長鰭裸頰鯛(Lethrinus erythropterus)血細(xì)胞的發(fā)生*

曹伏君 葉 寧 羅 杰 林華貴

(廣東海洋大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院 湛江 524025)

長鰭裸頰鯛(Lethrinus erythropterus)隸屬于鱸形目Perciformes、鱸亞目Percoidei、裸頰鯛科Lethrinidae、裸頰鯛屬Lethrinus。分布于印度-西太平洋區(qū),在我國主要分布于南海。個(gè)體大的體長可長到50cm。其肉質(zhì)細(xì)嫩,滋味鮮美,營養(yǎng)豐富,肉質(zhì)和味道優(yōu)于養(yǎng)殖的鯛科魚類,具有食性廣、抗病能力特別強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),因此長鰭裸頰鯛是一種理想的優(yōu)良養(yǎng)殖新品種。魚類血液中的白細(xì)胞直接參與免疫應(yīng)答及其相關(guān)過程,肩負(fù)著機(jī)體非特異性免疫和特異性免疫的機(jī)能,在魚類疾病的發(fā)生和防治中發(fā)揮著重要作用。對(duì)淡水魚類血細(xì)胞的發(fā)生研究較多(吳維寧,1990;郭瓊林等,1994;林光華等,1998;肖義軍等,2001;金麗等,2007),海水魚類的報(bào)道中陳剛等(2006)對(duì)美國紅魚血細(xì)胞的發(fā)生進(jìn)行了研究,李長玲等(2001)分析了大彈涂魚的血紅細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞等發(fā)生過程,張健東等(2007)對(duì) 卵形鯧鲹(Trachinotus ovatus)血細(xì)胞的發(fā)生進(jìn)行了觀察。本文對(duì)長鰭裸頰鯛血細(xì)胞的發(fā)生過程的形態(tài)學(xué)進(jìn)行了研究,為研究魚類血細(xì)胞分化提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

取湛江雷州市流沙鎮(zhèn)網(wǎng)箱養(yǎng)殖的長鰭裸頰鯛5尾,活體運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室,檢查無明顯病變,體重1—2kg。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞學(xué)觀察 拭干魚體表,剖開胸腹腔迅速取出頭腎、體腎、脾臟、肝臟,用刀片將每個(gè)器官分別作橫切、縱切4個(gè)斷面,每個(gè)斷面在干凈的載玻片上輕輕印上 5個(gè)以上跡面。每條魚每個(gè)器官印跡20張。空氣干燥后用Wright染液染5min,再滴加等量pH 6.4磷酸緩沖液,靜置8min,用水沖洗凈,晾干封片,Olympus BX-51系統(tǒng)顯微鏡油鏡下觀察拍照。每種細(xì)胞隨機(jī)取樣 20個(gè),測(cè)量其大小,求平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

1.2.2 細(xì)胞發(fā)育階段的判定 各階段細(xì)胞形態(tài)標(biāo)準(zhǔn)參照王鳳計(jì)(1980)《血細(xì)胞圖譜》中標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)

頭腎、體腎、脾臟和肝臟等組織涂片中,各種類型血細(xì)胞的原始、未成熟和成熟型細(xì)胞的個(gè)數(shù)和百分比(表1)。

根據(jù)各細(xì)胞系原始和未成熟細(xì)胞平均百分比結(jié)果推斷,長鰭裸頰鯛的脾臟、體腎、頭腎印片中均可以發(fā)現(xiàn)各種原始和未成熟的血細(xì)胞,但是三種器官組織中的血細(xì)胞含量卻各不相同。頭腎印片中可以發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞系、淋巴細(xì)胞系、單核細(xì)胞系還有粒細(xì)胞系的原始類型和未成熟類型的各類細(xì)胞,粒細(xì)胞系的數(shù)量是最大的,其次為淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞,單核細(xì)胞次之;體腎主要是粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的發(fā)生場(chǎng)所,其它細(xì)胞系的細(xì)胞也可以在體腎中發(fā)現(xiàn),如淋巴細(xì)胞;而脾臟是紅細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的主要發(fā)生場(chǎng)所,單核細(xì)胞次之。而肝臟中沒有發(fā)現(xiàn)有原始類型的血細(xì)胞,肝臟可能不是長鰭裸頰鯛的血細(xì)胞發(fā)生場(chǎng)所。

