茯苓菌種液體深層發(fā)酵條件優(yōu)化

唐業(yè)剛，胡靄雯

（武漢生物工程學(xué)院，湖北武漢430415）

茯苓菌種液體深層發(fā)酵條件優(yōu)化

唐業(yè)剛，胡靄雯

（武漢生物工程學(xué)院，湖北武漢430415）

采用茯苓9號(hào)菌株，通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)對(duì)其液體發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。結(jié)果表明，液體發(fā)酵最佳培養(yǎng)基為：葡萄糖30g，酵母浸膏與蛋白胨共10g（添加比例4∶5），KH2PO41g，MgSO40.5g，維生素B17.5mg，水1L。在常溫、150r/min時(shí)，菌種最佳液體發(fā)酵條件為：培養(yǎng)基初始pH為5.5、培養(yǎng)天數(shù)為8d、裝瓶量為70mL/250mL錐形瓶、接種量為7%時(shí)，可得到較好菌絲增重量，最大菌絲干重可達(dá)5.004g/L。

茯苓，液體發(fā)酵，正交優(yōu)化

茯苓，又名茯菟、不死面、松苓等，屬真菌門，擔(dān)子菌亞門，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，茯苓屬[1]，廣泛分布于日本、東南亞、北美洲和澳大利亞及我國云南、福建、安徽等10多個(gè)省區(qū)。茯苓含有多種營養(yǎng)成分[2]，具有諸如調(diào)節(jié)免疫功能、抗腫瘤、抗衰老、抗炎等藥理作用[3-4]，茯苓系列保健品如茯苓酸奶、茯苓酒、茯苓果茶等，及茯苓多糖粉、茯苓多糖口服液、桂枝茯苓膠囊等也正在被迅速開發(fā)。茯苓傳統(tǒng)固體栽培生產(chǎn)周期長、產(chǎn)量低、受氣候和產(chǎn)地限制，已越來越難以滿足其巨大的市場需求，而液體深層發(fā)酵技術(shù)則可較好解決上述問題。

目前國內(nèi)對(duì)茯苓液體發(fā)酵產(chǎn)物藥用成分，如茯苓多糖等的提取、純化、檢測，及其藥理學(xué)作用的研究報(bào)道[5-10]較多，但對(duì)茯苓液體發(fā)酵條件，特別是發(fā)酵培養(yǎng)基成分正交優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)報(bào)道則不多見。文獻(xiàn)報(bào)道多集中于茯苓菌種液體發(fā)酵培養(yǎng)條件[5，7，11-12]，如針對(duì)溫度、轉(zhuǎn)速、接種量等進(jìn)行的單因子實(shí)驗(yàn)研究，對(duì)茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基的研究，也大多集中于簡單的碳源、氮源種類及濃度篩選的單因子實(shí)驗(yàn)[5，11，13-14]，對(duì)培養(yǎng)基中有機(jī)物維生素、無機(jī)鹽濃度等成分的報(bào)道不多，對(duì)于培養(yǎng)基中各成分對(duì)發(fā)酵效果影響的互作，則罕有文獻(xiàn)[15]報(bào)道。本文采用單因子實(shí)驗(yàn)初篩結(jié)合正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步考查互作的實(shí)驗(yàn)方法，從碳源、氮源、無機(jī)鹽及有機(jī)物維生素B1等四個(gè)方面，對(duì)茯苓9號(hào)菌種液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分進(jìn)行了優(yōu)化研究，并對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)的起始pH、裝液量、接種量及發(fā)酵終點(diǎn)進(jìn)行了初探，以期為茯苓菌種的大規(guī)模液體工廠發(fā)酵生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

供試茯苓9號(hào)試管母種菌種 購自華中農(nóng)業(yè)大學(xué)大學(xué)菌種保藏中心；瓊脂粉 天津科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心；牛肉浸膏 天津英博生化試劑有限公司；酵母浸粉、蛋白胨 北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司；維生素B1中國惠興生化試劑有限公司（上海）。

