光阻法檢查凍干粉針劑不溶性微粒的影響因素分析

李明慧，滿春蘭，郭明娟，夏肖麗，吳彥麗，李 銳

（山東北大高科華泰制藥有限公司，山東蓬萊265600）

·制劑研究·

光阻法檢查凍干粉針劑不溶性微粒的影響因素分析

李明慧，滿春蘭，郭明娟，夏肖麗，吳彥麗，李 銳

（山東北大高科華泰制藥有限公司，山東蓬萊265600）

目的探討凍干粉針劑產(chǎn)品不溶性微粒在檢測過程中的影響因素。方法通過不同體積、不同溶劑復(fù)溶凍干粉針劑，利用攪拌與否和不同的進樣方式，測定不溶性微粒的數(shù)據(jù)。結(jié)果與結(jié)論采用不同的復(fù)溶溶劑、復(fù)溶溶劑的體積、進樣方式及攪拌等均會影響不溶性微粒的檢驗數(shù)據(jù)，操作過程中需要注意這些因素對檢測數(shù)據(jù)的影響。

光阻法；凍干粉針劑；不溶性微粒；檢測；影響因素

注射劑中不溶性微粒是指藥物在生產(chǎn)或應(yīng)用中經(jīng)過各種途徑污染的微小顆粒雜質(zhì)，其粒徑在1～50μm之間，是肉眼不可見、易動性的非代謝性的有害粒子。大量的動物試驗和人體解剖證明，不溶性微粒會產(chǎn)生一時難以發(fā)現(xiàn)的、潛在的嚴(yán)重危害，主要有：造成血管栓塞、誘發(fā)靜脈炎、導(dǎo)致肉芽腫形成、引發(fā)肺動脈高壓和輸液反應(yīng)［1］，嚴(yán)重影響到病人的用藥安全。

早在《中國藥典》1985年版就用顯微計數(shù)法進行注射液中不溶性微粒的檢查，《中國藥典》2000年版，不溶性微粒檢查新增光阻法，《中國藥典》2005年版針對小容量注射劑提出檢查要求［2］。光阻法檢查注射劑中不溶性微粒的原理：當(dāng)液體中的微粒通過一窄小的檢測區(qū)時，與液體流向垂直的入射光，由于被微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號降低，這種信號變化與微粒的截面積大小相關(guān)［3］?！吨袊幍洹?010年版（二部）對凍干粉針劑的不溶性微粒有詳細(xì)的規(guī)定：100 mL以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末及注射用濃溶液規(guī)定，每個容器中含10μm以上的微粒不得超過6 000個，含25μm以上的微粒不得超過600個［3］。在生產(chǎn)環(huán)節(jié)中，可見異物和不溶性微粒的產(chǎn)生有相同的途徑，主要有：工藝用水、原輔材料、西林瓶膠塞、藥液過濾系統(tǒng)、空氣凈化系統(tǒng)等［4，5］，這些因素對產(chǎn)品的質(zhì)量有至關(guān)重要的影響。此外，筆者通過長期的不溶性微粒項目的檢測，發(fā)現(xiàn)檢測過程對不溶性微粒的測定數(shù)據(jù)也有較大的影響。主要從樣品的溶解和測定兩個方面分析。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 單人凈化工作臺（蘇州自動化儀器儀表研究所）；GWF－5JA激光微粒分析儀（天津天河醫(yī)療儀器有限公司）；一次性塑料注射器等。

1.2 試藥 0.9%氯化鈉注射液（批號：6B13092705），5%葡萄糖注射液（批號：2D13082701），乳酸鈉林格注射液（批號：1C13092207），所有注射液均來自山東齊都藥業(yè)有限公司；注射用門冬氨酸鉀鎂（規(guī)格：1 g∶1 g，批號：1304176、1304217、1310187）；注射用克林霉素磷酸酯（規(guī)格：0.3 g，批號：1401156；規(guī)格：0.9 g，批號：1401176、1401187）；注射用埃索美拉唑鈉（規(guī)格：40 mg，批號：1301166）；注射用泮托拉唑鈉（規(guī)格：40mg，批號：1310148、1403247），以上所有制劑均來自山東北大高科華泰制藥有限公司。微粒檢查用水：取注射用水適量，使用前須經(jīng)0.22 μm的水系濾膜過濾，置潔凈的適宜容器中，攪拌，混勻，靜置后測定，每10 mL中10μm以上的微粒應(yīng)在10粒以下，25μm以上的微粒應(yīng)在2粒以下［6］。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。檢測數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，表1、3、5采用F檢驗，表2、4采用t檢驗，P＜0.05認(rèn)為有顯著性差異。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 溶解過程