表1 長鰭裸頰鯛4種組織中各種血細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)Tab.1 The percentages of different blood cells in four tissues of L.erythropterus

2.2 血細(xì)胞測(cè)量

結(jié)果見表2。在長鰭裸頰鯛的4種器官組織涂片中,各發(fā)育階段不同類型血細(xì)胞大小如表2 ,分別包括:紅細(xì)胞系、單核細(xì)胞系、淋巴細(xì)胞系、粒細(xì)胞系和其它細(xì)胞等。各系中單核細(xì)胞系較其它各系細(xì)胞都大。巨噬細(xì)胞和網(wǎng)狀細(xì)胞也都是大型細(xì)胞。

2.3 細(xì)胞的形態(tài)特征

2.3.1 原紅細(xì)胞(圖1a) 圓形或橢圓形,胞體較大,胞體長徑為(9.98±0.68)μm,短徑為(9.54±0.52)μm。胞質(zhì)染成深藍(lán)色,偶有偽足。細(xì)胞核圓形,占細(xì)胞的絕大部分,核多居中,有的稍偏,胞核周圍有淺色環(huán)帶區(qū)存在。深紫紅色的染色質(zhì)較濃,不均勻,呈粗網(wǎng)狀,核仁邊界不清,內(nèi)凹或平坦。頭腎涂片上可見處于有絲分裂中的原紅細(xì)胞(圖4f)。

2.3.2 早幼紅細(xì)胞(圖1b,圖1c) 圓形或橢圓形。胞體、胞核均較原紅細(xì)胞小,核質(zhì)比仍較大,核內(nèi)染色質(zhì)染成紫紅色,核仁逐漸消失。此階段的早期胞體較大,胞質(zhì)周圍有一夾窄的灰藍(lán)色的環(huán)帶區(qū)。隨著細(xì)胞的發(fā)育,胞體逐漸變小,胞質(zhì)顏色逐漸變淺,由灰藍(lán)色變成淺藍(lán)色,核內(nèi)染色質(zhì)變粗呈車輪狀,胞質(zhì)開始出現(xiàn)血紅蛋白,到晚期細(xì)胞體積達(dá)到發(fā)育過程中的最小階段,細(xì)胞呈圓形,核內(nèi)染色質(zhì)更粗糙。

表2 長鰭裸頰鯛各階段不同類型血細(xì)胞的大小Tab.2 Sizes of blood cells in different stages of L.erythropterus

2.3.3 晚幼紅細(xì)胞(圖1d,圖1e) 細(xì)胞卵圓形或橢圓形,胞質(zhì)成桔黃色或磚紅色,核質(zhì)更致密。其階段早期細(xì)胞體積較小,胞質(zhì)由灰藍(lán)色逐漸變成桔黃色。細(xì)胞核圓形,核質(zhì)比較成熟紅細(xì)胞大。隨著細(xì)胞的發(fā)育,胞質(zhì)中血紅蛋白豐富而呈現(xiàn)桔紅色,胞核周圍著色稍淺,核周圍有一無色透明帶。

2.3.4 紅細(xì)胞(圖1f) 胞體卵圓形或橢圓形,偶見圓形,胞體長徑為(10.18±0.77)μm,短徑為(7.91±0.54)μm。胞核中位或稍偏,圓形或橢圓形,染色質(zhì)致密呈團(tuán)塊狀,深紫紅色。胞質(zhì)豐富,血紅蛋白含量最高,胞質(zhì)呈桔紅色或磚紅色。核質(zhì)比是紅細(xì)胞系中最大的。衰老紅細(xì)胞(圖1g)呈不規(guī)則圓形或橢圓形,較正常的紅細(xì)胞體積小,核固縮,深染。脾臟印片上發(fā)現(xiàn)了無核紅細(xì)胞,即紅細(xì)胞的胞質(zhì)小體(圖1h)。這種胞質(zhì)小體的體積較正常紅細(xì)胞的體積小。溶解紅細(xì)胞(圖1i)在腎臟中有發(fā)現(xiàn),其核染色質(zhì)呈彌散狀,質(zhì)形成許多突起。

