富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的藥動學研究

張文靜，李見春，朱 娜，王 秀，張 勁（蚌埠醫(yī)學院藥學系，安徽蚌埠 233030）

富馬酸喹硫平（Quetiapine fumarate）是一種新的非經(jīng)典抗精神疾病的藥物，屬苯二氮類衍生物，結(jié)構(gòu)與氯氮平相似，臨床研究表明該藥是一種安全有效的抗精神病藥，與多種神經(jīng)遞質(zhì)受體有相互作用[1]。富馬酸喹硫平主要作用于5-羥色胺2受體和多巴胺的D1、D2、D4受體，不但對精神分裂癥的陽性癥狀有效，對陰性癥狀也同樣有效[2]。富馬酸喹硫平最常見的不良反應是中樞及外周神經(jīng)系統(tǒng)損害，發(fā)生率為20.7%[3]。因其錐體外系不良反應發(fā)生率低，患者軀體不適感較輕微，患者耐受性及依從性較好[4]，其在改善患者的精神癥狀同時也大大提高了患者的生活質(zhì)量。富馬酸喹硫平起效時間快、不良反應輕，目前已成為精神分裂癥與雙向情感障礙治療的一線用藥[5-6]。本實驗采用反相高效液相色譜法對大鼠灌胃給予富馬酸喹硫平后不同時間點的血藥濃度進行了測定，并對其體內(nèi)藥動學過程進行了研究，現(xiàn)報道如下。

1 材料

1.1 儀器

LC-20AD 二元高壓梯度高效液相色譜儀，包括SPD-10Avp紫外檢測器、CTO-20A柱溫箱、SIL-20AC自動進樣器（日本島津公司）；FC204電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；XW-80A 微型渦旋混合儀（上海滬西分析儀器廠）；TG16-W 微量高速臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司，離心半徑：6.22 cm）。

1.2 藥品與試劑

富馬酸喹硫平原料藥（武漢大華偉業(yè)醫(yī)藥化工有限公司，批號：131228FM，純度：99.4%）；卡馬西平標準品（內(nèi)標，中國食品藥品檢定研究院，批號：100142-201105，純度：99.7%）；甲醇、乙腈為色譜純；三乙胺、冰醋酸等試劑均為分析純。

1.3 動物

健康成年SD清潔級大鼠，♀♂各半，體質(zhì)量（200±20）g，由上海杰思捷實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXK（滬）2012-0006，合格證號：201000260051。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

[7]，確定色譜柱：Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（含0.5%三乙胺，冰醋酸調(diào)節(jié)pH 至6～8）（78 ∶22），流速：1 ml/min；檢測波長：289 nm；柱溫：45 ℃；進樣量：20 μl。

2.2 給藥方法

取成年健康大鼠6只，♀♂各半，于實驗前12 h 禁食不禁水。給藥前，先取空白血（0 h）并稱體質(zhì)量，記錄后分別按40 mg/kg灌胃給予富馬酸喹硫平（劑量的選擇是根據(jù)大鼠按單位體質(zhì)量換算與人體臨床用藥的等效劑量）。于給藥后5、15、30、45 min 和1、1.5、2、4、6、8、12、24 h 靜脈采血約0.5 ml，將血樣置于1.5 ml EP 低分子肝素鈉離心管中，經(jīng)4 000 r/min 離心15 min，取血漿層，于－20 ℃超低溫冷凍儲藏，備用。

2.3 溶液的制備

精密稱取富馬酸喹硫平原料藥12.5 mg，置于25 ml 量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為497 μg/ml的貯備液，至4 ℃冰箱保存?zhèn)溆?。臨用前，用甲醇將貯備液稀釋為所需質(zhì)量濃度的對照品溶液。精密稱取卡馬西平標準品12.6 mg，置于25 ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，即得質(zhì)量濃度為502.488 μg/ml 的貯備液，用甲醇稀釋至7.851 μg/ml作為內(nèi)標溶液。

2.4 血漿樣品的處理

精密量取20 μl 內(nèi)標溶液（7.851 μg/ml）置于空白離心管中，氮氣吹干加入200 μl血漿，渦旋30 s，再加入乙腈400 μl沉淀，渦旋3 min，4 000 r/min 離心10 min，取上清液，進樣測定，按內(nèi)標法計算血漿中富馬酸喹硫平的濃度。

2.5 方法專屬性考察

在色譜條件下，分別將空白血漿、空白血漿+對照品、對照品+內(nèi)標、血漿樣品（給藥后45 min）+內(nèi)標，處理后進樣測定，記錄色譜。結(jié)果富馬酸喹硫平與內(nèi)標的色譜峰分離良好，血漿樣品中的內(nèi)源性物質(zhì)對富馬酸喹硫平及內(nèi)標的測定干擾不明顯，表明方法的專屬性良好，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.空白血漿；B.空白血漿+對照品；C.對照品+內(nèi)標；D.血漿樣品+內(nèi)標；1.富馬酸喹硫平；2.內(nèi)標Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma+substance control；C.substance control+internal standard；D.plasma sample+internal standard；1.quetiapine fumarate；2.internal standard

