羧甲基玉米朊阿司匹林腸溶微丸的制備及體外釋放度考察

張 祥，孫亞楠，丁 啟，劉 力，魯傳華（安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，合肥 230031）

溶材料有蟲膠、鄰苯二甲酸乙酸纖維素、丙烯酸樹脂等[2]。阿司匹林通過抑制花生四烯酸代謝過程中的環(huán)氧化酶，使前列腺素合成減少而產(chǎn)生強(qiáng)大的解熱鎮(zhèn)痛抗炎作用，但其最大的缺點(diǎn)是對(duì)胃黏膜有刺激作用，常使患者出現(xiàn)惡心、嘔吐，甚至

腸溶制劑是利用腸溶材料在低pH下不溶、在高pH下可溶的特性建立的一種給藥系統(tǒng)[1]，通常是在口服制劑外部包裹腸溶性材料制得。腸溶制劑能防止某些藥物對(duì)胃黏膜的刺激，增加酸敏感藥物的穩(wěn)定性，延緩藥物吸收時(shí)間等。常用的腸潰瘍、出血的副作用[3]。為了克服這一缺點(diǎn)，阿司匹林通常制成腸溶制劑[4]。玉米朊（Zein）或稱玉米醇溶蛋白，是一種天然的生物可降解材料，在酸和弱堿環(huán)境下均不溶解。羧甲基玉米朊（CM-Zein）是筆者用羧甲基對(duì)Zein結(jié)構(gòu)進(jìn)行修飾后制得的產(chǎn)品，其可在pH＞4.5的水中溶解，符合腸溶材料的特點(diǎn)。本研究利用自制羧甲基玉米朊的腸溶性質(zhì)，探索采用擠壓滾圓法制備阿司匹林腸溶微丸，并與自制阿司匹林微丸作比較，考察其體外釋放行為；同時(shí)以大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，以阿司匹林微丸為參比制劑，考察其體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)特征。

1 材料

1.1 儀器

ALC-210.4分析天平（德國(guó)Sartorius公司）；擠出滾圓機(jī)（重慶英格制藥機(jī)械有限公司）；ZRS-8G智能溶出儀（天津大學(xué)無線電廠）；LC-20A型高效液相色譜（HPLC）儀（日本島津公司）；TGL-16C高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠，離心半徑：6.2 cm）；WH-3微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；金尼克超聲清洗器（合肥金尼克機(jī)械制造有限公司）。

1.2 藥品與試劑

阿司匹林原料藥（批號(hào)：09112025，純度：99.5%）和阿司匹林對(duì)照品（批號(hào)：20120616，純度：99.9%）均由山東新華制藥廠提供；水楊酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：20120713，純度：＞99%）；羧甲基玉米朊、阿司匹林腸溶微丸（批號(hào)：20130301，規(guī)格：每丸3 mg）、阿司匹林微丸（淀粉微丸，批號(hào)：20130401，規(guī)格：每丸3 mg）均由安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥劑實(shí)驗(yàn)室自制；甲醇為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

1.3 動(dòng)物

2 方法與結(jié)果

2.1 微丸的制備

先將過100目的阿司匹林原料藥粉末和羧甲基玉米朊的粉末按1 ∶2質(zhì)量比混合，加入適量的4%的乙醇溶液為黏合劑，充分?jǐn)嚢杈鶆蛑瞥绍洸模粚⒒旌虾玫能洸牡谷霐D出機(jī)中，在擠出螺桿推力作用下濕料經(jīng)孔板孔徑擠出，此時(shí)軟材呈直徑均勻的細(xì)條狀；將擠出的條狀軟材倒入滾圓機(jī)中，在高速（1 100 r/min）旋轉(zhuǎn)的齒板上，條狀顆粒滾圓成圓球；將制備好的濕顆粒在60 ℃下干燥，分篩，直至獲得粒徑約1 mm的微丸，即阿司匹林腸溶微丸[5]。另以淀粉代替羧甲基玉米朊按上述方法制備阿司匹林微丸。

2.2 體外分析方法[6]

采用HPLC法。色譜條件：Kromasil C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（50 ∶50），流速為1.0 ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)為276 nm；柱溫為30 ℃；進(jìn)樣量為20 μl。該色譜條件下，阿司匹林峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（c）的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝8 711.8c－2 167.2（r＝0.999 9，n＝7），阿司匹林檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為1.0～100 μg/ml。