圖1 長鰭裸頰鯛不同發(fā)育階段的血細(xì)胞(1)Fig.1 Blood cells in different stages of L.erythropterus(1)

2.3.5 原粒細(xì)胞(圖2a) 胞體圓形或卵圓形,與原紅細(xì)胞相似。胞體長徑為(11.68±0.37)μm,短徑為(10.66±0.72)μm。但原粒細(xì)胞胞質(zhì)的嗜堿性稍弱,染色質(zhì)成更細(xì)的粒狀。核質(zhì)比大,胞質(zhì)量少,染成藍(lán)色,著色均勻透明無顆粒。胞核圓形或橢圓形,居中或稍偏一側(cè),染色質(zhì)呈紫紅色細(xì)沙狀均勻分布,核仁可見有外凸感。

圖2 長鰭裸頰鯛不同發(fā)育階段的血細(xì)胞(2)Fig.2 Blood cells in different stages of L.erythropterus(2)

2.3.6 早幼粒細(xì)胞(圖2b) 胞體圓形或卵圓形,胞體長徑為(11.45±1.49)μm,短徑為(10.43±1.27)μm。胞質(zhì)較原粒細(xì)胞豐富,淺藍(lán)色,胞質(zhì)中有淺紫紅色的嗜天青顆粒出現(xiàn),核質(zhì)比大。胞核橢圓形,偏于細(xì)胞一側(cè),內(nèi)染色質(zhì)較原粒細(xì)胞粗糙,核仁模糊不清或消失。從中幼粒細(xì)胞開始,嗜天青顆粒逐漸減少,而細(xì)胞內(nèi)的特殊顆粒的數(shù)量逐漸增多。

2.3.7 中性中幼粒細(xì)胞(圖2c) 細(xì)胞圓形或橢圓形,胞體長徑為(11.05±1.32)μm,短徑為(10.28±0.97)μm,核質(zhì)比約為1/3—1/2。核圓形或橢圓形,常偏于細(xì)胞的一側(cè),核內(nèi)染色質(zhì)濃聚,核仁完全消失。胞質(zhì)較多,呈淺藍(lán)色或淺紫色,內(nèi)有很多特殊的嗜中性顆粒,顆粒著色淺,成淡粉紅色,分布較均勻,有的顆粒覆蓋于細(xì)胞核上面,核膜不清晰。

2.3.8 中性晚幼粒細(xì)胞(圖2d) 細(xì)胞圓形或橢圓形,體積較中幼粒細(xì)胞小,胞體長徑為(10.54±0.90)μm,短徑為(9.91±0.99)μm。胞核多為細(xì)胞體積的1/2。胞核橢圓形或一側(cè)凹陷成腎形,但凹陷程度不深。核內(nèi)染色質(zhì)致密成塊狀,胞質(zhì)豐富,染成淺藍(lán)色至淺紫色。

2.3.9 中性粒細(xì)胞(圖2e) 細(xì)胞圓形或橢圓形,胞體長徑為(10.50±1.02)μm,短徑為(9.62±0.92)μm。核多偏位,核為不規(guī)則的圓形、腎形、棒狀,偶見核分葉。細(xì)胞質(zhì)呈無色或極淺的淡藍(lán)色,內(nèi)彌散分布著細(xì)小的淺紅色和紫紅色顆粒。為白細(xì)胞中數(shù)量最多的一種。

2.3.10 嗜酸性中幼粒細(xì)胞(圖2f) 細(xì)胞圓形或近圓形,胞體長徑為(9.80±0.57)μm,短徑為(9.50±0.42)μm。胞核約占整個(gè)細(xì)胞的一半,常偏于細(xì)胞的一側(cè)。核內(nèi)染色質(zhì)致密,染成淡桔紅色。細(xì)胞質(zhì)桔黃色或磚紅色,內(nèi)有許多細(xì)小均勻的顆粒,顆粒偶有覆蓋在細(xì)胞核而使胞核邊界不清。

