牛流行熱研究進(jìn)展

柳美玲 胡士林 石 英 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院 山東 濰坊 261061）

牛流行熱（Bovine EphemeralFever，BEF），又稱暫時(shí)熱、三日僵硬病、牛流行性熱或牛登革熱[1]，是牛的一種非接觸傳染性疾病。自1876 年Schwinfuth 首次報(bào)道牛流行熱病發(fā)生于西非至今已有百年歷史。該病流行于非洲的肯尼亞,亞洲的中國、朝鮮、日本、印度、印度尼西亞,大洋洲的澳大利亞以及地中海地區(qū)。我國1949 年以前就有本病在部分地區(qū)發(fā)生流行的記載,此后我國北起吉林省南至廣東、廣西等25個(gè)省市均多次暴發(fā)本病[2]。

1 病原學(xué)

1.1 病毒的形態(tài)學(xué)與理化特性 本病的病原是牛暫時(shí)熱病毒(BEFV)。目前，把BEFV與狂犬病病毒、水泡性口炎病毒等一起歸于彈狀病毒科(Rhabdoviridae)，這是因?yàn)檫@些病毒都具有以下幾點(diǎn)共性：（1）外型為子彈型；（2）核酸為單股負(fù)鏈RNA；（3）具有5種結(jié)構(gòu)蛋白；（4）對(duì)脂類敏感等。但BEFV與同科其他病毒在宿主范圍、生理周期、產(chǎn)熱機(jī)理、免疫反應(yīng)等方面均存在較大的差異。因此，對(duì)于BEFV在病毒分類學(xué)上所處的位置仍有爭(zhēng)議。1994年ICTV會(huì)議將它正式列為彈狀病毒科暫時(shí)熱病毒屬。

病毒粒子由五種結(jié)構(gòu)蛋白和一種非結(jié)構(gòu)蛋白組成，有彈狀變化至鈍頭圓錐狀等形態(tài)。其直徑約73nm，但長度在70～183nm之間。短的彈狀以及圓錐形病毒粒子是有缺陷的病毒粒子，可能會(huì)干擾病毒在組織培養(yǎng)中的生長。病毒在pH小于5或大于10的情況下很容易失活?，F(xiàn)在沒有證據(jù)顯示BEFV種群存在免疫學(xué)差異，但是抗原變異已經(jīng)通過單克隆抗體以及抗原表位圖譜得到證實(shí)[3]。

BEFV對(duì)熱敏感，56℃10min，37℃18h滅活，pH2.5以下或pH 9.0以上數(shù)10min內(nèi)滅活，對(duì)乙醚、氯仿等敏感。構(gòu)椽酸鹽抗凝的病牛血液于2～4℃貯存8d后仍有感染性。感染鼠腦懸液(加有10%犢牛血清)于4℃經(jīng)1個(gè)月毒力無明顯下降。反復(fù)凍融對(duì)病毒無明顯影響。于-20℃以下低溫保存，可長期保持毒力。

1.2 病毒的基因組結(jié)構(gòu) 通過對(duì)病毒核酸的研究表明，BEFV的核酸為單股負(fù)鏈、不分節(jié)段RNA，長度為14.8kb，其中11組基因己被確定，從3’—5’端的順序依次為3’-N-M1-M2-G-GNS-α1-α2-α3-β-γ-L-5’，第25～52位核苷酸之間為插入?yún)^(qū)，γ和L基因之間具有21個(gè)核普酸的重疊區(qū)。除α1基因外，其余所有基因均以-UUGUCC-序列起始，轉(zhuǎn)錄合成的mRNA在5’端有帽子結(jié)構(gòu)，其基因起始序列為-AACAGG-，終止序列CNTG(A)6-7。在這些基因中，N、Ml、MZ、L和G為編碼BEFV的結(jié)構(gòu)蛋白基因。

2 流行病學(xué)

2.1 流行情況 BEFV流行于非洲、亞洲和大洋洲許多國家和地區(qū)。包括非洲的肯尼亞，亞洲的中國、朝鮮、日本、印度、印度尼西亞等，大洋洲的澳大利亞，以及地中海地區(qū)。在我國，1949年以前，就有本病在部分地區(qū)發(fā)生流行的記載。隨后我國25個(gè)省市均多次暴發(fā)流行，但從1991年至今未見有大規(guī)模流行的報(bào)道。

