應(yīng)用EP7-A2方案對唾液酸測定的干擾評價

陳燕敏，芮球紅

應(yīng)用EP7-A2方案對唾液酸測定的干擾評價

陳燕敏，芮球紅

目的探討美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）EP7-A2文件對唾液酸（SA）檢測試劑盒抗干擾性能進(jìn)行評價。方法根據(jù)CLSI EP7-A2文件，對SA檢測試劑盒進(jìn)行干擾評價試驗。結(jié)果配對差異實驗結(jié)果顯示0.03 g/L維生素C、1450 FTU乳糜對SA測定無干擾，342 mol/L游離膽紅素、342mol/L結(jié)合膽紅素、5 g/L血紅蛋白對高低濃度SA測定均有干擾。游離膽紅素、結(jié)合膽紅素對SA測定可產(chǎn)生線性干擾，血紅蛋白對低濃度SA測定產(chǎn)生線性干擾，高濃度SA測定產(chǎn)生非線性干擾。結(jié)論利用外源性的干擾物質(zhì)，依據(jù)EP7-A2文件，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和作圖，是一個非常實用的干擾評價方法。

N-乙酰神經(jīng)氨酸；干擾試驗；EP7-A2文件

唾液酸（SA）存在于人體各種組織，是真核細(xì)胞膜上糖蛋白、糖脂的重要部分，參與機(jī)體的多種生理功能。在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化時起著特殊的作用，其含量與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、轉(zhuǎn)移、浸潤、細(xì)胞黏附性降低、腫瘤抗原性及逃避宿主細(xì)胞的免疫監(jiān)視等密切相關(guān)，是一種廣泛有效的腫瘤標(biāo)志物[1]。根據(jù)美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CLSI）2005年通過的指南文件EP7-A2《臨床化學(xué)干擾試驗—批準(zhǔn)指南》[4]，本文對SA檢測試劑盒抗干擾能力進(jìn)行了評估，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑日立7180全自動生化分析儀：購于日本日立公司；SA檢測試劑盒：購于寧波美康生物科技股份有限公司，批號20130315；游離膽紅素（FBil），批號L9BOL34；結(jié)合膽紅素（CBil），批號JH11-5491，均為百靈威公司生產(chǎn)；血紅蛋白（Hb），批號20121203，上海瑞齊生物科技有限公司；維生素C（vit C），批號：SLBC7863V；中/長鏈脂肪乳注射液（C6-C24），批號：80DH066，華瑞制藥有限公司生產(chǎn)。

1.2 實驗方法

1.2.1 配對差異實驗[2-3]

1.2.1.1 樣本準(zhǔn)備參考EP7-A2文件，選擇2個濃度的新鮮血清作為基礎(chǔ)樣本。用基礎(chǔ)樣本分別以1∶20比例稀釋5種干擾物貯存液、空白液作測試樣本和對照樣本，稀釋后測試樣本中游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白濃度分別是342mol/L、342mol/L、0.03 g/L、1450 FTU和5 g/L。

1.2.1.2 重復(fù)次數(shù)的確定計算最大允許干擾值（dmax）/批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（s）比值，查dmax/s與重測次數(shù)對應(yīng)表[2]，得出2個濃度水平重復(fù)測定次數(shù)。其中s由基礎(chǔ)樣本重復(fù)測定10次計算而得；dmax為各項目臨床意義差別標(biāo)準(zhǔn)。本研究設(shè)定SA的dmax為基礎(chǔ)樣本均值的10%。

1.2.1.3 干擾效應(yīng)分析按EP7-A2文件要求以交互順序進(jìn)行測定，根據(jù)EP7-A2文件進(jìn)行干擾效應(yīng)分析。將所得數(shù)據(jù)進(jìn)行干擾效應(yīng)的“點估計”，即測試樣本均值和對照樣本均值的差值（dobs）與臨界值（dc）比較，如果點估計dobs≥dc說明存在干擾。

1.2.2 干擾劑量效應(yīng)實驗[2-3]參考EP7-A2文件，以高濃度樣本（H）和低濃度樣本（L）按比例混合成5個系列濃度樣本，其配置要求方法為L、75%L+25%H、50% L+50%H、25%L+75H、H。按升序-降序-升序順序重復(fù)測定3次，根據(jù)EP7-A2文件進(jìn)行劑量效應(yīng)分析。

