曲阜市牛羊結(jié)核及布病的監(jiān)測(cè)與凈化

郝昭遠(yuǎn) 邢洪運(yùn) 張 軍 王 磊 孔令芳

尹洪科 魏繼剛 孔 敏 馬秀芳 潘振芳 （山東省曲阜市畜牧獸醫(yī)工作站 273100）

劉思當(dāng)* （山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 泰安）

為提高牛羊布魯氏菌病和結(jié)核病（以下簡(jiǎn)稱“兩病”）的防控水平，促進(jìn)畜牧業(yè)健康發(fā)展，增加養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益，保障畜產(chǎn)品質(zhì)量安全。2012年6月至2013年6月曲阜市畜牧獸醫(yī)工作站在全市推廣實(shí)施了《牛羊結(jié)核病和布病的監(jiān)測(cè)及凈化工作》?，F(xiàn)將主要技術(shù)工作報(bào)告如下：

1 全市牛羊飼養(yǎng)情況調(diào)查

曲阜市目前存欄牛1.06萬(wàn)頭，存欄羊16.50萬(wàn)只。養(yǎng)牛戶主要集中在魯城、石門山、吳村、時(shí)莊、姚村、小雪、防山等鎮(zhèn)街，飼養(yǎng)模式主要為圈養(yǎng)；養(yǎng)羊戶除魯城、書院、陵城外，其他幾個(gè)鎮(zhèn)街都有很多飼養(yǎng)場(chǎng)戶，飼養(yǎng)方式除幾個(gè)存欄量較多的規(guī)模場(chǎng)實(shí)施圈養(yǎng)外，其他均以散養(yǎng)為主，輔以放牧。

2 “兩病”流行病學(xué)調(diào)查

為全面了解“兩病”發(fā)生現(xiàn)狀，科學(xué)判斷牛羊“兩病”的流行趨勢(shì)，在全市12處鎮(zhèn)街農(nóng)業(yè)服務(wù)站(獸醫(yī)站)、405名村級(jí)動(dòng)物防疫員和部分養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)的積極配合下，全市開展了“兩病”流行病學(xué)調(diào)查。同時(shí)，畜牧獸醫(yī)部門與衛(wèi)生防疫部門加強(qiáng)溝通，建立疫情互通機(jī)制，發(fā)現(xiàn)疫情及時(shí)通報(bào)，減少人畜間“兩病”的傳播風(fēng)險(xiǎn)。

2.1 “兩病”發(fā)病情況

（1）歷史上曲阜市已有十幾年未有人的布病發(fā)生，但據(jù)曲阜市疾控中心統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示2013年上半年本市發(fā)生了2例人的布病病例，一例發(fā)生在魯城街道，一例發(fā)生在尼山鎮(zhèn)。而人的結(jié)核則發(fā)病率要高的多，每年都有200多個(gè)新增病例，發(fā)病地點(diǎn)呈散發(fā)狀態(tài)，2010年302例，2011年224例，2012年261例，2013年上半年就有147例。（2）上世紀(jì)六七十年代，本市家畜“兩病”曾時(shí)常發(fā)生，通過(guò)加強(qiáng)流行病學(xué)調(diào)查、疫病檢疫以及對(duì)陽(yáng)性病畜的撲殺、無(wú)害化處理等綜合防控措施，牛羊“兩病”基本上已被撲滅，特別是90年代初本市實(shí)現(xiàn)了布病防控省級(jí)達(dá)標(biāo)；十幾年來(lái)，本市一直采取多種有效措施防控牛羊結(jié)核病和布病的發(fā)生，定期開展疫情監(jiān)測(cè)，不斷淘汰陽(yáng)性病畜，陽(yáng)性檢出率逐年下降。但近幾年隨著牛羊養(yǎng)殖數(shù)量的增加，市場(chǎng)流通和動(dòng)物流動(dòng)性增加，“兩病”的發(fā)生有所回升，雖未發(fā)生大的疫情，但防控形勢(shì)異常嚴(yán)峻。

