術(shù)前消化道惡性腫瘤患者外周血Th1/Th2細(xì)胞外因子漂移分析

凌雨田，凌志強(qiáng)，鄭智國(guó)，姜志明

術(shù)前消化道惡性腫瘤患者外周血Th1/Th2細(xì)胞外因子漂移分析

凌雨田，凌志強(qiáng)，鄭智國(guó)，姜志明

目的探討術(shù)前消化道腫瘤患者血清中Th1/Th2細(xì)胞因子的漂移情況。方法收集食管癌患者163例，胃癌患者24例，腸癌患者80例，另選取70例健康體檢者（對(duì)照組）進(jìn)行試驗(yàn)。流式細(xì)胞小球微陣列術(shù)(CBA)檢測(cè)兩組血清中Th1類細(xì)胞因子[干擾素（IFN-）、腫瘤壞死因子-（TNF-）、白介素-2（IL-2）]與Th2類細(xì)胞因子（[白介素-10（IL-10）、白介素-5（IL-5）、白介素-4（IL-4）]的水平。結(jié)果食管癌組的IL-5水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)；胃癌組的IFN-水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)，IL-4水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)；腸癌組的IL-5水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)，IL-4水平與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(＜0.05)。食管癌和腸癌患者為Th2上漂，胃癌患者為Th1、Th2雙上漂。結(jié)論分析細(xì)胞因子漂移變化特點(diǎn),以了解患者Th1/Th2類細(xì)胞因子的免疫調(diào)節(jié)功能狀況,能為術(shù)前消化道腫瘤患者的免疫治療提供依據(jù)。

消化道腫瘤；細(xì)胞因子；流式細(xì)胞小球微陣列術(shù)

人體內(nèi)的Th1類細(xì)胞因子[干擾素（IFN-）、腫瘤壞死因子-（TNF-）、白介素-2（IL-2）]與Th2類細(xì)胞因子[（白介素-10（IL-10）、白介素-5（IL-5）、白介素-4（IL-4）]保持著相對(duì)的平衡，這種平衡的打破預(yù)示著疾病的發(fā)生。由于細(xì)胞因子功能的多效性與細(xì)胞因子之間存在相互影響與轉(zhuǎn)化[1-2]，單個(gè)細(xì)胞因子的變化難以清楚的判斷與腫瘤發(fā)生發(fā)展的關(guān)系，Th1/Th2的分類使腫瘤細(xì)胞免疫學(xué)的概念清晰化[3]，近年來研究Th1/Th2兩類細(xì)胞因子的漂移方向逐漸成為熱點(diǎn)。本研究對(duì)血清中的細(xì)胞因子進(jìn)行檢測(cè)，以了解術(shù)前消化道腫瘤患Th1/Th2的漂移狀態(tài)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取浙江省腫瘤醫(yī)院2012年1月至2013年6月消化道腫瘤患者267例。男198例，女69例；年齡19～78歲，中位年齡50歲；其中食管癌163例，男138例，女25例；胃癌24例，男19例，女5例；腸癌80例，男41例，女39例。對(duì)照組為健康體檢者70例。男19例，女51例；年齡20～53歲，中位年齡36歲。

1.2 方法 臨床靜脈真空管封閉式采血2 ml，半小時(shí)內(nèi)送檢，以防止細(xì)胞自身代謝分泌細(xì)胞內(nèi)因子干擾測(cè)定，高速離心后吸取血清50l到流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)樣品管，加上6種細(xì)胞因子的混合微球50l，充分混勻后在室溫避光反應(yīng)3h。然后每管中加1ml洗液，2000r/min離心5min，棄上清液。再加120 l洗液，混勻，3～5 min后立即上機(jī)采集數(shù)據(jù)。用試劑盒內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品做10個(gè)濃度梯度樣本，用流式細(xì)胞小球微陣列術(shù)(CBA，美國(guó)BD公司)分析軟件自動(dòng)繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。并將樣品數(shù)據(jù)與標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合，自動(dòng)計(jì)算出血清中各種細(xì)胞因子水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用檢驗(yàn)。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 流式細(xì)胞小球微陣列術(shù)檢測(cè)效果橫坐標(biāo)是包被了6種特異性抗體的捕獲微球，縱坐標(biāo)是結(jié)合了細(xì)胞因子的微球的熒光強(qiáng)度，強(qiáng)度越大說明細(xì)胞因子水平越高。見圖1。

表1 各組血清細(xì)胞因子含量比較pg/ml

2.2 食管癌組的IL-5水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=4.23，＜0.05)；胃癌組的IFN-水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=4.27，＜0.05)，IL-4含水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=4.26，＜0.05)；腸癌組的IL-5水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=4.83，＜0.05)，IL-4水平與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(=9.97，＜0.05)。見表1。

