麻桔喘咳口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

呼梅，安小梅，盧云

·炮制制劑·

麻桔喘咳口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

呼梅1，安小梅2，盧云1

目的：建立麻桔喘咳口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用TLC法對麻桔喘咳口服液中麻黃、瓜蔞皮、桔梗、苦杏仁進(jìn)行定性鑒別。采用HPLC法測定制劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量。結(jié)果：所采用的TLC方法能有效鑒別出麻黃、瓜蔞皮、桔梗、苦杏仁。鹽酸麻黃堿峰在0.0798 μg～0.798 μg濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.99997）。鹽酸偽麻黃堿在0.0875 μg～0.875 μg濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系（r=0.99993）。兩種生物堿的平均回收率為101.1%，RSD為0.91%。結(jié)論：該方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，專屬性強(qiáng)，可用于麻桔喘咳口服液的質(zhì)量控制。

]麻桔喘咳口服液；薄層色譜法；麻黃；瓜蔞皮；桔梗；苦杏仁；高效液相色譜法

麻桔喘咳口服液為我院臨床經(jīng)驗方，目前正在申報醫(yī)院制劑，由麻黃、桔梗、苦杏仁等8味藥組成，具有宣肺平喘，豁痰開胸的功效。用于痰濁內(nèi)阻所致肺脹，喘哮，咳嗽等癥。為有效控制該制劑質(zhì)量，本試驗采用薄層鑒別色譜法對制劑中主要藥味麻黃、瓜蔞皮、桔梗、苦杏仁進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法對方中麻黃進(jìn)行定量分析。

1 材料

1.1 儀器

HP-1100高效液相色譜儀（美國惠普）；二極管陣列檢測器；惠普四元梯度泵； BP211D電子分析天平（Sartorius，德國），KH3200型超聲波清洗器（220V，50Hz）；薄層色譜層析缸等。

1.2 藥品與試劑

鹽酸麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：171241-200506）；鹽酸偽麻黃堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號171241-200505）；麻黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號：121051-200704）；桔梗對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號：121028-200507）；瓜蔞皮對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號121185-200802）；苦杏仁苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110820-200403）；乙腈、甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純；水為重蒸餾水；硅膠G（青島海洋化工廠）；麻桔喘咳口服液（批號20120601,20120602,20120603）及其陰性對照樣品均由成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院制劑室提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別試驗

2.1.1 麻黃 取本品10 mL，加濃氨試液2 mL，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－濃氨試液(20:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性無干擾，結(jié)果見圖1。

圖1 麻黃薄層鑒別

2.1.2 瓜蔞皮 取本品20 mL, 加三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取瓜蔞皮對照藥材2 g, 加乙醇20 mL, 超聲處理30分鐘, 濾過, 濾液蒸干, 殘渣加甲醇1 mL使溶解, 作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇（10:1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性無干擾，結(jié)果見圖2。

圖2 瓜蔞皮薄層鑒別

2.1.3 桔梗 取本品20 mL，加鹽酸1 mL，加熱煮沸5分鐘，放冷，用三氯甲烷振搖提取2次，每次20 mL，合并三氯甲烷液，加水洗滌2次，每次20 mL，棄去水液，三氯甲烷液濃縮至2 mL，作為供試品溶液。另取桔梗對照藥材0.5 g，加水20 mL，煎煮10分鐘，濾過，濾液加鹽酸0.5 mL，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙醚(2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。陰性無干擾，結(jié)果見圖3。

圖3 桔梗薄層鑒別

2.1.4 苦杏仁 取本品20 mL，加水飽和正丁醇振搖提取2次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨水洗滌2次，每次20 mL，合并正丁醇層，蒸干，殘渣加2 mL甲醇溶解作為供試品溶液。另取苦杏仁苷對照品適量,加甲醇振搖溶解，制成1 mL含2 mg的對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）試驗，吸取上述兩種溶液各5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯-甲醇－水(15:40:22:10)，5～10℃下放置12 h的下層溶液為展開劑，展開，取出，立即用0.8%磷鉬酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品的相應(yīng)位置上，均顯相同顏色斑點。陰性無干擾，結(jié)果見圖4。

圖4 苦杏仁薄層鑒別

2.2 鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿總堿的含量測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil-C18柱（250×4.6 mm，5 μm）；流動相；乙腈-0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（6:94）；流速：1mL．min-1；檢測波長：210nm。柱溫：30℃，進(jìn)樣量：5 μL。

2.2.2 溶液的制備

（1）對照品溶液的制備 精密稱取鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿對照品2.85mg和3.12mg，加甲醇制成每1 mL含鹽酸麻黃堿114 μg、鹽酸偽麻黃堿125 μg的混合溶液，搖勻，作為對照品溶液。

（2）供試品溶液的制備 精密吸取本品5 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，取續(xù)濾液，即得。

（3）麻黃陰性對照溶液的制備 精密吸取陰性樣品（缺麻黃）5 mL，按 “（2）”項下制備方法制備麻黃的陰性對照溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

（1）專屬性試驗 分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各5 μL，按上述色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)行測定。供試品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的色譜峰分離度大于1.5，陰性無干擾，見圖5。

圖5 高效液相色譜圖

（2）線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸麻黃堿（0.114 mg．mL-1）和鹽酸偽麻黃堿（0.125 mg．mL-1）混合對照品溶液0.7 μL、1 μL、3 μL、5 μL、7 μL分別進(jìn)樣，按上述色譜條件測定，以峰面積為縱坐標(biāo)Y，進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：鹽酸麻黃堿峰在0.0798 μg-0.798 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程是Y=2097.8X-5.858，R=0.99997(n=5)；鹽酸偽麻黃堿在0.0875 μg -0.875 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程是Y=2029.8X-4.221，R=0.99993(n=5)。