2.3.11 嗜酸性晚幼粒細(xì)胞(圖2g) 細(xì)胞圓形或近圓形,體積較嗜酸性中幼粒細(xì)胞小。胞體長徑為(9.20±0.54)μm,短徑為(8.49±0.30)μm。胞核圓形或橢圓形,核質(zhì)比嗜酸性粒細(xì)胞大,核多偏位,核內(nèi)染色質(zhì)更加致密,染成淡桔紅色塊狀。胞質(zhì)桔黃色或磚紅色,內(nèi)有許多特異性顆粒,使核邊界不清。

2.3.12 嗜酸性粒細(xì)胞(圖2h,圖2i) 細(xì)胞圓形,胞體較小,胞體長徑(8.73±1.10)μm,短徑為(7.91±1.27)μm。胞核彎曲或成為長橢圓形、腎形,偶見分葉或不規(guī)則形。胞質(zhì)中充滿了嗜酸性顆粒被染成深桔紅色,胞質(zhì)成桔黃色。染色質(zhì)濃縮致密,染成深的橘紅色。

2.3.13 嗜堿性中幼粒細(xì)胞(圖3a) 細(xì)胞圓形或近圓形,體積較早幼粒細(xì)胞小。胞核圓形或不規(guī)則圓形,核常偏位,核質(zhì)比較大,染色質(zhì)固縮,染成黑紫色。細(xì)胞質(zhì)充滿大而不均勻的嗜堿性顆粒,嗜堿性顆粒有時(shí)覆蓋在細(xì)胞核上,導(dǎo)致核膜不清。

2.3.14 嗜堿性晚幼粒細(xì)胞(圖3b) 細(xì)胞圓形或近圓形,胞體積較嗜堿性中幼粒細(xì)胞小。胞核圓形或近圓形,核常偏位,核質(zhì)比小,染色質(zhì)更加固縮,染成深黑紫色。胞質(zhì)中充滿了嗜堿性顆粒,有時(shí)使得核膜不清。

2.3.15 嗜堿性粒細(xì)胞(圖3c) 細(xì)胞圓形或近圓形,胞核呈圓形或不規(guī)則圓形,胞核常偏于一側(cè)。胞質(zhì)中充滿了許多粗大的圓形或橢圓形嗜堿性顆粒,深藍(lán)紫色,這些顆粒往往將細(xì)胞核覆蓋起來,致使核膜不清。

2.3.16 原單核細(xì)胞(圖3d) 圓形或不規(guī)則圓形,胞體是白細(xì)胞三系中最大的,胞體長徑為(15.29±2.35)μm,短徑為(13.04±1.41)μm。胞漿豐富,呈灰藍(lán)色或藍(lán)色。細(xì)胞核偏位,細(xì)胞核形態(tài)多樣,呈不規(guī)則圓形、腎形或扭曲折疊,呈淡紫色,染色質(zhì)呈纖細(xì)網(wǎng)狀,是白細(xì)胞三系中最纖細(xì)的,分布不均勻,核仁清晰明顯。

2.3.17 幼單核細(xì)胞(圖3e) 胞體較大,胞體長徑為(14.76±1.56)μm,短徑為(13.08±1.21)μm,呈橢圓形或不規(guī)則形。胞漿豐富,呈灰藍(lán)色,常有偽足突起,胞漿內(nèi)開始出現(xiàn)細(xì)小的紫紅色嗜天青顆粒,且胞漿內(nèi)有少量的空泡。胞核多呈腎形或不規(guī)則形狀,染色質(zhì)呈細(xì)網(wǎng)狀,有少量凝結(jié),淡紫紅色。核仁不明顯。