3 討論

人體內(nèi)的細(xì)胞外因子分成Th1/Th2兩類，Th1主導(dǎo)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，Th2主導(dǎo)機(jī)體的體液免疫功能。雖然人體抗腫瘤免疫效應(yīng)機(jī)制包括細(xì)胞免疫和體液免疫兩個(gè)方面，但由于腫瘤細(xì)胞的抗原遞呈能力的缺陷導(dǎo)致腫瘤的體液免疫效果不明顯，而Th1介導(dǎo)的對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷與吞噬作用成為人體抗腫瘤的主要機(jī)制。一旦Th1失去優(yōu)勢(shì)，機(jī)

體將發(fā)生免疫逃避導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生[4-5]。

手術(shù)對(duì)患者細(xì)胞因子的水平影響較大[6]，因此本研究選取3種術(shù)前的消化道腫瘤患者，意在探索消化道腫瘤發(fā)生時(shí)細(xì)胞因子的原始狀態(tài)，結(jié)果表明3種術(shù)前消化道腫瘤不同程度的Th2上漂，提示Th1向Th2的漂移與消化道腫瘤的發(fā)生相關(guān)，這與大多數(shù)學(xué)者的研究一致。建議細(xì)胞因子檢測(cè)可用于消化道腫瘤患者的初篩檢查。本研究中消化道腫瘤IL-5、IL-4的強(qiáng)勢(shì)表達(dá)，提示IL-5、IL-4的強(qiáng)勢(shì)表達(dá)抑制了Th1類細(xì)胞因子的分泌，引起Th1/Th2失衡。另外，腫瘤細(xì)胞自身也分泌細(xì)胞因子。有研究表明腫瘤細(xì)胞本身也表現(xiàn)Th2細(xì)胞因子模式。這種模式加劇了Th2的優(yōu)勢(shì)性，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

目前臨床上糾正Th1/Th2失衡的手段有直接注射Ⅰ型細(xì)胞因子或者用抗Ⅱ型細(xì)胞因子抗體進(jìn)行逆轉(zhuǎn)，或通過主動(dòng)免疫方式激活Th1。值得注意的是，大多數(shù)研究者把腫瘤患者的細(xì)胞因子模式分為兩型：Th1漂移型與Th2漂移型。而本研究中的胃癌呈現(xiàn)Th1/Th2同時(shí)上漂，屬于雙漂移。筆者認(rèn)為細(xì)胞因子的分型模式過于簡(jiǎn)單，不利于臨床進(jìn)行分類的個(gè)體化免疫治療。有學(xué)者就將漂移類型分為8型。除了有Th1漂移型和Th2漂移型外,還存在紊亂型和雙上雙下型[7]。這種分型更利于精確的了解患者的細(xì)胞因子狀態(tài)，以便合理選擇臨床細(xì)胞因子藥物及監(jiān)測(cè)療效和療程。

總之，糾正消化道腫瘤患者失衡的Th1/Th2細(xì)胞因子狀態(tài),逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞或其宿主機(jī)體的Th1/Th2的異常漂移,將非常有利于以細(xì)胞免疫為主的抗腫瘤免疫能力的恢復(fù),對(duì)減少消化道腫瘤發(fā)生有重要的意義。

圖1 Th1/Th2細(xì)胞因子熒光強(qiáng)度分析

[1]VandenBerghe W,Vermeulen L,DeWilde G, et al.Signal transduction by tumor necrosis factor and gene regulation of the inflammatorycytokineinterleukin-6[J].BiochemPharmacol,2000,60(8):1185-1195.

[2]Salazar-Onfray F.Interleukin-10:a cytokine used by tumors to escape immunosurveillance[J].Med Oncol,1999,16(2):86-94.

[3]Th1/Th2細(xì)胞的免疫功能變化與抗腫瘤免疫[J].現(xiàn)代診斷與治療,2009,20(3):162-164.

[4]Aniszewski JP,Valyasevi RW,Bahn RS. Relationshipbetweendiseasedurationand predominant orbital T cellsubset inGraves'ophthalmopathy[J].J Clin Endocrinol Metab,2000,85(2):776-780.

[5]MurakamiH,Ogawara H,Hiroshi H.Th1/ Th2cells inpatientswithmultiplemyeloma [J].Hematology,2004,9(1):41-45.

[6]魏煜程,胡風(fēng)標(biāo),沈毅,等.食管鱗癌患者手術(shù)前后外周血Th1、Th2類細(xì)胞因子的變化及其臨床意義[J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,24(11):1271-1273.

[7]張少云,王春利.流式細(xì)胞微球芯片捕獲技術(shù)在食管癌患者Th1/Th2細(xì)胞因子譜型分析中的意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2005,5(28):5.

10.3969/j.issn.1671-0800.2014.11.039

R735

A

1671-0800(2014)11-1398-02

310022杭州，浙江省腫瘤醫(yī)院

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