù)所占比例在90%以上。培養(yǎng)10d 后,將CIK 細(xì)胞分4 次隔天回輸紿患者,共計(jì)12d。每次的CIK 細(xì)胞經(jīng)離心、洗滌和重懸浮后以0.9%氯化鈉注射液制各成體積為400~500ml 的細(xì)胞懸液回輸給患者,細(xì)胞數(shù)>1 ×109。

    1.4 觀察項(xiàng)目 收集癥候資料,進(jìn)行辨證。在治療前及治療結(jié)束后的第4、12、24 周分別檢測(cè)血常規(guī)、血生化指標(biāo)、HBV 血清標(biāo)志物及HBV DNA 水平。記錄不良反應(yīng)。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 用PASW18.0 軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。組間計(jì)量數(shù)據(jù)比較采用配對(duì)t 檢驗(yàn),率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 治療前兩組患者各項(xiàng)指標(biāo)基線水平比較 治療前兩組各項(xiàng)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 均>0.05),見(jiàn)表1。

    表1 治療前兩組患者各項(xiàng)指標(biāo)基線水平比較

    2.2 兩組患者肝功能的變化 治療后第24 周,ALT 的復(fù)常率治療組為69.04% (29/42),對(duì)照組70.0% (21/30),χ2=0.007,P=0.931;AST 的復(fù)常率治療組83.33% (35/42),對(duì)照組76.67% (23/30),χ2=0.497,P=0.481。兩組患者治療后肝功能復(fù)常率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2.3 兩組患者HBV DNA 變化 見(jiàn)表2。

    表2 兩組患者治療后第4、12、24 周HBV DNA低于檢測(cè)下限情況比較[n (%)]

    2.4 兩組患者HBeAg 變化情況 見(jiàn)表3。

    表3 兩組患者治療后第4、12、24 周HBeAg 變化情況比較[n (%)]

    2.5 不良反應(yīng)觀察 治療組在CIK 細(xì)胞的回輸過(guò)程中及回輸后,42 例中有35 例存在不同程度的發(fā)熱,體溫波動(dòng)在37.3℃~38.6℃之間,一般在回輸后1~2h 出現(xiàn),持續(xù)時(shí)間為2~8h,伴有輕度的頭痛或關(guān)節(jié)酸痛,多數(shù)患者在不用解熱鎮(zhèn)痛藥的情況下自行緩解。對(duì)照組患者服藥過(guò)程中無(wú)不適反應(yīng)。所有患者治療及后續(xù)隨訪過(guò)程中血常規(guī)和腎功能等未出現(xiàn)異常變化。