SW-CJ-1F型單人雙面凈化工作臺(tái) 蘇州凈化；DHP-9052型電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海一恒科學(xué)儀器有限公司；202-0B型干燥箱 天津市泰斯特儀器有限公司；P270A型普通搖床 武漢中科科儀技術(shù)發(fā)展有限責(zé)任公司；手提式高壓滅菌鍋 上海三申醫(yī)療器械有限公司；PHS-25C型數(shù)顯酸度計(jì) 上海宇隆儀器有限公司；電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 母種擴(kuò)繁 擴(kuò)繁培養(yǎng)基成分：馬鈴薯200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、蛋白胨2g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg、水1.0L，pH自然。將所購試管母種按1∶20比例轉(zhuǎn)管接種，培養(yǎng)箱中25℃暗培養(yǎng)至菌絲長滿試管，備用。

1.2.2 一級(jí)搖瓶種子制備 一級(jí)搖瓶配方：葡萄糖20g、酵母浸粉4.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg、水1.0L，pH自然，以100mL/250mL錐形瓶裝液量分裝，121℃30min滅菌。

接取1.2.1所得擴(kuò)繁菌絲約2cm長度，并將其分割成多段，接入上述培養(yǎng)基，25℃暗培養(yǎng)，先靜置24h，再于搖床上以150r/min常溫發(fā)酵一周，至形成大量均勻致密菌絲球，作為液體搖瓶培養(yǎng)的種子備用。

1.2.3 茯苓液體搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)基成分的優(yōu)化

1.2.3.1 碳、氮源種類的篩選 碳源篩選培養(yǎng)基：選擇葡萄糖和蔗糖兩種生產(chǎn)中常見的廉價(jià)碳源種類進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，并考查二者的協(xié)同作用。分別選取葡萄糖20g、蔗糖20g、葡萄糖10g+蔗糖10g為碳源，培養(yǎng)基其他成分為：酵母浸粉4.0g、蛋白胨5.0g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg、水1.0L，pH自然。

氮源篩選培養(yǎng)基：氮源在液體發(fā)酵中起著提供主要營養(yǎng)的重要作用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)氮源種類進(jìn)行考查。分別選取蛋白胨9g、酵母浸粉9g、牛肉浸膏9g、尿素9g、蛋白胨5g+酵母浸粉4g為氮源，考查五種氮源種類對(duì)發(fā)酵效果的影響，培養(yǎng)基其他成分為：葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1.0g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg、水1.0L，pH自然。

上述實(shí)驗(yàn)均以100mL/250mL錐形瓶裝液量分裝、121℃30min滅菌，均按10%（mL/mL）接種量接種1.2.2所得一級(jí)搖瓶液體種子，于搖床上150r/min常溫?fù)u瓶發(fā)酵7d，發(fā)酵結(jié)束后，紗布過濾發(fā)酵物，所得菌絲球50℃烘干至恒重，稱重，計(jì)算菌絲球干重（g/L）。

1.2.3.2 碳源、氮源、無機(jī)鹽、維生素B1濃度的單因子實(shí)驗(yàn) a.碳源濃度的單因子實(shí)驗(yàn)：選用1.2.3.1中的最佳碳源種類，設(shè)置10、20、30、40、50g五個(gè)梯度，培養(yǎng)基其他成分為蛋白胨+酵母浸粉9g（蛋白胨/酵母浸膏＝5/4）、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg，水1.0L。

b.氮源濃度的單因子實(shí)驗(yàn)：基于1.2.3.1中的最佳氮源蛋白胨+酵母浸膏（5∶4），設(shè)置6、7、8、9、10g五個(gè)梯度，培養(yǎng)基其他成分為葡萄糖20g、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、維生素B110mg，水1.0L。