2.3.18 單核細(xì)胞(圖3f) 胞體大,胞體長徑為(14.78±1.84)μm,短徑為(11.62±1.50)μm,呈橢圓形或不規(guī)則圓形。胞漿豐富,呈藍(lán)色或淡藍(lán)色,可見細(xì)小的紫紅色的嗜天青顆粒,有時(shí)發(fā)現(xiàn)大量的空泡。細(xì)胞核形態(tài)多樣,有腎形、馬蹄形、不規(guī)則形狀,多偏于細(xì)胞一側(cè),染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀,呈紫紅色,核仁不清晰。

2.3.19 原淋巴細(xì)胞(圖4a) 圓形或卵圓形。胞體較小,胞體長徑為(8.84±0.78)μm,短徑為(8.52±0.73)μm,是原血細(xì)胞中最小的。胞質(zhì)深藍(lán)色,量稍多,常有偽足,絲狀或短片狀。胞核圓形或橢圓形,核質(zhì)比較大,核中位或稍偏。核仁可見,周界清晰、明顯,有凹陷。近核處常有一明顯的淺色環(huán)帶區(qū),核周圍明顯。

圖3 長鰭裸頰鯛不同發(fā)育階段的血細(xì)胞(3)Fig.3 Blood cells in different stages of L.erythropterus(3)

圖4 長鰭裸頰鯛不同發(fā)育階段的血細(xì)胞(4)Fig.4 Blood cells in different stages of L.erythropterus(4)

2.3.20 幼淋巴細(xì)胞(圖4b) 圓形或卵圓形,胞體長徑為(9.22±0.55)μm,短徑為(8.66±0.53)μm。胞質(zhì)深藍(lán)色或灰藍(lán)色,胞質(zhì)較原淋巴細(xì)胞稍多,常有偽足。胞核圓形或橢圓形,偶有凹陷,占細(xì)胞絕大部分。胞質(zhì)偶有嗜天青顆粒。染色質(zhì)呈深紫紅色,粗糙、緊密。核仁清晰,但逐漸消失。

2.3.21 淋巴細(xì)胞 淋巴細(xì)胞在發(fā)育的過程中會(huì)分化成大淋巴細(xì)胞和小淋巴細(xì)胞兩種類型,小淋巴細(xì)胞占大多數(shù)。

小淋巴細(xì)胞(圖4c) 胞體小,胞體長徑為(7.09±1.01)μm,短徑為(6.47±1.16)μm。胞質(zhì)量極少,類似裸核,少量的胞質(zhì)在核周圍成極薄的一層,淡藍(lán)色,且只偏于核一側(cè)。胞核呈圓形、卵圓形或不規(guī)則形狀,染色質(zhì)致密成塊狀,呈紫黑色。

大淋巴細(xì)胞(圖4d) 胞體圓形、卵圓形或不規(guī)則形體,胞體長徑為(8.94±0.65)μm,短徑為(8.08±0.57)μm。胞質(zhì)淡藍(lán)色,為極薄的一層,有時(shí)不明顯,胞核呈圓形或卵圓形。染色質(zhì)濃密,呈紫黑色,核仁消失。

2.3.22 其它細(xì)胞

巨噬細(xì)胞(圖3g) 細(xì)胞體積大,胞質(zhì)中有許多空泡,核染色質(zhì)著色淺,核邊界不清,近細(xì)胞邊緣。

幼巨噬細(xì)胞(圖3h) 胞體較大,胞質(zhì)中同樣有許多空泡,核染色質(zhì)著色較淺,核邊界不清晰,多偏位。核質(zhì)比較巨噬細(xì)胞大。

網(wǎng)狀細(xì)胞(圖3i) 細(xì)胞很大,圓形或橢圓形,不規(guī)則。細(xì)胞核大,橢圓形或圓形,染色質(zhì)濃聚,染成暗紅色。胞質(zhì)淺藍(lán)色,細(xì)胞內(nèi)有大量圓形的氣泡。常常聚群發(fā)現(xiàn),常常有白細(xì)胞附在旁邊。

血栓細(xì)胞(圖4e) 細(xì)胞體積小,圓形、橢圓形或紡錘形。核質(zhì)比非常大。細(xì)胞核梭形或不規(guī)則形狀,染成暗紫紅色,比淋巴細(xì)胞核的染色深,細(xì)胞質(zhì)極薄,或繞核零星分布,甚至成裸核狀。