2.2 “兩病”發(fā)病原因分析

（1）從外地引進(jìn)牛羊而發(fā)生的輸入性病例?！皟刹　币邊^(qū)的病畜通過(guò)調(diào)運(yùn)或直接接觸造成畜間感染流行，致使部分鎮(zhèn)街發(fā)生人畜間“兩病”的交叉感染。（2）疫區(qū)傳染源凈化不徹底。由于部分可能染病的病畜未經(jīng)檢測(cè)即被養(yǎng)殖戶賣出，未進(jìn)行淘汰無(wú)害化處理，加之牛羊交易頻繁，以及跨界、交叉混合放牧等原因，造成疫情向周邊地區(qū)擴(kuò)大蔓延。（3）群眾對(duì)“兩病”的危害認(rèn)識(shí)不足，自我防護(hù)意識(shí)不強(qiáng)，處理牛羊的流產(chǎn)物、排泄物、分泌物以及牛羊加工、銷售過(guò)程中無(wú)任何防護(hù)措施，如喂養(yǎng)牛羊后不洗手、消毒，污染物不消毒未做無(wú)害化處理就隨地亂扔，個(gè)別農(nóng)戶仍存在人畜混居現(xiàn)象等。

2.3 牛羊流行病學(xué)調(diào)查

發(fā)放流行病學(xué)調(diào)查問(wèn)卷143份，涉及全市12個(gè)鎮(zhèn)街143個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)。其中奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)33家，存養(yǎng)奶牛1986頭，黃牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)32家，存養(yǎng)黃牛865頭。綿羊養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)48家，存養(yǎng)綿羊5341只，山羊養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)30家，存養(yǎng)山羊2925只。被調(diào)查場(chǎng)(戶)一共存欄牛羊11117頭(只)，其中母畜存欄8336頭(只)，占74.98%。本次調(diào)查的大部分養(yǎng)殖場(chǎng)戶有3年以上的養(yǎng)殖經(jīng)驗(yàn)，但只有44.10%對(duì)結(jié)核和布病有所了解，其余55.90%不了解甚至不知道。被調(diào)查戶的懷孕牛羊4994頭(只)，屢配不孕的牛羊共有53頭(只)，發(fā)生在29個(gè)場(chǎng)(戶)，出現(xiàn)流產(chǎn)37頭(只)，發(fā)生在18個(gè)場(chǎng)(戶)。消瘦、咳嗽的牛羊共有38頭(只)，發(fā)生在12個(gè)場(chǎng)(戶)。在本次調(diào)查中，有16個(gè)場(chǎng)(戶)從外地購(gòu)進(jìn)過(guò)牛羊，但大部分購(gòu)進(jìn)的牛羊沒(méi)有檢疫合格證明。牛羊發(fā)病后自己診治的有78個(gè)場(chǎng)(戶)，占54.55%，請(qǐng)獸醫(yī)診治的有65個(gè)場(chǎng)(戶)，占45.45%。被調(diào)查的33個(gè)奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)中自己人擠奶的有21個(gè)，雇人擠奶的有12個(gè)。76.2%的養(yǎng)殖場(chǎng)戶對(duì)飼養(yǎng)場(chǎng)進(jìn)行定期消毒，23.8%養(yǎng)殖場(chǎng)戶從不消毒。僅有25.2%養(yǎng)殖場(chǎng)戶進(jìn)行過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

3 “兩病”的檢測(cè)診斷

3.1 牛結(jié)核病的檢測(cè)

3.1.1 材料和方法 （1）試驗(yàn)材料：結(jié)核菌素(哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào)獸藥生字(2012)201008)、游標(biāo)卡尺(精度為0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、膠靴、記錄表等。（2）檢測(cè)的牛群：曲阜市所有奶牛場(chǎng)戶100%進(jìn)行抽樣，根據(jù)場(chǎng)戶的規(guī)模大小計(jì)算抽樣數(shù)量。具體抽樣數(shù)量見表2。肉牛場(chǎng)(戶)的抽樣數(shù)量根據(jù)年初下達(dá)的檢測(cè)計(jì)劃進(jìn)行抽樣。（3）試驗(yàn)方法：采用牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)(PPD)試驗(yàn)。①操作方法：注射部位及術(shù)前處理：將檢測(cè)牛編號(hào)后在頸側(cè)中部上1/3處剪毛(或提前1d剃毛)，3個(gè)月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進(jìn)行，直徑約10cm。用卡尺測(cè)量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。注意術(shù)部應(yīng)無(wú)明顯的病變。注射劑量不論大小牛只，一律皮內(nèi)注射0.1ml(含2000IU)。即將牛型結(jié)核分枝桿菌PPD稀釋成每毫升含2萬(wàn)IU后，皮內(nèi)注射0.1ml。凍干PPD稀釋后當(dāng)天用完。注射方法：先以75%酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注射定量的牛型結(jié)核分枝桿菌PPD，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小皰，如對(duì)注射有疑問(wèn)時(shí)，應(yīng)另選15cm以外的部位或?qū)?cè)重做。注射次數(shù)和觀察反應(yīng)：皮內(nèi)注射后經(jīng)72h判定，仔細(xì)觀察局部有無(wú)熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測(cè)量皮皺厚度，作好詳細(xì)記錄。對(duì)疑似反應(yīng)牛應(yīng)立即在另一側(cè)以同一批PPD同一劑量進(jìn)行第二次皮內(nèi)注射，再經(jīng)72h觀察反應(yīng)結(jié)果。對(duì)陰性牛和疑似反應(yīng)牛，于注射后96h和120h再分別觀察1次，以防個(gè)別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。②結(jié)果判定：陽(yáng)性反應(yīng)：局部有明顯的炎性反應(yīng)，皮厚差大于或等于4.0mm；疑似反應(yīng)：局部炎性反應(yīng)不明顯，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm；但只要有一定炎性腫脹，即使皮厚差在2.mm以下仍應(yīng)判為可疑；陰性反應(yīng)：無(wú)炎性反應(yīng)。皮厚差在2.0mm以下。凡判定為疑似反應(yīng)的牛，于第一次檢疫60d后進(jìn)行復(fù)檢，其結(jié)果仍為疑似反應(yīng)時(shí)，經(jīng)60d再?gòu)?fù)檢，如仍為疑似反應(yīng)則判為陽(yáng)性。

