上皮性卵巢癌組織Snail與Axl的表達(dá)及其意義

，，

(1 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院婦產(chǎn)科學(xué)教研室,山東 青島 266021 2 煙臺(tái)山醫(yī)院產(chǎn)科; 3 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院婦科)

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的三大惡性腫瘤之一，其死亡率居惡性腫瘤之首。卵巢癌病理種類(lèi)繁多，其中上皮性卵巢癌占所有類(lèi)型卵巢癌的90%。侵襲、轉(zhuǎn)移是目前卵巢癌治療的一大難題，其發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制尚不完全清楚。近年來(lái)大量研究結(jié)果顯示，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)與腫瘤的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail及受體酪氨酸激酶Axl均參與EMT過(guò)程[1-2]，并且兩者之間可能通過(guò)某種信號(hào)通路相互聯(lián)系。本文通過(guò)檢測(cè)上皮性卵巢癌組織中Snail、Axl的表達(dá)及分析其與臨床病理特征之間的關(guān)系，探討Snail、Axl兩種蛋白在上皮性卵巢癌組織表達(dá)的意義。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本及來(lái)源

2011年7月—2012年10月，選取青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院手術(shù)切除、經(jīng)病理檢查確診為上皮性卵巢癌組織標(biāo)本56例，病人年齡25～76歲，平均53.4歲。術(shù)前均未行輔助放化療。按照FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ期10例，Ⅱ期4例，Ⅲ期33例，Ⅳ期9例；分化程度：高分化11例，中分化18例，低分化27例；病理類(lèi)型：漿液性腺癌29例，黏液性腺癌11例，子宮內(nèi)膜樣腺癌12例，透明細(xì)胞癌3例，混合性癌1例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移31例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例。

隨機(jī)選取同期卵巢良性上皮性腫瘤組織56例及正常卵巢組織28例作為對(duì)照，其平均年齡分別是51.28、52.43歲。所有標(biāo)本均經(jīng)40 g/L甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋，4 μm厚度連續(xù)切片。

1.2 主要試劑

兔抗人Snail多克隆抗體、兔抗人Axl多克隆抗體(購(gòu)自美國(guó)Abcam公司)，配制成1∶100、1∶50溶液；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗兔IgG，購(gòu)自上海生工有限公司，配制成1∶100溶液；DAB酶底物顯色試劑盒，購(gòu)自福建邁新試劑公司；PBS緩沖液(pH 7.4)、二甲苯、枸櫞酸鹽抗原修復(fù)液、多濃度梯度乙醇、過(guò)氧化氫等試劑由為青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬煙臺(tái)毓璜頂醫(yī)院病理科提供。

1.3 Snail、Axl蛋白表達(dá)檢測(cè)

采用免疫組化SP法，按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，用已知的陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照，用PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

Snail蛋白主要定位于細(xì)胞核，出現(xiàn)黃色顆粒狀染色為陽(yáng)性；Axl蛋白主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞漿黃色染色為陽(yáng)性。綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞百分率確定表達(dá)情況。①染色強(qiáng)度計(jì)分：無(wú)著色或染色不清，0分；淺黃色，1分；黃色，2分；棕黃色3分。②陽(yáng)性細(xì)胞百分率計(jì)分：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞，0分；陽(yáng)性細(xì)胞1%～25%，1分；陽(yáng)性細(xì)胞26%～50%，2分；陽(yáng)性細(xì)胞51%～75%，3分；陽(yáng)性細(xì)胞>75%，4分。每張切片計(jì)分等于染色強(qiáng)度計(jì)分乘以陽(yáng)性細(xì)胞百分率計(jì)分，以0～2分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，數(shù)據(jù)間比較均采用χ2檢驗(yàn)或者Fisher’s精確概率法，相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 卵巢組織中Snail、Axl表達(dá)比較

Snail在上皮性卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為67.9%，其表達(dá)明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織(25.0%)及正常卵巢組織(21.4%),差異有顯著性(χ2=20.677、16.132,P<0.01)。Axl在上皮性卵巢癌組織、卵巢良性上皮性腫瘤組織和正常卵巢組織陽(yáng)性表達(dá)率分別是58.9%、7.1%、4.0%，差異有顯著性(χ2=31.226、20.596,P<0.05)。

2.2 上皮性卵巢癌組織中Snail、Axl的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

Snail和Axl在FIGO分期晚、分化程度低、原發(fā)灶及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌組織高表達(dá)，差異有顯著性(χ2=2.635～12.143，P<0.05)；二者表達(dá)高低與病理類(lèi)型無(wú)關(guān)(P>0.05)。見(jiàn)表1。

2.3 上皮性卵巢癌組織Snail與Axl表達(dá)的相關(guān)性

本文38例Snail表達(dá)陽(yáng)性的上皮性卵巢癌組織中，33例Axl表達(dá)陽(yáng)性。Spearman等級(jí)分析顯示，Snail及Axl兩種蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.692，P<0.05)。

表1上皮性卵巢癌組織Snail、Alx的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系(例)

臨床病理參數(shù)nSnail表達(dá)+-χ2值P值A(chǔ)xl表達(dá)+-χ2值P值FIGO分期 Ⅰ～Ⅱ1468410 Ⅲ～Ⅳ4232105.3490.02629137.1080.009分化程度 G1113829 G218117108 G32723412.1430.00221611.5940.003發(fā)生部位 原發(fā)灶5638183323 轉(zhuǎn)移灶423574.1390.0343394.2110.032淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有31256238 無(wú)2513125.2060.02310156.6860.010病理類(lèi)型 漿液性乳頭狀腺癌29218209 黏液性腺癌117456 子宮內(nèi)膜樣腺癌128475 透明細(xì)胞癌32112 混合性癌1010.9940.331012.6350.105