c.KH2PO4/MgSO4濃度（比例固定為2∶1（g/L））單因子實(shí)驗(yàn)：據(jù)王偉霞[13]報(bào)道，礦物質(zhì)濃度是茯苓液體發(fā)酵的重要影響因素，本實(shí)驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行考查，設(shè)置2.5/1.25、2.0/1.0、1.5/0.75、1.0/0.5、0.5/0.25五個(gè)處理，培養(yǎng)基的其他成分為葡萄糖20g、蛋白胨+酵母浸粉9g（蛋白胨/酵母浸膏＝5/4）、維生素B110mg，水1.0L。

d.維生素B1的單因子實(shí)驗(yàn)（mg/L）：目前少見茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基中VB1添加濃度的報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)對(duì)此進(jìn)行考查，設(shè)置2.5、5.0、7.5、10.0、12.5mg/L五個(gè)梯度，培養(yǎng)基其他成分為：葡萄糖20g、蛋白胨+酵母浸粉9g（蛋白胨/酵母浸膏＝5/4）、磷酸二氫鉀1g、硫酸鎂0.5g、水1.0L。

以上實(shí)驗(yàn)的發(fā)酵條件均為50mL/250mL錐形瓶裝液量、10%一級(jí)搖瓶種子接種量、培養(yǎng)基pH自然，搖床轉(zhuǎn)速150r/min，常溫，發(fā)酵時(shí)間為7d。發(fā)酵結(jié)束后均按1.2.3.1中方法測量菌絲球平均干重并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.3.3 茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分的正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)

根據(jù)1.2.3.2各單因子實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，分別選用液體發(fā)酵后菌絲體干重最大的3個(gè)水平，進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)（L9（34））設(shè)計(jì)（見表1），進(jìn)行培養(yǎng)基成分的優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。發(fā)酵條件同1.2.3.2。

表1 正交實(shí)驗(yàn)的因素與水平Table 1 Factors and levels of the orthogonal test design

1.2.4 茯苓液體菌種培養(yǎng)條件優(yōu)化 以下實(shí)驗(yàn)液體搖瓶培養(yǎng)基成分均采用1.2.3.3中正交優(yōu)化后的結(jié)果。

1.2.4.1 起始pH單因子實(shí)驗(yàn) 將正交優(yōu)化培養(yǎng)基的起始pH分別調(diào)成4.5、5.0、5.5、6.0、6.5五個(gè)水平，在裝液量為100mL/250mL錐形瓶、一級(jí)搖瓶種子接種量為10%的條件下，以150r/min在常溫進(jìn)行搖瓶發(fā)酵7d，發(fā)酵結(jié)束后，稱量菌絲體干重，分析數(shù)據(jù)，得出培養(yǎng)基的最佳起始pH。

1.2.4.2 茯苓搖瓶時(shí)間單因子實(shí)驗(yàn) 正交優(yōu)化培養(yǎng)基在裝液量為100mL/250mL錐形瓶、接種量為10%、pH自然的條件下，以150r/min在常溫?fù)u瓶發(fā)酵，分別在發(fā)酵后第4、5、6、7、8、9、10d后結(jié)束發(fā)酵，稱量菌絲體干重，分析數(shù)據(jù)，得出最佳搖瓶培養(yǎng)時(shí)間。

1.2.4.3 接種裝液量單因子實(shí)驗(yàn) 分別設(shè)置40、50、60、70、80、90、100mL/250mL錐形瓶等7種不同水平裝液量配制正交優(yōu)化培養(yǎng)基，在接種量為10%、pH自然的條件下，以150r/min在常溫?fù)u瓶發(fā)酵7d，觀察菌絲生長狀態(tài)，并稱量菌絲體干重后分析數(shù)據(jù)，得出最佳接種裝瓶量。