表1 曲阜市奶牛場(chǎng)戶抽樣數(shù)量 (頭)

3.1.2 結(jié)果與分析 （1）奶牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果。

從表2可以看出，對(duì)于初檢結(jié)果可疑的64頭牛，間隔60d復(fù)查，結(jié)果44頭判定為陰性，20頭判定為陽(yáng)性。

表2 奶牛結(jié)核病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 (頭)

3.2 牛羊布病檢測(cè)

3.2.1 試驗(yàn)材料與方法 （1）血清的制備與保存：由頸靜脈穿刺采集牛羊全血，待血清析出時(shí)，分裝入離心管，放于4℃冰箱用于試驗(yàn)檢測(cè)，將其他備份血清放于-20℃冰箱凍存。（2）試劑：布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)和試管凝集試驗(yàn)抗原、陽(yáng)性血清、陰性血清均購(gòu)自青島易邦生物工程有限公司。（3）血清檢測(cè)：對(duì)采集的1379份牛羊血清首先使用布氏桿菌病虎紅平板凝集試驗(yàn)初步檢測(cè)，凡初檢結(jié)果為疑似或陽(yáng)性的，再使用試管凝集試驗(yàn)進(jìn)行復(fù)檢。（4）虎紅平板凝集試驗(yàn)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)：參照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T18646-2002動(dòng)物布氏桿菌診斷技術(shù)，在滅菌潔凈的玻璃板上，分別吸取被檢血清30μl與虎紅平板凝集抗原30μl混合均勻，同時(shí)以陽(yáng)、陰性血清作對(duì)照。在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象判為陽(yáng)性，無(wú)凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性。（5）試管凝集試驗(yàn)(SAT)方法及判定標(biāo)準(zhǔn)：首先稀釋血清，稀釋度依次為 1:12.5、l:25、1:50、1:100。加入等量稀釋后的抗原，混勻，則血清稀釋度依次為l:25、1:50、1:100、1:200。同時(shí)做陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照及抗原對(duì)照，并配制比濁管。將全部試管、對(duì)照管及比濁管充分振蕩后置37℃溫箱24h，取出檢查并記錄結(jié)果。參照比濁管，按各試管上層液體亮度判讀。①++++菌體完全凝集，100%下沉，上層液體100%清亮；②+++菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮；③++菌體凝集顯著，液體50%清亮；④+凝集物有沉淀，液體25%清亮；⑤－凝集物無(wú)沉淀，液體均勻混濁。

3.2.2 結(jié)果與分析 （1）奶牛檢測(cè)結(jié)果與分析。（2）肉牛檢測(cè)結(jié)果與分析。（3）羊血清學(xué)結(jié)果與分析。

表3 奶牛布氏桿菌病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 (頭)

由表3可知，初檢結(jié)果中有25頭牛判為疑似病例，經(jīng)試管凝集試驗(yàn)復(fù)檢，1個(gè)樣品試管凝集物無(wú)沉淀，液體均勻混濁，為陰性，24個(gè)樣品試管菌體幾乎完全凝集，上層液體75%清亮，判定為陽(yáng)性。

表4 肉牛布氏桿菌病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 (頭)

由表4可知，初檢結(jié)果中284頭牛全部判為陰性。

表5 羊布氏桿菌病初檢及可疑病例復(fù)檢結(jié)果 (頭)