在頭腎中還見到處在有絲分裂中的原紅細(xì)胞(圖4f)、早幼粒細(xì)胞(圖4g)、原淋巴細(xì)胞(圖4h)和原淋巴細(xì)胞(圖4i)。

3 討論

3.1 長鰭裸頰鯛血細(xì)胞發(fā)育的規(guī)律

紅細(xì)胞在發(fā)育過程中,其形態(tài)與功能是相適應(yīng)的。細(xì)胞核由大變小,核仁逐漸消失,核染色質(zhì)隨著發(fā)育漸漸固縮,著色由淺到深;胞質(zhì)由少到多,胞質(zhì)嗜堿性由強(qiáng)到弱,再到嗜酸性的變化,是血紅蛋白出現(xiàn)和含量逐漸豐富的過程,反映了其攜帶、運(yùn)輸氧氣和二氧化碳能力的逐漸增強(qiáng)。完成功能的紅細(xì)胞通過直接分裂,產(chǎn)生兩個(gè)衰老紅細(xì)胞或一個(gè)衰老紅細(xì)胞和一個(gè)紅細(xì)胞胞質(zhì)小體,到了后期,衰弱的紅細(xì)胞破裂成為溶解的紅細(xì)胞,在外周血液中稱為“血影”,最后被巨噬細(xì)胞吞噬而消亡。衰弱的紅細(xì)胞和紅細(xì)胞胞質(zhì)小體在脾臟涂片中數(shù)量較多,這可能與脾臟破壞衰老紅細(xì)胞的功能有關(guān)。

硬骨魚血細(xì)胞發(fā)育過程是不相同的,一般是原紅細(xì)胞向幼紅細(xì)胞發(fā)育過程中細(xì)胞逐漸變小,而幼紅細(xì)胞向成熟紅細(xì)胞發(fā)育過程中細(xì)胞逐漸變大,如興國紅鯉(林光華等,1998)、大彈涂魚(李長玲等,2001)、暗紋東方鲀(顧曙余等,2007)等,而草魚(郭瓊林等,1994)、海鰻(謝嘉華,2004)等紅細(xì)胞的發(fā)育趨勢(shì)是原紅細(xì)胞最大,成熟過程逐漸變小,但南方鯰(陳曉耘,2000)卻是在發(fā)育過程中不斷增大,這種差異應(yīng)該屬于種間差異。

淋巴細(xì)胞發(fā)育過程分為原淋巴細(xì)胞、幼淋巴細(xì)胞、成熟淋巴細(xì)胞三個(gè)階段,細(xì)胞一般由大變小,與美國紅魚(陳剛等,2006)、長吻(金麗等,2007)等相同。而與南方鯰(陳曉耘,2000)、大彈涂魚(李長玲等,2001)、泥鰍(肖義軍等,2001)等的不同。胞核的體積亦逐漸變小,但核質(zhì)比越來越大,核仁從明顯到不明顯最后消失。

單核細(xì)胞發(fā)育過程分為原單核細(xì)胞、幼單核細(xì)胞和成熟單核細(xì)胞三個(gè)階段(肖義軍等,2001)。細(xì)胞、細(xì)胞核一般由大變小,核仁從有到無,染色質(zhì)由纖細(xì)的網(wǎng)狀到粗網(wǎng)狀,染色更深。有的硬骨魚由原單核細(xì)胞發(fā)育成幼單核細(xì)胞過程中,細(xì)胞體積增大,以后的發(fā)育中胞體逐漸變小,如興國紅鯉(林光華等,1998);有的卻是由大到小再大,如斜帶石斑魚(張海發(fā)等,2004)、大彈涂魚(李長玲等,2001)等;有的胞質(zhì)中由無空泡到有空泡,如大彈涂魚(李長玲等,2001)、興國紅鯉(林光華等,1998)等;但有的在原單核細(xì)胞時(shí)就有空泡,如南方鯰(陳曉耘,2000);有的在其發(fā)育過程中看不到嗜天青顆粒,如興國紅鯉(林光華等,1998)。這可能是由于種間差異造成其不同的發(fā)育過程。