1.2.4.4 接種量單因子實(shí)驗(yàn) 分別設(shè)置4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%等七種不同接種量，將1.2.2所得一級(jí)搖瓶種子接種到正交優(yōu)化培養(yǎng)基中，在裝液量為100mL/250mL錐形瓶、正交優(yōu)化培養(yǎng)基pH自然的條件下，以150r/min在常溫?fù)u瓶發(fā)酵7d，觀察菌絲生長狀態(tài)，并稱量菌絲體干重后分析數(shù)據(jù)，得出最佳接種量。

1.2.4.5 最佳培養(yǎng)條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 選取上述單因子試驗(yàn)中的最佳起始pH、最佳搖瓶發(fā)酵時(shí)間、最佳裝瓶量及最佳接種量作為培養(yǎng)條件，進(jìn)行發(fā)酵條件驗(yàn)證試驗(yàn)，發(fā)酵結(jié)束后稱量菌絲球干重，分析數(shù)據(jù)，得出最佳發(fā)酵條件。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析方法 采用鄧肯氏新復(fù)極差法（Duncan’s Multiple Range Test）評(píng)估每個(gè)因素下各水平實(shí)驗(yàn)處理間的差異顯著性（p=0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 茯苓液體菌種發(fā)酵培養(yǎng)基成分的優(yōu)化結(jié)果

2.1.1 不同碳源種類對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。由表2可知，葡萄糖對(duì)茯苓液體發(fā)酵菌絲生長的促進(jìn)效果最佳，菌絲球平均干重極顯著高于另兩種碳源，這與李羿[11]、薛正蓮[5]、付玲等[14]的報(bào)道結(jié)果相似，這表明，茯苓菌種在液體發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)更容易吸收利用葡萄糖這樣的小分子單糖。還可看出，蔗糖+葡萄糖作為碳源時(shí)，其平均菌絲球干重最低，極顯著低于另兩組。這表明，葡萄糖和蔗糖混合使用時(shí)兩者可能存在著一定的相互拮抗作用，其具體原因有待進(jìn)一步研究。

表2 不同碳源對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 2 Effect of different carbon sources in liquid fermentation of poria

2.1.2 不同氮源種類對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3，由表3可知，尿素組平均菌絲球干重僅為0.165g/L，極顯著低于其他組，這表明，茯苓9號(hào)菌株液體發(fā)酵對(duì)無機(jī)氮源的利用效率較差，因在搖瓶過程中，有明顯的尿素晶體狀物質(zhì)析出，故菌絲生長差也有可能是因?yàn)槟蛩貪舛忍砑舆^高，具體原因有待進(jìn)一步研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蛋白胨、酵母浸粉、牛肉膏、蛋白胨+酵母浸粉對(duì)茯苓液體菌種生長都有明顯促進(jìn)作用，其中，蛋白胨+酵母浸粉組合極顯著高于其他氮源種類。這提示著茯苓9號(hào)菌株對(duì)動(dòng)物性氮源（蛋白胨）和微生物源性氮源（酵母浸粉）搭配時(shí)的氮源利用效果最佳，極顯著高于二者的單獨(dú)利用效率，至于具體的搭配比例是否以5∶4為最佳比例，則有待于進(jìn)一步深入研究。

2.1.3 碳源、氮源、礦質(zhì)鹽、維生素B1濃度篩選結(jié)果

2.1.3.1 不同碳源濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4，由表4可知，隨著葡萄糖濃度的增加，菌絲球干重也大幅度增加，當(dāng)葡萄糖達(dá)到30g/L時(shí)，菌絲球干重最大，隨后菌絲球干重開始減少，但減少緩慢。多數(shù)學(xué)者[5-7]研究認(rèn)為，以葡萄糖為碳源時(shí)，其濃度過高或過低均不利于液體發(fā)酵時(shí)茯苓菌絲的生長，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，葡萄糖濃度在30g/L時(shí)菌絲球干重達(dá)到最大，當(dāng)葡萄糖濃度大于30g/L時(shí)，菌絲球干重逐漸減小，但是變化較為緩慢，這與李羿等[11]的報(bào)道結(jié)果相似。