2.1.1 復(fù)溶溶劑 凍干粉針劑在檢測不溶性微粒時，需要復(fù)溶，某些品種對溶劑的選擇有嚴(yán)格的依賴性，通過對注射用埃索美拉唑鈉在0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液、乳酸鈉林格注射液3種溶劑中復(fù)溶，按照不溶性微粒檢查法操作，測定結(jié)果見表1。

表1 注射用埃索美拉唑鈉不同溶劑復(fù)溶樣品的微粒檢測結(jié)果（n＝5，微粒數(shù)：個／瓶）

2.1.2 復(fù)溶操作 凍干粉針劑復(fù)溶過程要根據(jù)藥品本身的性質(zhì)，選擇適宜的復(fù)溶操作幅度［7］。注射用克林霉素磷酸酯、注射用泮托拉唑鈉在自然溶解和強烈振搖復(fù)溶時，測定的結(jié)果差異顯著，而注射用門冬氨酸鉀鎂則沒有顯著區(qū)別，測定結(jié)果見表2。

表2 不同復(fù)溶操作的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

表2 不同復(fù)溶操作的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

微粒直徑 溶解方式1 232±111≥10μm 強烈振搖 2 811±156 5 285±197 3 157±126 2 658±94 1 076±51 1 359±121 P值 0.00 0.00 0.00 0.03 0.10 0.12自然溶解 89±8 154±12 64±6 54±8 8±2 4±1≥25μm 強烈振搖 110±11 228±16 275±17 287±27 6±2 6±2 P值217自然溶解 1 763±115 4 153±151 2 388±153 2 468±144 978±107注射用泮托拉唑鈉 注射用克林霉素磷酸酯 注射用門冬氨酸鉀鎂1310148 1403247 1401176 1401187 1304176 1304 0.01 0.00 0.00 0.00 0.16 0.18

2.1.3 復(fù)溶體積 某些品種，如：注射用埃索美拉唑鈉、注射用克林霉素磷酸酯、注射用門冬氨酸鉀鎂等稀釋至不同的體積時，微粒檢測數(shù)據(jù)有顯著的差異，測定結(jié)果見表3。

表3 復(fù)溶至不同體積的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

表3 復(fù)溶至不同體積的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

注：aP＞0.05，即兩組比較沒有顯著性差異

品種 批號 微粒直徑 溶解體積（mL）5 10 15 20 50 P值注射用埃 ≥10μ索美拉唑鈉注射用門冬氨酸鉀鎂1301166 1310187注射用克林1401156霉素磷酸酯0.00 1401176 m 214±21 ／ ／ ／ 755±55 0.00≥25μm 26±4 ／ ／ ／ 165±15 0.00≥10μm ／ 1 333±125 974±95a 1 006±95a ／ 0.00≥25μm ／ 40±6 6±2a 10±2a ／ 0.00≥10μm 2 442±120 1247±98a1 362±100a ／ ／ 0.00≥25μm 69±8 29±5a 36±6a ／ ／ 0.00≥10μm ／ 3 154±108 2 388±153a2 248±156a ／ 0.00≥25μm ／ 116±11 64±6a 57±8a／

2 測定過程

2.2.1 進樣方法 藥典規(guī)定：針對靜脈注射用凍干粉針劑檢查法有兩種進樣方法可供選擇：①單支進樣：取3～5瓶樣品，每瓶樣品用定量的微粒檢查用水復(fù)溶后直接進樣測定；②合并溶液進樣：取3～5瓶樣品，用定量微粒檢查用水復(fù)溶后合并入一個容器中，混合攪拌后進樣測定。采用方法①，第一瓶的檢測數(shù)據(jù)棄去，后續(xù)測定結(jié)果取平均值，作為樣品的檢測結(jié)果，此法可以體現(xiàn)出供試品每瓶之間的差異，但是樣品不能全部被吸入，否則容易在管路中產(chǎn)生氣泡。雖然，最后的計算結(jié)果考慮體積的折算，但是不能完全準(zhǔn)確地體現(xiàn)樣品的真實情況。針對水溶性較差的樣品，與管路的水相混時，可能會在局部析出沉淀，不僅使檢測結(jié)果偏高，甚至造成管路堵塞。采用方法②，實際操作時會因為操作人員的手法不同增加污染幾率，但是此法相比方法①能夠保證溶液的均一性，更真實地反映整批產(chǎn)品的微粒情況［8］。只要在實驗操作中注意操作技巧，此法在進行凍干粉針劑產(chǎn)品檢查時不失為比較優(yōu)越的方法，測定結(jié)果見表4。