2.3 體外釋放度的測(cè)定

2.3.1 釋放介質(zhì)的選擇。參照2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄ⅩD第二法腸溶制劑中的（二）法[7]，選擇0.1 mol/L鹽酸溶液（即人工胃液）900 ml為前2 h的釋放介質(zhì)，pH 6.8磷酸鹽緩沖溶液（即人工腸液）900 ml為2 h后的釋放介質(zhì)，可滿足漏槽條件。

2.3.2 測(cè)定條件。采用溶出度測(cè)定法（2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄ⅩC第二法）測(cè)定阿司匹林腸溶微丸和阿司匹林微丸的體外釋放度[7]，轉(zhuǎn)速為100 r/min，溫度為（37±0.5）℃。分別于0.5、1、1.5、2、2.5、3、3.5、4 h取樣5 ml，同時(shí)在溶出杯中補(bǔ)入同溫同體積的新鮮介質(zhì)。取樣液經(jīng)0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液20 μl進(jìn)樣測(cè)定其中藥物含量，計(jì)算累積釋放度。

2.3.3 體外釋放度測(cè)定結(jié)果。阿司匹林腸溶微丸在人工胃液中幾乎都不釋放，而在人工腸液中立即開始釋放且2 h內(nèi)都能釋放完全。阿司匹林微丸在人工胃液中就開始釋放。2種制劑的體外釋放試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 2種制劑的體外釋放試驗(yàn)結(jié)果（%）Tab 1 Results ofin vitro release test of 2 kinds of preparations（%）

2.4 血漿中水楊酸含量測(cè)定方法

由于阿司匹林口服后在體內(nèi)很快轉(zhuǎn)化為其活性代謝產(chǎn)物水楊酸，故在進(jìn)行阿司匹林的血藥濃度研究時(shí)大多測(cè)定血漿中水楊酸的濃度[8]。

2.4.1 色譜條件。色譜柱：Shim-pack VP-ODS（150 mm×4.6 mm，5 μm）（加C18保護(hù)柱）；流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（50∶50），流速：1.0 ml/min；測(cè)定波長(zhǎng)：303 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：20 μl。在該色譜條件下，理論板數(shù)以水楊酸峰計(jì)應(yīng)不低于2 000。

2.4.2 血漿樣品的處理。精密量取大鼠血漿0.2 ml，置于2.0 ml具塞離心管中，加入0.6 ml甲醇沉淀蛋白，渦旋3 min，10 000 r/min離心10 min，取上清液置于1.5 ml具塞離心管中，12 000 r/min離心10 min，取上清液，進(jìn)樣20 μl，記錄色譜。

2.4.3 方法專屬性考察。精密稱取水楊酸對(duì)照品10 mg，用1%冰醋酸甲醇溶液溶解，配成100 μg/ml水楊酸對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液、空白血漿、空白血漿+對(duì)照品（50 μg/ml）、血漿樣品（釋放4 h后），處理后進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。結(jié)果顯示，水楊酸的保留時(shí)間為8.7 min左右，分離度滿足測(cè)定要求，血漿中的內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)水楊酸的測(cè)定無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對(duì)照品；B.空白血漿；C.空白血漿+對(duì)照品；D.血漿樣品；1.水楊酸Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.blank plasma；C.blank plasma+substance control；D.plasma sample；1.hydroxybenzoic acid

2.4.4 線性關(guān)系與定量限考察。精密稱取水楊酸對(duì)照品適量，用甲醇溶解后定容，配制成一定質(zhì)量濃度的貯備液。取貯備液稀釋制成質(zhì)量濃度分別為0.2、1.0、2.0、10.0、20.0、100.0、200.0 μg/ml的對(duì)照品系列溶液。精密量取空白血漿100 μl，共計(jì)7份，分別置于2.0 ml的具塞離心管中，依次加入水楊酸對(duì)照品系列溶液100 μl，使水楊酸的血藥濃度分別為0.1、0.5、1.0、5.0、10.0、50.0、100.0 μg/ml，處理后進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度（c）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A＝8 167.8c+2 439.6（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，血漿溶液中水楊酸檢測(cè)質(zhì)量濃度的線性范圍為0.1～100.0 μg/ml，定量限為0.05 μg/ml。

