1型糖尿病患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞/Th17細(xì)胞失衡的臨床意義

賴忠慶

1型糖尿病患者外周血調(diào)節(jié)性T細(xì)胞/Th17細(xì)胞失衡的臨床意義

賴忠慶

目的探討CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞及白介素17（IL-17）在1型糖尿病患者外周血中的表達(dá)及意義。方法采用三色直接熒光素標(biāo)記法和多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)檢測16例1型糖尿病患者及18例正常對(duì)照外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞的比例，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法檢測血清IL-17水平。結(jié)果1型糖尿病組外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞比率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＜0.05）；1型糖尿病組血清IL-17水平均較正常對(duì)照組明顯升高（＜0.05）；1型糖尿病患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞與血清IL-17明顯負(fù)相關(guān)（=－0.619，=0.011）。結(jié)論1型糖尿病存在調(diào)節(jié)性T細(xì)胞/Th17細(xì)胞失衡，這種失衡或許與1型糖尿病的發(fā)病有關(guān)。

糖尿病，1型；白介素17；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞

1 型糖尿病是一種由T細(xì)胞介導(dǎo)的胰島產(chǎn)生細(xì)胞損害所引起的自身免疫性疾病?，F(xiàn)今的觀點(diǎn)認(rèn)為有兩種T細(xì)胞群與1型糖尿病的疾病發(fā)展相關(guān)。一種細(xì)胞群是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg），可控制自身免疫反應(yīng)及炎癥細(xì)胞，保護(hù)發(fā)生炎癥的組織阻止有害的免疫反應(yīng)[1]。另一種細(xì)胞群是Th17細(xì)胞，與炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)病相關(guān)[2]。包括Th17細(xì)胞在內(nèi)的炎性細(xì)胞可被Treg細(xì)胞調(diào)控。Treg細(xì)胞可阻止自身免疫疾病的發(fā)生。有很多研究顯示，Treg細(xì)胞的減少或功能損害能引起1型糖尿病患者明顯的炎性反應(yīng)[3-4]。考慮到Treg細(xì)胞和Th17的平衡在自身免疫或炎性疾病發(fā)病中起到重要作用，本研究探討1型糖尿病患者是否存在該兩種細(xì)胞群的失衡?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2012年7月至2014年7月浙江省象山縣第一人民醫(yī)院內(nèi)分泌科收治的16例1型糖尿病住院患者，均為初次診斷（發(fā)病在6個(gè)月以內(nèi)），均符合2008年美國糖尿病協(xié)會(huì)（ADA）的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]。其中男6例，女10例；年齡8～19歲，平均（16.3±4.2）歲；病程1～6個(gè)月，平均（3.2±0.5）月。18例正常對(duì)照組為同期健康志愿者，其中男8例，女10例；年齡為9～20歲，平均（17.1±4.5）歲。所有患者均資料完整，排除合并感染、酮癥

酸中毒、嚴(yán)重器官損害、腫瘤及其它自身免疫疾病的患者。兩組患者一般資料差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（＞0.05）。

1.2 流式檢測

1.2.1 試劑和儀器FITC標(biāo)記的鼠抗人CD4抗體(克隆號(hào)RPA-T4)、CY標(biāo)記的鼠抗人CD25抗體(克隆號(hào)M-A251)及PE標(biāo)記的鼠抗人CD127抗體(克隆號(hào)Hil-7R-M21)均來自美國BD公司。FOXP3試劑盒（亞型為Rat IgG2a，克隆號(hào)PCH101）購自美國eBioscience公司。溶血?jiǎng)楸本┚拦綟lowCytometry Lysing Solution。流式細(xì)胞儀型號(hào)為FACsalibur，BD公司產(chǎn)品。

1.2.2 檢測方法受試對(duì)象于早晨空腹時(shí)采集靜脈血2ml，肝素抗凝，加入CD25-CY、CD4-FITC各10 l及CD127-PE 2 l，混勻后室溫下避光反應(yīng)15min后加入2ml溶血?jiǎng)‵lowCytometryLysingSolution），37℃水溶約10min，待完全溶血后，立即上流式細(xì)胞儀檢測。每次檢測前常規(guī)用熒光微球（FlowCheck）和同型陰性對(duì)照試劑對(duì)儀器進(jìn)行質(zhì)量監(jiān)測和調(diào)控，并用標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)各熒光素之間的干擾進(jìn)行補(bǔ)償，排除相互干擾。檢測時(shí)先根據(jù)前向角（FSC）和側(cè)向角（SSC）散射光信號(hào)，對(duì)淋巴細(xì)胞群進(jìn)行設(shè)門，每次獲取設(shè)門內(nèi)細(xì)胞10000個(gè)以上并保存數(shù)據(jù)，然后計(jì)算CD25+CD127low/-T細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的百分比。