2.2 易感宿主 通過靜脈或者皮下注射接種BEFV可在多種試驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生抗體。但是目前臨床病例僅在牛上有報(bào)道。關(guān)于野生動(dòng)物的血清學(xué)調(diào)查進(jìn)行的較少。用病毒中和試驗(yàn)檢測(cè)了若干種類的鹿的抗體，以及病毒中和試驗(yàn)和ELISA檢測(cè)了?？萍易逯胁煌瑏喛苿?dòng)物中的抗體。血清檢測(cè)均為陽性的物種有：南非水牛(cape buffalo)、牛羚(wildebeest)、大羚羊(hartebeest)、非洲水羚(waterbuck)；而在大羚羊(kudu)、黑皮羚羊(sable antelope)、非洲旋角大羚羊(eland)、黑斑羚羊(impala)、轉(zhuǎn)角牛羚(topi)、tsessebe(非洲南部的一種羚羊)和長頸鹿中僅可檢測(cè)到低水平的抗體。非洲野生動(dòng)物中抗體的特異性還沒有確認(rèn)[4]。

目前還沒有證據(jù)顯示人類能夠感染。對(duì)于接觸感染牛群的農(nóng)民以及實(shí)驗(yàn)室中操作BEFV的工作人員，研究人員進(jìn)行了有限的血清學(xué)研究，結(jié)果同樣為陰性[5]。

2.3 傳播性 牛流行熱為非接觸感染，昆蟲叮咬可以傳播本病，呈周期性流行。根據(jù)多年流行病學(xué)觀察，周期性由過去的10～20年流行1次，到近年來流行周期縮短至3～5年或6～8年，有的地方甚至更短，如廣東省從70年代以后，它的流行周期縮短到間隔1～2年就有1次流行。

本病發(fā)生迅猛，在傳播擴(kuò)散方式上，不受山川河流的阻礙，呈跳躍式蔓延。發(fā)病疫區(qū)不是連接成片，而是疫區(qū)與非疫區(qū)呈相嵌的形式存在，即疫區(qū)與疫區(qū)之間交叉存在無病的清凈區(qū)。據(jù)報(bào)道，牛流行熱在北半球發(fā)生地區(qū)，在日本不超過北緯38。；在南半球，該病很少穿過澳大利亞西部和中部南緯25。和東部的36。。上述北緯38。以南和南緯25。-36。以北是媒介昆蟲滋生活躍的地區(qū)。

目前還沒有關(guān)于垂直傳播或水平傳播的報(bào)道。到目前為止，已經(jīng)從田間收集的澳大利亞庫蚊(Culicine)和按蚊(Anopheline)以及非洲和澳大利亞屬于庫蠓屬(Culicoides)的幾個(gè)種的蠓中分離到了BEFV[6]。蚊子通常被認(rèn)為是攜帶宿主。另一方面，庫蠓屬中的蠓撕破動(dòng)物皮膚并吸取血液因此被認(rèn)為是儲(chǔ)存宿主。由于僅能通過靜脈接種才能使牛發(fā)生本病，且在病毒血癥早期淋巴中無病毒存在，因此目前認(rèn)為蚊子是本病的主要媒介。

本病發(fā)生于夏末秋初。由于我國幅員遼闊，南北緯度差異很大，東西走向又存在不同地域之差，因而本病在不同地區(qū)流行始末時(shí)間也不完全一樣。發(fā)病率可高達(dá)80%，在無并發(fā)癥的情況下病死率一般較低，很少超過2%～3%，但是過度肥胖的牛病死率可高達(dá)30%[7]。

2.4 發(fā)病情況 發(fā)病率可高達(dá)80%，畜群中易感牛的數(shù)量以及疾病流行的強(qiáng)度都對(duì)發(fā)病率有部分地影響。在無并發(fā)癥的情況下病死率一般較低，很少超過2%～3%，但是過度肥胖的牛病死率可高達(dá)30%[3]。奶牛在產(chǎn)奶早期和中期比干奶期的牛更容易死亡。

3 診斷與防治

3.1 根據(jù)癥狀和病變初步診斷 牛流行熱多發(fā)生于夏末秋初，短期內(nèi)廣泛傳播，但只發(fā)生于牛，特別是黃牛和奶牛。潛伏期3～7d，表現(xiàn)為突然發(fā)病，體溫升高達(dá)39.5～42.5℃，維持2～3d后將至正常。在體溫升高的同時(shí)，病牛流淚、畏光、眼結(jié)膜充血、眼瞼水腫。呼吸促迫，咽喉區(qū)疼痛，反當(dāng)停止。多數(shù)病牛鼻炎性分泌物成線狀，隨后變?yōu)轲ば员翘??？谇话l(fā)炎，流涎，口角有泡沫。有的病牛四肢關(guān)節(jié)浮腫、僵硬、疼痛、跋行。便秘或腹瀉，尿液呈暗褐色。妊娠母牛可發(fā)生流產(chǎn)、死胎、泌乳量下降或停止。多數(shù)病例為良性經(jīng)過，病程3～4d，很快恢復(fù)。