2.1.3.2 不同氮源濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。由表5可知，隨著蛋白胨+酵母浸粉濃度的增加，菌絲球干重也大幅度增加，當(dāng)?shù)鞍纂?酵母浸粉達(dá)到8g/L時(shí)，菌絲球干重最大，隨后菌絲球干重開始減少。據(jù)李羿等[11]報(bào)道，如果茯苓液體發(fā)酵時(shí)氮源濃度過低，會(huì)導(dǎo)致營養(yǎng)不足，明顯不利于菌體生長；但如果氮源濃度過大，則易造成菌體早衰。本實(shí)驗(yàn)亦取得類似結(jié)果，當(dāng)?shù)礉舛葹?g/L時(shí)，茯苓液體發(fā)酵效果最好，濃度過高或過低均對(duì)液體發(fā)酵效果有不利影響。

表5 不同氮源濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 5 Effect of different nitrogen source concentration on liquid fermentation of poria

表7 不同維生素B1濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 7 Effect of different VB1concentration on liquid fermentation of poria

表3 不同氮源對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 3 Effect of different nitrogen sources on liquid fermentation of poria

表4 不同碳源濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 4 Effect of different carbon source concentration on liquid fermentation of poria

表6 不同礦物質(zhì)濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 6 Effect of different mineral concentration on liquid fermentation of poria

2.1.3.3 不同礦物質(zhì)濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6，由表6可知，隨著KH2PO4+MgSO4濃度的增加，菌絲球干重也大幅度增加，當(dāng)KH2PO4達(dá)到1.5g/L、MgSO4達(dá)到0.75g/L時(shí)，菌絲球干重最大，隨后菌絲球干重開始減少。其原因可能是此礦物質(zhì)濃度搭配時(shí)，能為茯苓菌種液體發(fā)酵提供最適滲透壓環(huán)境，故菌絲生長最好。

2.1.3.4 不同維生素B1濃度對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7，由表7可知，隨著維生素B1濃度的增加，菌絲球干重也大幅度增加，當(dāng)維生素B1達(dá)到7.5mg時(shí)，菌絲球干重最大，隨后菌絲球干重開始減少。目前少有維生素B1對(duì)茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)效果的單因子實(shí)驗(yàn)報(bào)道，甚至有的學(xué)者[16]研究的培養(yǎng)基中不添加維生素B1，這可能與茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基培養(yǎng)基中維生素B1所需量的多少與茯苓菌種有著較大關(guān)系有關(guān)。

表8 茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分的L9（34）正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 8 L9（34）orthogonal test results of poria fermentation medium composition

2.1.4 正交優(yōu)化實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 由表8可知，6號(hào)培養(yǎng)基為最優(yōu)培養(yǎng)基，具有生長優(yōu)勢，其菌絲球干重最大。由極差R可以看出：優(yōu)先級(jí)是D＞A＞C＞B，即維生素B1＞葡萄糖＞KH2PO4/MgSO4＞蛋白胨+酵母浸粉。由k值可知，最佳組合為A2B3C1D2，即實(shí)驗(yàn)組6號(hào)培養(yǎng)基配方，正交分析結(jié)果與實(shí)驗(yàn)結(jié)果相同，由此確定，6號(hào)培養(yǎng)基為最終正交優(yōu)化結(jié)果。

2.2 茯苓液體菌種發(fā)酵條件優(yōu)化的結(jié)果

2.2.1 茯苓液體發(fā)酵培養(yǎng)基不同起始pH對(duì)發(fā)酵效果的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表9，由表9可知，茯苓喜歡偏酸性的發(fā)酵環(huán)境，當(dāng)pH為5.5時(shí)，茯苓液體發(fā)酵生長狀況最佳，菌絲球干重最大可達(dá)2.849g/L，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合茯苓確屬喜酸性食用菌菌種的生物學(xué)特征。

