新疆產(chǎn)大葉白麻不同部位黃酮類成分含量分析

蔡卿齡，張 勇，魏原杰，石秋梅*

（新疆大學生命科學與技術(shù)學院，新疆 烏魯木齊 830046）

新疆產(chǎn)大葉白麻不同部位黃酮類成分含量分析

蔡卿齡，張 勇，魏原杰，石秋梅*

（新疆大學生命科學與技術(shù)學院，新疆 烏魯木齊 830046）

采用高效液相色譜法測定新疆產(chǎn)大葉白麻不同部位金絲桃苷、異槲皮苷、蘆丁及總槲皮素的含量；以NaAc-A1C13體系為顯色劑，用分光光度法于波長420 nm處測定大葉白麻不同部位總黃酮的含量。結(jié)果表明：大葉白麻葉、花、根和莖中的總黃酮含量分別為1.39%、0.89%、0.30%和0.13%。在所檢測的3 個主要黃酮類成分中，異槲皮苷含量最高，除根外，在葉、花和莖中均可檢測，含量分別為0.4%、0.15%和0.07%；蘆丁和金絲桃苷含量較低。采用高效液相色譜法檢測葉片和花中酸水解后總槲皮素含量，結(jié)果表明，葉和花中槲皮素含量分別為0.63%和0.34%。

大葉白麻；黃酮類成分；高效液相色譜

大葉白麻（Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson）又名大花羅布麻、羅布白麻，為夾竹桃科白麻屬多年生宿根半灌木，與羅布紅麻（Apocynum venetum Linn.）和白麻（Poacynum pictum Schrenk）三者常被統(tǒng)稱為“羅布麻”[1-2]。大葉白麻集中分布于新疆塔里木盆地、甘肅河西走廊、內(nèi)蒙古西部、青海柴達木盆地等干旱、鹽漬化區(qū)域。在新疆，羅布紅麻僅與農(nóng)田雜草混生于田埂渠邊，成片分布區(qū)少，而大葉白麻在塔里木河沖積平原廣泛分布，面積大，具有開發(fā)潛力和開發(fā)價值[3-4]。我國藥典收錄了羅布紅麻葉，黃酮類物質(zhì)是其主要的藥效成分，主要有金絲桃苷、異槲皮苷、蘆丁和槲皮素等，已有大量有關(guān)其黃酮類成分含量測定的文獻[5-11]報道。大葉白麻亦具有較高的藥用價值[12-14]、有研究表明它也具有與羅布紅麻相似的藥效成分[14-21]，其葉片常被用于制作羅布麻茶、羅布麻降壓片等的替代品，但與羅布紅麻相比，其藥理作用及其活性成分檢測的研究較少。為更好地利用該藥用植物，有必要獲取更多、更全面有關(guān)其體內(nèi)黃酮類成分分布的信息。目前有關(guān)大葉白麻不同部位幾種主要黃酮類成分含量的研究尚未見報道，因此本研究采用高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法對新疆產(chǎn)大葉白麻葉、花、莖和根不同部位主要黃酮類物質(zhì)進行定性研究，為更好地利用該植物資源提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

大葉白麻采集于新疆尉犁縣野外，新疆大學生命科學與技術(shù)學院生物科學系鑒定為夾竹桃科白麻屬大葉白麻，成熟植株分葉、根、莖和花4 個部位，其中，莖指植株的上半部分枝條。

金絲桃苷、蘆丁、槲皮素、異槲皮苷（質(zhì)量分數(shù)98%） 天津一方科技有限公司；乙腈、甲醇為色譜純美國Sigma-Aldrich公司；磷酸、乙醇、鹽酸等均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-3600紫外-可見分光光度計 上海棱光技術(shù)有限公司；LC-2010A-VP高效液相色譜儀 日本島津公司；BS200S電子天秤 北京賽利斯天平有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品供試液的制備

將成熟干燥的大葉白麻的根、莖、葉、花粉碎，分別精密稱取0.4 g，置于150 mL圓底燒瓶中，加體積分數(shù)60%乙醇50 mL，80 ℃水浴條件下回流提取1 h，提取液放冷，過濾，用體積分數(shù)60%乙醇定容至50 mL，搖勻備用，每個樣品做4 個重復(fù)。

1.3.2 總黃酮含量的測定[22]

對照品溶液制備：精密稱取金絲桃苷對照品4.8 mg，用體積分數(shù)60%乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，制成含金絲桃苷0.048 mg/mL的溶液，保存于4 ℃冰箱中備用。

顯色方法（AlCl3-NaAc顯色法）：精密量取樣品供試液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加0.6 mol/L AlCl30.5 mL，再加1 mol/L NaAc 1.5 mL，搖勻，放置20 min，用體積分數(shù)60%乙醇定容。以零號管（不加樣品供試液）為空白，用分光光度計于波長420 nm處測吸光度。

標準曲線的制作：精密量取金絲桃苷對照品溶液0.0、1.0、2.0、2.5、3.0、4.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，采用上述分光光度法測吸光度。以吸光度A（Y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（X）（μg/mL）為橫坐標，進行線性回歸，得吸光度-質(zhì)量濃度標準曲線。