Hamers(1995)認(rèn)為幼稚的未成熟單核細(xì)胞染色質(zhì)比成熟單核細(xì)胞的更致密,而 Fijan(2002)認(rèn)為較小體積的核致密細(xì)胞是衰老細(xì)胞。長鰭裸頰鯛成熟單核細(xì)胞比幼稚單核細(xì)胞染色質(zhì)更致密,染色更深。胞漿量增多,胞質(zhì)由藍(lán)灰色到灰藍(lán)色,嗜天青顆粒由無到有。

較幼稚的巨噬細(xì)胞形態(tài)、染色情況均與單核細(xì)胞相似,推測(cè)單核細(xì)胞在進(jìn)一步發(fā)育變化過程中轉(zhuǎn)化為巨噬細(xì)胞,吞噬能力進(jìn)一步增強(qiáng)。巨噬細(xì)胞在脾臟中數(shù)量較多,這與脾臟清除衰老紅細(xì)胞的功能有關(guān),衰老紅細(xì)胞和紅細(xì)胞胞質(zhì)小體通過被巨噬細(xì)胞吞噬而消亡。

三種粒細(xì)胞在不同魚類的存在情況是有差異的。幾乎所有的硬骨魚類都有中性粒細(xì)胞。在中性粒細(xì)胞發(fā)育過程中,其細(xì)胞體積先變大后變小,這與大彈涂魚(李長玲等,2001)、軍曹魚(陳剛等,2005)、長吻(金麗等,2007)相同,而與南方鲇(陳曉耘,2000)、興國紅鯉(林光華等,1998)、泥鰍(肖義軍等,2001)等不同。細(xì)胞核由圓形逐漸變?yōu)榘雸A形,直到開始出現(xiàn)分葉核。早幼粒細(xì)胞的胞質(zhì)呈嗜堿性,開始出現(xiàn)嗜天青顆粒;中性中幼粒細(xì)胞的胞質(zhì)嗜酸性增強(qiáng),并出現(xiàn)許多中性小顆粒;中性晚幼粒細(xì)胞的胞質(zhì)呈嗜酸性,胞質(zhì)內(nèi)充滿嗜中性顆粒。外周血中粒細(xì)胞出現(xiàn)雙葉或多葉核的中性粒細(xì)胞是其衰老的標(biāo)志(Roughet al,2005)。

嗜酸性中幼粒細(xì)胞在長鰭裸頰鯛的頭腎印片中可觀察到。期間發(fā)育要經(jīng)過:嗜酸性中幼粒細(xì)胞、嗜酸性晚幼粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞。細(xì)胞體積沒有明顯的變化,這與長吻(金麗等,2007)不同。胞質(zhì)由少變多,嗜酸性顆粒也會(huì)隨著發(fā)育會(huì)更加明顯。細(xì)胞核也由大變小,染色質(zhì)會(huì)逐漸加深。細(xì)胞質(zhì)中充滿細(xì)小均勻的顆粒,胞質(zhì)的桔紅色會(huì)越來越深。而長吻的嗜酸性中幼粒細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)成淺藍(lán)色或藍(lán)色,胞質(zhì)中含有嗜天青顆粒。

哺乳動(dòng)物嗜酸性粒細(xì)胞(金麗等,2007)在外周血與組織中的比例約為1 :300,嗜酸性粒細(xì)胞從造血器官釋放后在外周血中停留很短的時(shí)間就進(jìn)入組織,執(zhí)行功能。嗜酸性粒細(xì)胞在魚類組織中的分布也表現(xiàn)出類似的特點(diǎn),外周血中其數(shù)量很少可能是因?yàn)檫@兩種粒細(xì)胞在魚體內(nèi)的數(shù)量本身就很少,加之在外周血中停留的時(shí)間很短,因而難以見到。