該病的病變主要表現(xiàn)在肺部。急性死亡的病例，肺高度膨隆，間質(zhì)增寬，內(nèi)有氣泡，壓迫肺呈捻發(fā)音；氣管內(nèi)積有多亮的泡沫狀黏液。部分?？梢姺纬溲?、淋巴結(jié)充血、腫脹和出血。真胃、小腸可見卡他性炎癥或滲出型出血。

3.2 病毒分離鑒定 病毒的分離鑒定是確切診斷病原的可靠方法。采病牛急性期血液或血液中的白細(xì)胞層，腦內(nèi)接種乳鼠、乳倉鼠，常能分離到病毒。連續(xù)傳代?？墒?jié)摲诓粩嗫s短: 第一代約6～8d；第二代5d左右；至第6～8代，僅2～3d即可使乳鼠全部發(fā)病死亡。分離到病毒以后，即可應(yīng)用乳鼠或細(xì)胞培養(yǎng)物與己知標(biāo)準(zhǔn)免疫血清進(jìn)行中和試驗(yàn)進(jìn)行病毒鑒定。

澳大利亞學(xué)者在建立BEFVG蛋白單克隆抗體工作中做出了卓越貢獻(xiàn)。Zakrzewski等(1992)建立了檢測(cè)牛流行熱病毒特異性抗體的阻斷ELESA法。由于采用針對(duì)BEFV G1抗原位點(diǎn)的單克隆抗體，只對(duì)BEFV發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，而與相關(guān)病毒(如Berrimah，Kimberley病毒等)無交叉反應(yīng)，因此與病毒中和試驗(yàn)相比，敏感性更高，操作更簡(jiǎn)單。是目前診斷及檢測(cè)臨床牛流行熱好方法之一。

BEF 病毒能夠從白紋伊蚊(albopictus)的全血以及腦部接種的1～2日齡的小鼠中分離，并用BHK 細(xì)胞或VERO細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)[8]。然后，通過特異的BEFV抗血清或單克隆抗體對(duì)BEF病毒進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法還有常規(guī)PCR和熒光定量PCR以及血清中和試驗(yàn)(SNT)和阻斷ELISA，其中阻斷ELISA能區(qū)分由BEFV或其他病毒所誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體[9]。近來，Hsieh YC 建立了RAPID-BAP探針法，該方法比常規(guī)PCR和熒光定量PCR更加敏感、特異和快速[10]。

3.3 防治 本病通過阻斷性治療可以得到理想療效。有人在細(xì)胞水平上用RNA 干擾技術(shù)有效抑制了BEFV的增殖[11]。疾病發(fā)展過程中出現(xiàn)的炎癥可以用抗炎癥藥物治療，收效很好。根據(jù)臨床病例的預(yù)期進(jìn)程以重復(fù)劑量給藥，效果更佳。如果吞咽反射消失，則不能通過口服給藥。早期治療比晚期更為有效。過早停止抗炎癥治療或在恢復(fù)期動(dòng)物受到應(yīng)激則可能會(huì)復(fù)發(fā)本病。治療對(duì)病毒血癥以及后來的免疫力影響不顯著。要保證病畜用等滲液體進(jìn)行補(bǔ)水，尤其是對(duì)高值的畜群。應(yīng)用抗生素可以防止繼發(fā)感染。

免疫是目前唯一有效的保護(hù)措施。弱化活病毒疫苗已經(jīng)在南非、日本、澳大利亞進(jìn)行生產(chǎn)[3]。這些疫苗對(duì)強(qiáng)烈的實(shí)驗(yàn)室攻毒能夠產(chǎn)生保護(hù)，但在田間疾病暴發(fā)時(shí)的保護(hù)性尚不確定。

4 展望

本病一般零星散發(fā)或呈地方流行性發(fā)生，尤其是夏末初秋、高溫季節(jié)則較多發(fā)生，主要導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降和死亡率上升，給我國養(yǎng)牛業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前，奶價(jià)上漲給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來了鮮有的發(fā)展好時(shí)機(jī)，而且隨著消費(fèi)需求的增長，奶源緊張是長期要面對(duì)的問題。提高奶牛單產(chǎn)水平和牛奶質(zhì)量是中國奶業(yè)未來發(fā)展的關(guān)鍵。因此，加強(qiáng)對(duì)牛流行熱疾病的認(rèn)識(shí)和奶牛場(chǎng)對(duì)本病的防控工作將有重大意義。

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