樣品中總黃酮含量的測定：分別精密移取葉、花、根和莖的提取液各10 mL，置于10 mL容量瓶中，采用上述顯色方法（AlCl3-NaAc顯色法），于420 nm波長處測定吸光度，根據(jù)標準曲線計算含量。

式中：A為樣品吸光度；m為樣品稱樣質(zhì)量/g。

1.3.3 金絲桃苷、蘆丁、異槲皮苷含量的測定

測定方法參考文獻[23]。

1.3.4 酸水解后總槲皮素含量的測定

1.3.4.1 色譜條件

[24]方法，并略有修改：色譜柱為Agilent TC-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50∶50，V/V）為流動相；檢測波長360 nm；流速1.0 mL/min；柱溫30 ℃；經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，進樣10 μL。

1.3.4.2 對照品溶液制備

精密稱取槲皮素對照品5.0 mg，用體積分數(shù)80%甲醇溶解并定容于100 mL容量瓶中，制成含槲皮素0.050 mg/mL的溶液，保存于4 ℃冰箱中備用。

1.3.4.3 樣品供試液酸水解

將花和葉樣品供試液進行酸水解處理：分別精密量取10 mL花和葉的供試液，置于25 mL圓底燒瓶中，加入鹽酸1 mL，90 ℃水浴條件下回流1 h，回流液放冷，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，用體積分數(shù)80%甲醇定容，搖勻備用，每個樣品4 個重復(fù)。

1.3.4.4 標準曲線的制作

精密量取對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置10 mL容量瓶中，各加體積分數(shù)80%甲醇至刻度。按1.3.4.1節(jié)色譜條件各取10 μL進樣。以質(zhì)量濃度（X）（μg/mL）為橫坐標，峰面積A（Y）為縱坐標進行線性回歸，得峰面積-質(zhì)量濃度標準曲線。

1.3.4.5 樣品中總槲皮素含量的測定

取1.3.4.3節(jié)中已制備好的樣品提取液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾后，各取10 μL按1.3.4.1節(jié)上述色譜條件進樣。根據(jù)標準曲線計算含量。

式中：Y為峰面積；m為樣品稱樣質(zhì)量/g。

2 結(jié)果與分析

2.1 大葉白麻不同部位總黃酮含量

按1.3.2節(jié)進行標準曲線的制作，其回歸方程（n=6）為Y=0.045 6X+0.006 4，R2=0.999。將樣品相應(yīng)的吸光度帶入相應(yīng)的回歸方程，即可按公式（1）計算出總黃酮的含量。

表1 大葉白麻不同部位的總黃酮含量Table 1 Total flavonoid contents in different organs of P. hendersonii %

由表1可知，葉片中總黃酮含量最高，為1.39%，根中含量最低，僅0.13%，不同部位中總黃酮含量的高低依次為葉＞花＞莖＞根。

2.2 大葉白麻不同部位的金絲桃苷、異槲皮苷、蘆丁含量

2.2.1 標準品和樣品提取液色譜圖

蘆丁、金絲桃苷和異槲皮苷分別是槲皮素和蕓香糖、半乳糖和葡萄糖形成的糖苷，結(jié)構(gòu)非常相近，從圖1A對照品色譜圖可看出，這3 種黃酮醇得到了很好地分離。葉和花提取HPLC圖分別見圖1B、C，葉和莖的黃酮類成分相似，但葉中含量較豐富，花中黃酮類成分較葉豐富，根中黃酮類成分很少。

圖1 混合對照品（A）、大葉白麻葉（B）和花（C）的HPLC圖譜Fig.1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A), and leaves (B) and flowers (C) of P. hendersonii

2.2.2 黃酮類成分含量

表2 大葉白麻不同部位3 種主要黃酮類成分含量Table 2 Contents of rutin, hyperin and isoquercetin in different organs of P. hendersonii

從表2可看出，在這3 種主要的黃酮類成分中異槲皮苷的含量較高，蘆丁和金絲桃苷的含量很低。在大葉白麻的不同部位中，葉中異槲皮苷含量最高，而花中異槲皮苷亦較高，且花中蘆丁及金絲桃苷含量也較其他部位高些。

2.3 大葉白麻不同部位總槲皮素含量

2.3.1 標準品（槲皮素）和樣品提取液色譜圖

由于根、莖中黃酮類成分含量過低（表2），所以提取液酸水解后總槲皮素含量時只做了葉片和花的檢測。從圖2可知，葉片和花提取液經(jīng)酸水解后，成分非常單一，葉片（圖2B）中幾乎都是槲皮素，表明葉片中的黃酮類物質(zhì)主要是槲皮素和不同糖形成的苷，酸水解后，糖苷鍵斷裂，槲皮素游離出；但花（圖2C）中除槲皮素外，在其右邊還具有另一主峰，說明花中除含槲皮素類物質(zhì)外，還富含另一類物質(zhì)。