2.4.5 回收率試驗(yàn)。方法回收率：取大鼠空白血漿100 μl，加入水楊酸對(duì)照品系列溶液100 μl，制成水楊酸質(zhì)量濃度分別為0.5、5.0、50.0 μg/ml的樣品溶液，每一質(zhì)量濃度配制5份，處理后進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以測(cè)得值與實(shí)際值之比計(jì)算方法回收率，以測(cè)得值與相同質(zhì)量濃度對(duì)照品測(cè)得值之比計(jì)算提取回收率。結(jié)果方法回收率平均值為（100.71±0.74）%，RSD＝1.49%（n＝3）；提取回收率平均值為（98.28±0.55）%，RSD＝1.58%（n＝3）。

2.5 藥動(dòng)學(xué)考察

取大鼠隨機(jī)分為受試制劑（阿司匹林腸溶微丸）組和參比制劑（阿司匹林微丸）組，每組5只，服藥前禁食12 h，稱質(zhì)量后根據(jù)人臨床常用劑量換算動(dòng)物給藥劑量，以15 mg/kg灌胃給予相應(yīng)藥物。于給藥前和給藥后0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0、12.0、18.0、24.0、36.0、48.0 h眼眶取血0.4 ml，置于1.5 ml肝素化EP管內(nèi)，3 000 r/min離心15 min，取上層澄清血漿，－20 ℃冷凍放置，分別按“2.4.2”項(xiàng)下方法處理后，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算血藥濃度，繪制藥-時(shí)曲線，見圖2。

圖2 2種制劑在大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線（n＝5）Fig 2 Drug concentration-time curves of 2 kinds of preparations in rats（n＝5）

利用3p97軟件對(duì)血藥濃度數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，經(jīng)自動(dòng)擬合后，受試制劑和參比制劑均以二室模型擬合最佳，選擇權(quán)重均為1/C2。進(jìn)行權(quán)重房室模型擬合，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，并用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果見表2。

經(jīng)計(jì)算，阿司匹林腸溶微丸的相對(duì)生物利用度為111.41%，表明阿司匹林腸溶微丸生物利用度與參比制劑相當(dāng)。

3 討論

市售腸溶片均是采用腸溶薄膜包衣來實(shí)現(xiàn)其腸溶性。本研究采用擠壓滾圓法制備微丸，最終在體外釋放試驗(yàn)中達(dá)到腸溶制劑的要求。另外羧甲基玉米朊不會(huì)吸水膨脹而崩解，在胃內(nèi)會(huì)保持原微丸的形狀，在腸內(nèi)可因堿性環(huán)境而緩慢溶解釋放藥物。

表2 2種制劑在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n＝5）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in rats（，n＝5）

表2 2種制劑在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)（，n＝5）Tab 2 Pharmacokinetic parameters of 2 kinds of preparations in rats（，n＝5）

與參比制劑比較：＊P＜0.05vs.reference preparation：＊P＜0.05

由圖2可知，參比制劑在灌胃后很快就釋放藥物，0.5 h在血液中即測(cè)到較高濃度的藥物，4 h左右達(dá)到最高，之后血藥濃度開始降低，表明阿司匹林微丸灌胃后基本在胃和小腸中被吸收。受試制劑在灌胃后4 h內(nèi)釋放很少，4 h后才開始緩慢釋放，并在12 h左右達(dá)到最高血藥濃度，之后血藥濃度緩慢降低；整個(gè)血藥濃度上升和降低的過程比參比制劑緩慢，且最高血藥濃度低于參比制劑，表明阿司匹林腸溶微丸在胃里釋放很少，幾乎不釋放，而在腸道內(nèi)能較快釋放，相對(duì)于參比制劑有一定緩釋性。

從藥動(dòng)學(xué)參數(shù)結(jié)果來看，與參比制劑比較，受試制劑的t1/2β、tmax、AUC0-∞均明顯增加，cmax明顯減?。≒＜0.05），再次表明阿司匹林腸溶微丸具有一定緩釋性。綜上說明，本實(shí)驗(yàn)室研發(fā)的羧甲基玉米朊可以作為腸溶性輔料，具有一定的開發(fā)價(jià)值。

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