2.6 標準曲線制備

取空白血漿200 μl，精密加入對照品貯備液，配制成富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.259、1.035、2.071、4.142、16.567、49.7 μg/ml的血漿樣品，按“2.4”項下方法處理后，進樣測定，記錄色譜。方法學驗證時間為3 d，以富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度（x）為橫坐標、其峰面積與內(nèi)標峰面積之比（y）為縱坐標，每日繪制1 條標準曲線進行分析。得回歸方程為：第1 天y＝5 116.8x+185.67（r＝0.999 9）；第2 天y＝5 934.4x－666.7（r＝0.999 6）；第3天y＝4 793.5x－263.91（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，富馬酸喹硫平檢測質(zhì)量濃度的線性范圍為0.259～49.7 μg/ml，在血漿中的定量限為0.259 μg/ml。

2.7 回收率與精密度試驗

取空白血漿200 μl，精密加入對照品貯備液，配制成富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.518、8.283、33.133 μg/ml的樣品血漿，按“2.4”項下方法處理后，進樣測定，記錄色譜，根據(jù)內(nèi)標法計算方法回收率和提取回收率。同日內(nèi)測定6 次考察日內(nèi)精密度，連續(xù)測定3 d考察日間密度度。回收率試驗結(jié)果見表1，精密度試驗結(jié)果見表2。

表1 回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

表2 精密度試驗結(jié)果（n＝6）Tab 2 Results of precision test（n＝6）

2.8 穩(wěn)定性試驗

配制富馬酸喹硫平質(zhì)量濃度分別為0.518、33.133 μg/ml的樣品血漿，按“2.4”項下方法處理，分別在處理后室溫下放置8 h、4 ℃下冷藏30 h 和處理前反復凍融3 次、長期冷凍（處理前－20 ℃冷凍9、21 d）考察血漿樣品的穩(wěn)定性。結(jié)果0.518、33.133 μg/ml的樣品血漿處理后室溫放置8 h質(zhì)量濃度的RSD分別為6.67%、10.74%；4 ℃下冷藏30 h 的RSD 分別為10.38%、11.09%；處理前反復凍融3次后處理進樣的質(zhì)量濃度的RSD 分別為13.21%、9.6%；長期冷凍試驗的質(zhì)量濃度的RSD分別為13.57%、10.28%（n均為6）。以上表明血漿樣品的穩(wěn)定性良好。

2.9 藥動學考察

取“2.2”項下各時間點的血漿，按“2.4”項下方法處理后，進樣測定，記錄色譜，根據(jù)內(nèi)標法計算血藥濃度，繪制藥-時曲線，見圖2。

圖2 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的藥-時曲線Fig 2 Plasma concentration-time curves of quetiapine fumarate in rats

將各時間點的血藥濃度代入DAS 2.0 藥動學軟件進行分析，結(jié)果顯示富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)按一級動力學消除，房室模型為二室模型。藥動學參數(shù)結(jié)果見表3。

表3 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的的藥動學參數(shù)（，n＝6）Tab 3 Pharmacokinetic parameters of quetiapine fumarate in rat（，n＝6）

表3 富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的的藥動學參數(shù)（，n＝6）Tab 3 Pharmacokinetic parameters of quetiapine fumarate in rat（，n＝6）

3 討論

藥動學參數(shù)結(jié)果表明，富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)分布與消除都比較快，清除相對較慢；由V1/F較小提示其在體內(nèi)分布不廣泛[8]。

本實驗建立了以卡馬西平為內(nèi)標，用反相高效液相色譜法測定血漿中富馬酸喹硫平濃度的方法。與以往發(fā)表文獻[7，9]相比，文獻中血漿樣品處理均采用工序煩瑣的乙醚萃取；本方法采用的乙腈沉淀操作簡單，該方法快速、準確，色譜條件易得，樣品制備簡便，試劑成本低廉，結(jié)果穩(wěn)定可靠，單個樣品測定所需時間適中，適用于富馬酸喹硫平治療常規(guī)血濃度監(jiān)測。本實驗通過對富馬酸喹硫平在大鼠體內(nèi)的藥動學研究，為富馬酸喹硫平的藥效學和毒理學研究奠定了基礎(chǔ)，同時為富馬酸喹硫平進一步的新藥開發(fā)和臨床用藥提供了依據(jù)。

參考文獻

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