圖2 對照品（A）、大葉白麻葉（B）和花（C）的HPLC圖譜Fig.2 HPLC chromatograms of reference substance (A), and leaves (B) and flowers (C) of P. hendersonii

2.3.2 總槲皮素含量

按1.3.4.4節(jié)進行標準曲線的制作，其回歸方程（n=7）為Y=16.84X-28.4，R2=0.976 9。將樣品相應(yīng)的峰面積帶入相應(yīng)的回歸方程，即可按公式（2）計算出總槲皮素的含量。

表3 大葉白麻不同部位總槲皮素含量Table 3 Total quercetin contents in different organs of P. hendersonii %

從表3可知，大葉白麻葉中的總槲皮素含量較高，為0.63%；花中也具有一定量的槲皮素，為0.34%。

3 結(jié)論與討論

對不同部位色譜圖（圖1）進行分析可知，根中的黃酮類成分極少且含量很低，葉片中的黃酮類成分含量最高，但花中成分較豐富。由實驗結(jié)果可知，在所檢測的3 個主要黃酮類成分中，異槲皮苷含量最豐富，除根外，在葉、花和莖中均可檢測，含量分別為0.4%、0.15%和0.07%；蘆丁和金絲桃苷含量均很微弱；對不同部位總黃酮含量的測定結(jié)果表明，新疆產(chǎn)大葉白麻葉、花、根和莖中的總黃酮含量分別為1.39%、0.89%、0.30%和0.13%；酸水解后總槲皮素含量較豐富，葉片和花中的含量分別為0.63%和0.34%。羅布麻葉在我國做茶飲和藥用有悠久的歷史，現(xiàn)代藥理學研究表明羅布麻葉有明顯的降壓、降脂作用，且其藥理作用與其中含有的黃酮類成分有關(guān)[12-14]。目前的質(zhì)量控制研究也是主要圍繞黃酮類化合物進行的[5-11]?！吨袊幍洹罚?005年版）中為羅布麻葉（羅布紅麻葉）確定的含量限度是水解后槲皮素含量不低于0.6%[24]。大葉白麻的葉水解后槲皮素含量剛好達到此標準，具有較好的藥用價值。鄧翻云[22]、石秋梅[23]、強靜[15]等的實驗結(jié)果表明在大葉白麻的葉中可檢測到金絲桃苷，而本實驗在大葉白麻的葉中幾乎未檢測到金絲桃苷，這主要是因為大葉白麻葉中金絲桃苷含量微弱，含量僅0.01%左右，在本實驗條件下低于檢測限?，F(xiàn)在新疆市場上銷售的羅布麻茶有葉茶和花茶2 種，前者主要以大葉白麻葉為原料，后者以大葉白麻花為原料。由本實驗結(jié)果可知，大葉白麻葉中的總黃酮、異槲皮苷、總槲皮素含量較高，而花中的含量相對低。葉菊等[25]對羅布麻不同部位總黃酮含量的測定結(jié)果也表明，葉中含量最高。大葉白麻花中黃酮類成分含量雖然較葉片中低，但其成分較豐富，另外花乙醇提取液經(jīng)酸水解后，除槲皮素色譜峰外，還有另一響應(yīng)值較強的色譜峰，參考文獻[26]，該物質(zhì)應(yīng)該是山奈酚，后期研究也表明其含量較高，與葉片中的槲皮素含量相當（未發(fā)表）。因此，花茶可能具有其特殊的功效。有關(guān)羅布麻花茶和葉茶功效的比較評價，還需進行提供更全面的活性成分測定。

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Determination of Major Flavonoid Contents in Different Organs of Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson Grown in Xinjiang

CAI Qing-ling, ZHANG Yong, WEI Yuan-jie, SHI Qiu-mei*
(College of Life Science and Technology, Xinjiang University, ürümqi 830046, China)

The contents of hyperoside, isoquercitrin, rutin and total quercetin in different parts of Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson from Xinjiang were determined by high performance liquid chromatography (HPLC), and the total flavoniods content was determined by spectrophotometry at 420 nm. The results showed that the total flavoniod content was 1.39% in leaves, 0.89% in flowers, 0.30% in roots, and 0.13% in stems. Among three major flavonoids identified in this plant, isoquercitrin was the most abundant and showed detectable levels (0.4%, 0.15% and 0.07% in leaves, flowers and stems, respectively) in all three other parts except for roots, along with very small amounts of hyperoside and rutin. The total quercetin content in leaves and flowers was 0.63% and 0.34% by HPLC following acidic hydrolysis, respectively.

Poacynum hendersonii (Hook.f.) Woodson; flavonoid contents; high performance liquid chromatography (HPLC)

TS207.3

A

1002-6630（2014）22-0211-04

10.7506/spkx1002-6630-201422041

2014-03-23

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金項目（2012211A021）

蔡卿齡（1991—），女，本科生，研究方向為植物次生代謝及調(diào)控。E-mail：526595477@qq.com

*通信作者：石秋梅（1976—），女，副教授，博士，研究方向為植物次生代謝及調(diào)控。E-mail：sqm06@sina.com