3 討 論

研究顯示，EMT在胚胎發(fā)育、器官纖維化及惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[3]。EMT發(fā)生時(shí)會(huì)引起上皮細(xì)胞的極性喪失、細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞間的黏附力減低、運(yùn)動(dòng)轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)，從而轉(zhuǎn)變成間質(zhì)細(xì)胞。近年來(lái)大量研究顯示，EMT是引起惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的重要機(jī)制，并且在上皮性腫瘤早期階段引起腫瘤浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移[4]。

Snail是鋅指轉(zhuǎn)錄因子家族中的一員，是一種轉(zhuǎn)錄抑制因子。Snail可通過(guò)與E-cadherin的E-box區(qū)域結(jié)合抑制E-cadherin表達(dá)，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的黏附力降低，遷移能力增強(qiáng)而促進(jìn)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移[5]。BLECHSCHMIDT等[6]研究顯示， 在卵巢癌的原發(fā)灶中Snail表達(dá)增高，E-cadherin表達(dá)下調(diào)，這一現(xiàn)象在轉(zhuǎn)移灶中更為明顯，并且二者的表達(dá)與卵巢癌的臨床病理分期及預(yù)后呈正相關(guān)。本文研究結(jié)果與其一致，Snail的表達(dá)與上皮性卵巢癌臨床分期及發(fā)生部位有關(guān)， FIGO分期越晚，Snail的陽(yáng)性表達(dá)率越高，且轉(zhuǎn)移灶中的陽(yáng)性表達(dá)率高于原發(fā)灶。有研究顯示，Snail在正常胃黏膜組織中低表達(dá)，在組織分化級(jí)別低、臨床分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及脈管侵犯的胃癌組織中表達(dá)增強(qiáng)，并且與胃癌的組織分化程度、臨床分期、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及血管侵犯呈正相關(guān)[7]。本文的研究結(jié)果顯示，Snail蛋白在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)高于卵巢良性上皮性腫瘤及正常卵巢組織，差異有顯著性，提示Snail可能在上皮性卵巢癌發(fā)生過(guò)程中起重要作用，Snail可能成為上皮性卵巢癌和卵巢良性上皮性腫瘤鑒別診斷的參考指標(biāo)。本文結(jié)果顯示，Snail在FIGO分期晚、組織分化級(jí)別低及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌組織中高表達(dá)，而與其病理類(lèi)型無(wú)關(guān)。說(shuō)明Snail的高表達(dá)可能與上皮性卵巢癌的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移及不良預(yù)后有關(guān)。Snail有望成為判斷卵巢癌預(yù)后的指標(biāo)之一。

Axl是一種受體酪氨酸激酶，存在于細(xì)胞膜上，可通過(guò)活化PI3K/Akt、MAPK、NF-κB、STAT3等多種信號(hào)途徑參與腫瘤的形成及侵襲、轉(zhuǎn)移。SUN等[8]研究顯示，Axl及其配體Gas6在人類(lèi)子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織。本文研究結(jié)果顯示，Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率高于良性上皮性卵巢腫瘤組織及正常卵巢組織。李玉春[9]研究顯示，上皮性卵巢癌組織和血清Axl濃度明顯高于卵巢良性上皮性腫瘤組織和健康對(duì)照組，且上皮性卵巢癌病人術(shù)前血清Axl濃度與組織Axl蛋白表達(dá)有一定關(guān)系。說(shuō)明Axl高表達(dá)可能提示腫瘤發(fā)生惡變，血清Axl的濃度測(cè)定對(duì)于鑒別卵巢腫瘤良惡性有一定的價(jià)值,可能會(huì)成為診斷上皮性卵巢癌新的腫瘤標(biāo)志物。 RANKIN等[10]研究結(jié)果也顯示，Axl在正常卵巢組織中不表達(dá)，在FIGO分期晚的卵巢癌組織及轉(zhuǎn)移灶中較高表達(dá)。SHIEH 等[11]研究顯示，Axl表達(dá)高低與腫瘤侵襲能力大小密切相關(guān)。本文結(jié)果顯示，臨床分期晚、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的上皮性卵巢癌組織中Axl高表達(dá)，并隨著組織分化級(jí)別的降低Axl的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，且在腫瘤原發(fā)病灶的表達(dá)高于轉(zhuǎn)移病灶，但在不同病理類(lèi)型的上皮性卵巢癌組織中Axl的表達(dá)差異無(wú)顯著性。說(shuō)明Axl高表達(dá)可能與上皮性卵巢癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)，進(jìn)而參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。

在EMT誘導(dǎo)惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展的過(guò)程中，Snail及Axl均可通過(guò)間接誘導(dǎo)EMT發(fā)生的上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadherin及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物Vimentin表達(dá)而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。Snail可抑制E-cadherin的表達(dá)，引起上皮細(xì)胞黏附力下降、細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)從而發(fā)生EMT，轉(zhuǎn)變成間充質(zhì)細(xì)胞。Axl是EMT過(guò)程中與Vimentin有關(guān)的引起癌細(xì)胞遷移的關(guān)鍵因子，在腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移及抗凋亡過(guò)程中發(fā)揮作用。ZHANG等[12]提出，Axl參與了乳癌EMT，是EMT的下游作用產(chǎn)物，并受Snail家族中Twist、Snail、Zeb2等轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的調(diào)節(jié)。本文的研究結(jié)果顯示，Snail及Axl在上皮性卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)。說(shuō)明Snail、Axl可能在EMT促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移中存在某些潛在的相互作用機(jī)制，兩種蛋白在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中可能起著相輔相成共同促進(jìn)的作用。

綜上所述，Snail、Axl的異常高表達(dá)與上皮性卵巢癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

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