    3 討論

    CIK 細(xì)胞是經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)的一群異質(zhì)性殺傷細(xì)胞,具有很強(qiáng)的抗腫瘤和抗病毒功能[4]。CIK 細(xì)胞中的主要效應(yīng)細(xì)胞為CD3+CD56+細(xì)胞,其在正常人外周血中極少,僅1%~5%。有研究表明,在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子刺激培養(yǎng)后,CD3+CD56+細(xì)胞可迅速增多,可較培養(yǎng)前升高1000 倍以上,CD3+CD8+細(xì)胞也可從培養(yǎng)前的20%上升到60%~80%[5]。隨著技術(shù)的成熟,自體CIK 細(xì)胞用于CHB 治療,國(guó)內(nèi)外已有諸多文獻(xiàn)報(bào)道取得了比較可喜的療效,但仍有部分患者存在療效不佳甚至無(wú)明顯應(yīng)答的情況。已有研究表明CHB 患者以肝郁脾虛、濕熱中阻兩種證型為主[6],而且肝郁脾虛型患者細(xì)胞免疫功能較濕熱中阻型明顯低下,存在明顯免疫耐受,主要表現(xiàn)為樹(shù)突狀細(xì)胞表面抗原提呈分子表達(dá)減少、T 細(xì)胞增殖能力低下,從而不能誘導(dǎo)活化細(xì)胞毒性T 淋巴細(xì)胞(CTL)等免疫活性細(xì)胞清除病毒[7]。故我們將肝郁脾虛證CHB 患者作為研究對(duì)象,通過(guò)將提取患者PBMC 后進(jìn)行體外培養(yǎng)誘導(dǎo)、擴(kuò)增成為CIK 細(xì)胞后回輸,以此來(lái)調(diào)節(jié)患者的免疫功能,進(jìn)而起到治療CHB 的作用。結(jié)果表明治療后24 周內(nèi)CIK 細(xì)胞治療組與ETV 對(duì)照組相比,抑制病毒復(fù)制作用較對(duì)照組差,但在肝功能改善方面療效相當(dāng);而且治療組HBeAg 陰轉(zhuǎn)率及血清轉(zhuǎn)換率明顯優(yōu)于對(duì)照組;兩組治療過(guò)程中均無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)。但是在本研究觀察過(guò)程中發(fā)現(xiàn)CIK 細(xì)胞治療也存在相當(dāng)一部分患者療效欠佳,病毒學(xué)應(yīng)答不明顯及個(gè)別肝功能指標(biāo)惡化情況。這些患者與療效佳者雖同屬肝郁脾虛證型,但體質(zhì)上有所偏差,比如在辨證上這些患者均符合“脅肋脹痛、腹脹便溏”兩個(gè)主癥,但有的患者以脅肋脹痛明顯(肝郁為主),有的患者以便溏為主(脾虛明顯),這樣的體質(zhì)差別就可能會(huì)導(dǎo)致療效的迥異。以往有關(guān)自體CIK 細(xì)胞治療CHB 的研究均未涉及中醫(yī)中藥方面,而中醫(yī)中藥在治療CHB 方面具有一定的優(yōu)勢(shì),能否通過(guò)中醫(yī)中藥來(lái)增強(qiáng)CIK 細(xì)胞療效成為我們?cè)O(shè)想的思路。下一步我們將在前期工作的基礎(chǔ)上,把自體CIK 治療CHB 與中醫(yī)中藥相結(jié)合,從而為中西醫(yī)結(jié)合治療慢性乙型肝炎提供新的思路和方案。

    [1]王少揚(yáng),劉海周,馬衛(wèi)閩,等.CIK 細(xì)胞治療慢性乙型肝炎的療效觀察[J].傳染病信息,2011,24 (2):103 -105.

    [2]中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì),中華醫(yī)學(xué)會(huì)感染病學(xué)分會(huì).慢性乙型肝炎防治指南[J].中華臨床感染病雜志,2011,4 (1):1 -13.

    [3]中國(guó)中醫(yī)藥學(xué)會(huì)內(nèi)科肝病專(zhuān)業(yè)委員會(huì)第四次學(xué)術(shù)會(huì)議.病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)(試行)[J].中醫(yī)雜志,1992,(5):39 -40.

    [4]Ma YJ,He M,Han JA,et al.A Clinical study of HBsAg‐activated dendritic cells and cytokine‐induced killer dells during the treatment for chronic hepatitis B [J].Scandinavian journal of immunology,2013,78 (4):387 -393.

    [5]Schmidt-Wolf GD,Negrin RS,Schmidt-Wolf Igh.Activated T cells and cytokine-induced CD3+CD56+killer cells [J].Annals of hematology,1997,74 (2):51 -56.

    [6]王鳳云,唐旭東,劉燕玲,等.慢性乙型肝炎患者中醫(yī)證型特點(diǎn)及分布差異[J].世界華人消化雜志,2008,16 (7):716 -720.

    [7]何芳,孫克偉,彭建平.慢性HBV 感染不同免疫狀態(tài)肝郁脾虛證與肝膽濕熱證患者外周血樹(shù)突狀細(xì)胞功能研究[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,2011,31 (11):1491 -1495.

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