1.3 白介素17（IL-17）檢測用肝素鈉抗凝管采集患者及健康對(duì)照者早晨空腹時(shí)靜脈血2 ml用于血漿IL-17的測定。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)測定。每個(gè)樣本取2ml全血以3000r/min離10min(離心半徑為4cm)，吸出上層血漿置于－20℃冰箱保存，集中測試。嚴(yán)格按照說明書步驟進(jìn)行操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率表示，采用2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用spearman相關(guān)分析。＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞比率比較1型糖尿病組外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞比率明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（[2.20±0.88）%（3.92±0.64）%，=4.014，＜0.05]。見封三彩圖9。

2.2 兩組患者血清IL-17水平比較1型糖尿病組血清IL-17水平均較正常對(duì)照組明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（[18.70±6.98）pg/ml（7.31±2.74）pg/ml，=2.836，＜0.05]。見封三彩圖10。

2.3 1型糖尿病組患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞與血清IL-17相關(guān)性分析1型糖尿病患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞與血清IL-17明顯負(fù)相關(guān)（=－0.619，=0.011）。見封三彩圖11。

3 討論

1型糖尿病是由多種免疫細(xì)胞參與的炎癥反應(yīng)性疾病。研究表明多種免疫細(xì)胞尤其是CD4+T淋巴細(xì)胞，包括Thl、Th2、Thl7、Treg等多種細(xì)胞亞群在疾病發(fā)展過程中發(fā)揮不同作用，如Treg維持免疫平衡狀態(tài)，Thl7則與炎癥反應(yīng)有關(guān)。

Treg細(xì)胞是一群具有重要作用的細(xì)胞群，它不僅在維持自身抗原耐受中起主要作用，而且對(duì)于維持外周免疫耐受有重要意義[6]。Liu等[7]提出CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞可更好的代表Treg細(xì)胞。已有研究指出Treg細(xì)胞可有效控制多種炎癥[8]。動(dòng)物試驗(yàn)已證實(shí)過繼轉(zhuǎn)移Treg細(xì)胞可緩解炎癥，而Treg細(xì)胞的減少可加重炎癥反應(yīng)[9]。

Th17細(xì)胞是一個(gè)新的TH效應(yīng)細(xì)胞，具有不同的細(xì)胞因子和轉(zhuǎn)錄因子分化特征，可產(chǎn)生其標(biāo)志性的細(xì)胞因子IL-17[10]。已證實(shí)IL-17可誘導(dǎo)其它的致炎性細(xì)胞因子如IL-6、IL-21、IL-22、趨化因子和急性期蛋白的產(chǎn)生，與多種炎性疾病如類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、銀屑病及炎癥性腸病有關(guān)[11]。

Treg細(xì)胞與Th17細(xì)胞之間的平衡控制著炎癥反應(yīng)，并與免疫系統(tǒng)的正常功能有關(guān)。Treg細(xì)胞的減少和/或Th17細(xì)胞的增加可誘導(dǎo)炎性反應(yīng)，進(jìn)而加速糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生[12]。本研究發(fā)現(xiàn)1型糖尿病患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞比率明顯降低，而血清IL-17水平較高。這證實(shí)了1型糖尿病患者Treg/Th17平衡被打破，可能與1型糖尿病的發(fā)病存在一定的關(guān)系。同時(shí)筆者發(fā)現(xiàn)1型糖尿病患者外周血CD4+CD25+CD127low/-T細(xì)胞與血清IL-17明顯程負(fù)相關(guān)。這提示了1型糖尿病可能存在IL-17的抑制障礙。筆者認(rèn)為1型糖尿病患者Treg細(xì)胞的減少導(dǎo)致了Th17細(xì)胞的失控。

目前，1型糖尿病并無有效的治療可以直接針對(duì)抗體，從而阻止胰島細(xì)胞的進(jìn)行性破壞，考慮到Treg細(xì)胞的減少參與了1型糖尿病患者體內(nèi)的免疫反應(yīng)異常，故應(yīng)該更深入的研究Treg/Th17的分化以及調(diào)控機(jī)制。增加Treg細(xì)胞和/或減少IL-17或許對(duì)1型糖尿病的治療將有重大的意義。

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10.3969/j.issn.1671-0800.2014.11.032

R587.1

A

1671-0800(2014)11-1386-03

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