（3）精密度試驗 精密吸取“（1）”項下的混合對照品溶液5 μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示，鹽酸麻黃堿的RSD為1.35%，鹽酸偽麻黃堿的RSD為0.99%，表明精密度良好。

（4）穩(wěn)定性試驗 精密吸取同一批（批號20120601）供試品溶液5μL，于 0h、2h、4h、6h、10h分別進(jìn)樣，測定鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿峰面積，結(jié)果10h內(nèi)其峰面積基本不變，鹽酸麻黃堿RSD為1.88%，鹽酸偽麻黃堿RSD為1.50%，表明供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

（5）重復(fù)性試驗 取同一批號樣品（批號20120601）6份，按“（2）”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定，樣品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿總含量的平均值為0.8252 mg．mL-1，RSD值為1.44%，說明該方法的重復(fù)性良好。

（6）加樣回收率試驗 精密量取已知含量的樣品（批號：20120601）6份，每份1 mL，分別加入鹽酸麻黃堿（0.1945 mg．mL-1）和鹽酸偽麻黃堿（0.2183 mg．mL-1）對照品混合溶液各 2 mL，按“（2）”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定含量，計算回收率，兩種生物堿的平均回收率為101.1%，RSD= 0.91%，表明該方法的準(zhǔn)確度較好。

（7）樣品測定 取批號20120601,20120602, 20120603的麻桔喘咳口服液樣品，按溶液的制備“（2）”項下方法，制備三批中試樣品的供試品溶液，按上述色譜條件測定含量，結(jié)果見表1。

表1 麻桔喘咳口服液中試樣品的含量測定（n=2）

3 討論

對制劑中瓜蔞皮的薄層鑒別參考藥典及相關(guān)文獻(xiàn)，對薄層的展開系統(tǒng)，曾選用石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯(4:1)[1]、石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯－甲醇（6:1:1）[2]的展開系統(tǒng)，結(jié)果樣品的斑點較模糊，分離效果不佳，后選用三氯甲烷-甲醇（10:1）[3]的展開系統(tǒng)，瓜蔞皮的分離效果較好。對桔梗的提取條件進(jìn)行了優(yōu)化，藥典的制備方法，操作復(fù)雜，耗費(fèi)時間，考察了鹽酸煮沸水提方法，操作簡便，樣品的斑點清晰，分離效果好。

對制劑中麻黃的含量測定參考藥典方法[4]，供試品中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿與其他組分的分離不佳，峰形不對稱。參考相關(guān)文獻(xiàn)[5～7]，采用Diamonsil-C18柱，曾試用流動相為乙腈:0.02mol/L磷酸二氫鉀（含0.2%三乙胺）（6:94）、乙腈: 0.1%磷酸（6:94）、乙腈：0.1%磷酸（含0.1%三乙胺）（6:94），結(jié)果后者分離度大于1.5，鹽酸麻黃堿理論塔板數(shù)大于3000，且陰性無干擾。故試驗采用乙腈-0.1%磷酸（含0.1%的三乙胺）（6:94）作為流動相。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:105.

[2] 曹冬紅,蘇輝,鄧澤宜.咳咳止口服液質(zhì)控方法的研究[J].中南藥學(xué),2007,5(2):185.

[3] 周琴妹,邵家德. 冠心平片鑒別及含量測定方法研究[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2007, 18(5):1189.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:300.

[5] 太成梅, 那微, 趙曉霞,等.HPLC法測定小兒肺熱咳喘口服液中鹽酸麻黃堿及鹽酸偽麻黃堿的含量[J] .中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2010,11(5):380.

[6] 溫暢. 關(guān)于HPLC對小兒止咳劑中鹽酸麻黃堿的含量的測定[J].中國中醫(yī)藥咨訊,2010,10:81.

[7] 郭東艷,史亞軍,宋逍. HPLC 測定復(fù)方麻黃止咳顆粒中鹽酸麻黃堿的含量[J] .陜西中醫(yī),2005,26(4):373.

（責(zé)任編輯：李蕓霞）

Study on the quality standard of Majie Chuanke Oral Liquid/

HU Mei1, AN Xiao-mei2, LU Yun1//(1. Affliated hospital of Chengduuniversity of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China ; 2.Zhucheng People’s Hospital, Zhucheng 262200, Shandong)

Objective: To establish the quality standard of Majie Chuanke Oral Liquid. Method: TLC was used for the qualitative identification of Mahuang, Gualoupu, Jiegeng, and Kuxingren in Majie Chuanke Oral Liquid. HPLC was used to simultaneously detect the contents of ephedrine hydrochloride and pseudoephedrine hydrochloride in preparation. Result: The TCL approach could effectively identify Mahuang, Gualoupu, Jiegeng, and Kuxingren. HPLC experiment showed good linear relationship at the ranges of 0.0798 μg ～0.798 μg for ephedrine hydrochloride(r=0.99997)and 0.0875 μg～0.875 μg for pseudoephedrine hydrochloride(r=0.99993). The average recoveries were 101.1% with RSD of 0.91% for two kinds of alkaloids. Conclusion: The method has characteristics of good specifcity, sensitivity and reproducibility, so it can be used for the quality control of Majie Chuanke Oral Liquid.

Majie Chuanke Oral Liquid; TLC; Mahuang; Gualoupu; Jiegeng; Kuxingren；HPLC

R 917

A

1674-926X(2014)02-016-03

2009年成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院院基金重點項目（Y2009046）

1.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，四川 成都 610072；

2.山東省諸城市人民醫(yī)院，山東 諸城 262200

呼梅，碩士，副主任藥師，從事中藥質(zhì)量控制與新制劑研發(fā)方向研究

Tel:028-87783257 Email:humei1222@sina.com

2013-07-31