2.2.2 不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表10，由表10可知，隨著發(fā)酵時(shí)間的增加，茯苓菌絲球干重逐步遞增，當(dāng)發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為8d時(shí)，菌絲球干重最大，可達(dá)2.228g/L，隨后開始減少。這個(gè)結(jié)果與很多文獻(xiàn)[11，13，16]報(bào)道的最佳發(fā)酵時(shí)間為5～6d有所出入，其原因可能是本文采用的是100mL的裝液量，較文獻(xiàn)中所述的50mL生長要緩慢，故所需培養(yǎng)時(shí)間相對(duì)要長一些有關(guān)。

表9 培養(yǎng)基不同起始pH對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 9 Effect of initial pH value of medium on liquid fermentation of Poria

2.2.3 不同裝液量對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表11，由表11可知，當(dāng)裝瓶量為70mL時(shí)，茯苓生長狀況最佳，菌絲球干重最大可達(dá)3.906g/L。這與大部分文獻(xiàn)[6，12，16]報(bào)道的最佳裝液量為60mL/250mL稍有差異，其原因可能與本實(shí)驗(yàn)所采用的接種量為10%，而文獻(xiàn)中一般為5%的接種量有關(guān)。

表10 不同發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 10 Effect of different fermentation culture time on liquid fermentation of poria

表11 不同裝液量對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響Table 11 Effect of the different volume of the liquid on liquid fermentation of poria

2.2.4 不同接種量對(duì)茯苓液體發(fā)酵的影響結(jié)果 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表12，由表12可知，接種量為7%時(shí)，茯苓菌種液體發(fā)酵生長狀況最佳，菌絲球干重最大可達(dá)4.786g/L。這與大部分文獻(xiàn)[11-12，16]報(bào)道的最佳接種量為6%略有差異，其原因可能與本實(shí)驗(yàn)所采用的裝液量為100mL/mL，而文獻(xiàn)中一般為50mL/mL的裝液量有關(guān)。2.2.5 最佳培養(yǎng)條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果 當(dāng)綜合采用2.2.1～2.2.4各單因子實(shí)驗(yàn)的最佳培養(yǎng)條件，即搖瓶培養(yǎng)基起始pH為5.5、裝瓶量為70mL/250mL、接種量為7%，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為8d時(shí)，所得菌絲球平均干重為（5.004±0.241）g/L，五個(gè)重復(fù)數(shù)據(jù)中除了一個(gè)數(shù)據(jù)略低于2.1.1～2.2.4各試驗(yàn)結(jié)果的最高值4.786g/L外，其余數(shù)據(jù)均高于此值，這顯示上述驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)條件即為最佳培養(yǎng)條件。至于上述驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的四個(gè)培養(yǎng)條件對(duì)搖瓶發(fā)酵結(jié)果的互作研究，則有待于進(jìn)一步正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行深入研究。

Optimization of poria liquid fermentation condition

TANG Ye-gang，HU Ai-wen
（Wuhan Bioengineering Institute，Wuhan 430415，China）

Liquid fermentation optimal condition of poria No.9 was studied in this paper by designing single factor experiments and optimization of orthogonal experiment.The results showed that the optimum fermentation medium includes glucose 30g，yeast extract and peptone 10g（the ratio was 4∶5），KH2PO41g，MgSO40.5g，VB17.5mg in the water of 1L.The optimum cultivation conditions in the temperature of 25℃，rotation speed 150r/min were as follow：rinitial pH5.5，cultivation time 8d，liquid strain quantity of inoculation 7%，70mL medium/250mL erlenraeyer，and the maximum mycelial dry weight could reach 5.004g/L.

poria；liquid fermentation；orthogonal designing

TS201.7

A

1002-0306（2014）08-0214-05

10.13386/j.issn1002-0306.2014.08.040

2013－08－19

唐業(yè)剛（1979-），男，碩士研究生，講師，研究方向：食用菌液體發(fā)酵及金屬富集。