由表5可知，初檢結(jié)果中607只羊判為陰性，3只羊判為陽(yáng)性。

4 討論

通過(guò)這次調(diào)查發(fā)現(xiàn)，曲阜市牛羊“兩病”尤其是布氏桿菌病感染率較低。在采集的1379份血樣中，有24份奶牛血清為陽(yáng)性。并且集中出現(xiàn)在兩個(gè)奶牛場(chǎng)，通過(guò)進(jìn)一步了解得知陽(yáng)性牛都是今年上半年從外地購(gòu)進(jìn)的，在購(gòu)進(jìn)之前沒(méi)有進(jìn)行“兩病”檢測(cè)，也沒(méi)有動(dòng)物檢疫合格證明。對(duì)于檢出的陽(yáng)性牛、羊及時(shí)采取了隔離、撲殺、焚燒、深埋、消毒等無(wú)害化處理，并認(rèn)真做好登記備案、消毒滅源疫點(diǎn)等清除工作，達(dá)到布氏桿菌病的凈化目的。

曲阜市作為布氏桿菌病流行地區(qū)，對(duì)布氏桿菌病檢測(cè)凈化理應(yīng)高度重視，但在調(diào)查中發(fā)現(xiàn)：（1）仍有部分養(yǎng)殖戶不了解布病相關(guān)防控知識(shí)，因此今后必須加這方面的知識(shí)宣傳，提高養(yǎng)殖戶的自我防范意識(shí)和防控技能 。（2）動(dòng)物防疫不足，污染源無(wú)害化處理不徹底。（3）職能部門對(duì)布病的防控措施不到位，在免疫、檢疫、監(jiān)測(cè)、淘汰陽(yáng)性畜、消毒等各環(huán)節(jié)中都不同程度的存在一些問(wèn)題，今后需加強(qiáng)基層獸醫(yī)站的建設(shè)，增加防檢設(shè)備投入，提高業(yè)務(wù)人員素質(zhì)；加強(qiáng)檢疫督查，對(duì)牲畜交易市場(chǎng)、定點(diǎn)屠宰場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)加大檢疫督查力度，嚴(yán)禁未經(jīng)檢疫或檢驗(yàn)不合格牲畜及產(chǎn)品進(jìn)入市場(chǎng)，對(duì)各種違法行為要嚴(yán)肅處理，將傳入風(fēng)險(xiǎn)降至最低。

5 小結(jié)

曲阜市《牛羊結(jié)核及布病檢測(cè)與凈化》項(xiàng)目實(shí)施一年來(lái)，取得了顯著成效，圓滿完成了計(jì)劃任務(wù)目標(biāo)。

5.1 建立了牛羊“兩病”的檢測(cè)凈化體系 通過(guò)項(xiàng)目實(shí)施，培訓(xùn)了一批熟練掌握“兩病”檢測(cè)的技術(shù)人員，積累了大量的“兩病”防控實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，總結(jié)制訂了符合我市實(shí)際的“兩病”防控技術(shù)工作流程，對(duì)今后“兩病”的進(jìn)一步防控和凈化具有重要的推動(dòng)作用。

5.2 取得了顯著的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益 通過(guò)疫情控制和檢測(cè)凈化的設(shè)施，使牛羊流產(chǎn)率降低了5%，提高了生產(chǎn)性能及產(chǎn)品質(zhì)量，獲得直接經(jīng)濟(jì)效益300多萬(wàn)元。通過(guò)項(xiàng)目實(shí)施，逐步普及了“兩病”防控知識(shí)，提高了養(yǎng)殖從業(yè)人員的自我防護(hù)意識(shí)，有效切斷了人畜間的疫病傳播途徑，減少了人的感染幾率，消除了人們對(duì)牛羊肉的恐慌心理，促進(jìn)了社會(huì)和諧穩(wěn)定，維護(hù)了公共衛(wèi)生安全。

5.3 完成了全市牛羊飼養(yǎng)情況調(diào)查 通過(guò)這次“兩病”流行病學(xué)調(diào)查，初步摸清了全市牛羊的飼養(yǎng)狀況，對(duì)今后牛羊病的防控以及健康養(yǎng)殖的推動(dòng)提供了科學(xué)決策依據(jù)。

5.4 完成了人畜間“兩病”的流行病學(xué)調(diào)查 通過(guò)開展“兩病”流行病學(xué)調(diào)查工作，掌握了“兩病”在人畜間感染流行情況，為本市人畜“兩病”的監(jiān)測(cè)、防控奠定了基礎(chǔ)。