1.3 統(tǒng)計方法采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和作圖。

2 結(jié)果

2.1 配對差異實驗SA低濃度樣本均值為64.7 mg/dl、s為0.21；高濃度樣本均值為91.5 mg/dl、s為0.19。高、低濃度水平重測次數(shù)均為3次。0.03 g/L維生素C、1450 FTU乳糜對SA測定均無干擾；342mol/L游離膽紅素、342mol/L結(jié)合膽紅素、5 g/L血紅蛋白對高、低濃度SA檢測有干擾。見表1、2。

2.2 劑量效應(yīng)實驗游離膽紅素、血紅蛋白對低濃度SA測定可產(chǎn)生線性負(fù)干擾，結(jié)合膽紅素對低濃度SA測定產(chǎn)生線性正干擾（=0.003+61.08，2=0.9389）；非結(jié)合膽紅素和血紅蛋白對低濃度SA測定產(chǎn)生線性負(fù)干擾（分別為=－0.0074+57.8，2=0.9334；=－0.24+58.02，2=0.9698）干擾效應(yīng)結(jié)果見封四彩圖14。游離膽紅素、結(jié)合膽紅素對高濃度SA測定可產(chǎn)生線性負(fù)干擾（分別為=－0.0035+81.6，2=0.9574；=－0.0011+87.352，2=0.9238），血紅蛋白對高濃度SA測定產(chǎn)生非線性干擾（= 0.24692－1.6503+82.551，2=0.9475），干擾效應(yīng)結(jié)果見封四彩圖15。

表1 游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對低濃度SA測定的干擾

表2 游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對高濃度SA測定的干擾

3 討論

SA作為腫瘤的一種非特異性標(biāo)志物，被廣泛應(yīng)用于肝癌、肺癌、胃癌、惡性血液病及頭頸鱗狀細(xì)胞癌等診斷及鑒別中，也被用作常見惡性腫瘤分期的參考指標(biāo)及病例治療效果的評價指標(biāo)[4]。

近年來，干擾物質(zhì)作為影響臨床化學(xué)檢驗結(jié)果的一大因素而越來越受到重視。對臨床實驗室來說，分析干擾評價試驗可以驗證和確認(rèn)干擾聲明，研究明確的干擾物質(zhì)引起的結(jié)果差異[3]。CLSI通過不懈努力和完善后于2005年11月通過了EP7-A2文件，EP7-A2提供了2種分析干擾評價方案：（1）干擾篩選，（2）利用患者樣本作偏倚分析。本研究利用EP7-A2文件“干擾篩選”方法評估臨床常見的干擾物游離膽紅素、結(jié)合膽紅素、維生素C、乳糜和血紅蛋白對SA試劑測定的影響，初步對其臨床應(yīng)用抗干擾性能進(jìn)行評價，結(jié)果顯示，342 mol/L游離膽紅素、342 mol/L結(jié)合膽紅素和5 g/L血紅蛋白對高低濃度SA測定有干擾。同時根據(jù)文件規(guī)定，對于經(jīng)干擾篩查證明對被評價方法有明顯干擾作用的可能干擾物游離膽紅素、結(jié)合膽紅素和血紅蛋白，對其在不同濃度下對測定結(jié)果的干擾效應(yīng)進(jìn)行了評價，5個濃度系列的劑量效應(yīng)實驗結(jié)果顯示，游離膽紅素、結(jié)合膽紅素對SA測定可產(chǎn)生線性干擾，血紅蛋白對低濃度SA測定產(chǎn)生線性干

擾，高濃度SA測定產(chǎn)生非線性干擾。檢測試劑的抗干擾物質(zhì)的能力是對檢測結(jié)果質(zhì)量靠性的保證[5]。利用外源性的干擾物質(zhì)，依據(jù)EP7-A2文件，應(yīng)用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析和作圖，是一個非常實用的干擾評價方法。

[1]Varki A.Sialic acids in human health and disease[J].Trends In Molecular Medicine,2008,14(8):351-60.

[2]Wayne PA.EP7-A Interference Testing in Clinical Chemistry[S].Clinical and Laboratory Standards Institute,2002.

[3]徐建華,何敏,柯培鋒,等.CLSIEP7-A2文件在臨床化學(xué)分析干擾試驗中的應(yīng)用評價[J].檢驗醫(yī)學(xué),2010,25(12):97l-974.

[4]劉沛,王舒,李變榮.血清唾液酸在惡性腫瘤診斷中的臨床應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2012(06):687-688.

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.11.071

R446

A

1671-0800(2014)11-1449-02

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