目前的報(bào)道中,少數(shù)魚的外周血中發(fā)現(xiàn)了嗜堿性粒細(xì)胞(劉金蘭等,2002;顧曙余等,2007)。嗜堿性粒細(xì)胞的發(fā)育在其它相關(guān)文獻(xiàn)中并未找到相關(guān)的描述(Grizzleet al,1976;Williamset al,1976;Petrie-Hansonet al,2000)。嗜堿性粒細(xì)胞的發(fā)育也是經(jīng)歷3個(gè)階段:嗜堿性中幼粒細(xì)胞、嗜堿性晚幼粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞。隨著發(fā)育胞質(zhì)越來越豐富,胞質(zhì)中的嗜堿性特殊顆粒會(huì)越來越多。細(xì)胞質(zhì)中的特殊顆?！葔A性顆粒是一直存在的。

3.2 血細(xì)胞發(fā)育的場(chǎng)所

陳剛等(2005)認(rèn)為軍曹魚的各類血細(xì)胞主要在頭腎和體腎中產(chǎn)生,脾臟是軍曹魚粒細(xì)胞發(fā)生的另一個(gè)場(chǎng)所,而肝臟也具有產(chǎn)生粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的作用。長吻的頭腎是最主要的血細(xì)胞發(fā)育場(chǎng)所(金麗等,2007),各類細(xì)胞的原始類型都可以在頭腎中找到;其次是脾臟,而肝臟中沒有發(fā)現(xiàn)各類細(xì)胞的原始類型,所以懷疑肝臟不是造血器官。張健東等(2007)對(duì)卵形鯧 鲹的研究結(jié)果表明,紅細(xì)胞的發(fā)生場(chǎng)所主要在脾臟,其次為體腎和頭腎;淋巴細(xì)胞的發(fā)生場(chǎng)所在體腎、脾臟和頭腎;粒細(xì)胞的發(fā)生場(chǎng)所主要為頭腎,其次為體腎,脾臟次之;單核細(xì)胞在四個(gè)造血器官中均有發(fā)生,之間沒有明顯的差異。

長鰭裸頰鯛頭腎、體腎、脾臟是其主要的造血器官。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞主要在頭腎和體腎中發(fā)生,其次是脾臟。肝臟中無原始型血細(xì)胞,可能不是其造血器官,這與長吻(金麗等,2007)和泥鰍(肖義軍等,2001)等魚類的一致。

比較以上這些魚類的研究結(jié)果,可以看出頭腎、體腎和脾臟是大多數(shù)魚類的主要造血器官;至于肝臟是否作為造血器官,研究者各有不同的看法。

3.3 關(guān)于其它細(xì)胞的發(fā)育

生血器官中血栓細(xì)胞與和外周血液中的血栓細(xì)胞形態(tài)差別很大,呈梭形,胞質(zhì)極少,細(xì)胞體積也遠(yuǎn)遠(yuǎn)比外周血液上的大。而外周血液里的血栓細(xì)胞體積小,類似一裸核,呈圓形。染色質(zhì)緊密,染成深紫黑色。

血栓細(xì)胞在外周血經(jīng)常成群分布,但在生血器官中少見分布,只在在肝臟涂片中也可以觀察到少量。Rowley等(1988)解釋這是由于涂片過慢,在此之前血樣已有部分凝固所致。

巨噬細(xì)胞的發(fā)育也可以在頭腎中發(fā)現(xiàn),巨噬細(xì)胞的發(fā)育變化是隨細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的核質(zhì)比變化的。細(xì)胞體積大,細(xì)胞質(zhì)中含有許多空泡。這與單核細(xì)胞較相似。巨噬細(xì)胞也有可能是單核細(xì)胞發(fā)育來的。

長鰭裸頰鯛頭腎印片中還發(fā)現(xiàn)一類體積達(dá) 20—25μm、類圓形不規(guī)則具偽足樣突起的網(wǎng)狀細(xì)胞。網(wǎng)狀細(xì)胞周緣眾多的偽足樣突起之間鑲嵌有淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞等,推測(cè)其為這些發(fā)育中的細(xì)胞提供支撐。這與長吻(金麗等,2007)腎臟印片中的網(wǎng)狀細(xì)胞相似。

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