表4 不同進樣方法的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

表4 不同進樣方法的樣品檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

微粒直徑 溶解方式18±84≥10μm 合并進樣 1 763±115 4 153±151 2 388±153 2 468±144 978±107 1 232±111 P值 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00單支進樣 21±4 70±10 46±6 29±6 20±4 36±7≥25μm 合并進樣 89±8 154±13 64±6 54±8 8±2 4±1 P值217單支進樣 1 108±127 1 468±151 1 329±122 2 021±186 640±79 7注射用泮托拉唑鈉 注射用克林霉素磷酸酯 注射用門冬氨酸鉀鎂1310148 1403247 1401176 1401187 1304176 1304 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

2.2.2 攪拌的重要性 攪拌能夠保證采集樣品的均一，某些品種微粒檢查數(shù)據(jù)對攪拌與否沒有太大的依賴性，但是諸如注射用門冬氨酸鉀鎂因為其溶解度的問題，如果在實驗操作時不開動攪拌模式，同一容器上層的檢測數(shù)據(jù)和下層的檢測數(shù)據(jù)會有很大的差別，檢測結(jié)果見表5。開啟攪拌要選擇合適的轉(zhuǎn)速，以溶液不產(chǎn)生氣泡為宜，常規(guī)選擇100 rpm左右的轉(zhuǎn)速［9］。

表5 注射用門冬氨酸鉀鎂攪拌與否的檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

表5 注射用門冬氨酸鉀鎂攪拌與否的檢測結(jié)果（n＝5，±s，微粒數(shù)：個／瓶）

注：*P＞0.05，即兩組比較沒有顯著性差異

批號 微粒直徑 上層溶液 中層溶液 下層溶液 最底層溶液 P值1304176（未攪拌） ≥10μm 21±6 18±6 24±9 28±6 0.15 900±28 1 635±48 4 218±68 8 622±77 0.00≥25μm 11±1a* 15±2* 104±9 213±13 0.00 1304176（攪拌） ≥10μm 1 607±122 1 537±108 1 665±133 1 537±120 0.31≥25μm 21±8 16±5 27±6 18±6 0.07 1310187（未攪拌） ≥10μm 862±42 1 520±58 2 878±77 4 408±91 0.00≥25μm 10±2 21±2*26±2* 280±13 0.00 1310187（攪拌） ≥10μm 1 439±105 1 392±82 1 408±91 1 507±90 0.25≥25μm

3 結(jié)論

凍干粉針劑產(chǎn)品不溶性微粒檢查結(jié)果除了與樣品本身所使用的原輔料、包裝材料、工藝用水、生產(chǎn)環(huán)境系統(tǒng)等因素相關(guān)，實驗室的操作在相當(dāng)程度上也影響檢測結(jié)果。結(jié)合工作經(jīng)驗，總結(jié)凍干粉針劑不溶性微粒檢測過程中的影響因素：

3.1 同一產(chǎn)品與不同溶劑配伍時，不溶性微粒檢測數(shù)據(jù)會有很大的差異，這就要求在制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時，盡量選擇與實際用藥配伍一致的溶劑作為實驗項目的檢測溶劑［10］，復(fù)溶體積要根據(jù)樣品的性質(zhì)和臨床使用途徑來選擇，最大限度地模擬藥品進入人體的狀態(tài)，準(zhǔn)確有效地監(jiān)測用藥過程的不溶性微粒的數(shù)據(jù)變化。

3.2 不同樣品在進行凍干粉針劑不溶性微粒檢測時，操作幅度的強烈與否對不溶性微粒的影響不一致，但是為了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，復(fù)溶操作時要輕緩，沿容器壁加入復(fù)溶溶劑，盡量減少人為因素對不溶性微粒的影響。

3.3 針對黏度過高和易析晶的產(chǎn)品，選擇合適的濃度進行檢測相當(dāng)重要，否則極易導(dǎo)致檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確度不高和造成儀器故障［11］。

3.4 在合并溶液進樣法中選擇適宜攪拌速度能夠達(dá)到樣品均一、穩(wěn)定，準(zhǔn)確反映出樣品的真實情況。

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Influencing factors of using light blockage inspection to measure insoluble particles of freeze dried powder for injection

LIMing-hui，MAN Chun-lan，GUO Ming-juan，XIA Xiao-li，WU Yan-li，LIRui
（Shandong PKU High－tech Huatai Pharmaceutical Co.，Ltd.，Penglai265600，China）

ObjectiveTo discuss the influencing factors of using light blockage inspection tomeasure insoluble particles of freeze dried powder for injection.MethodsUsing different volume and different solvent to dissolve freeze dried powder for injection and using stirring or not and different injectionmode tomeasure the quantity of insoluble particles.ResultsandConclusiondifferent kinds of solvent，different volume of solvent，injectionmode and stirring or notwere all influence the quantity of insoluble particles.So we should pay attention to the influencing factors to test results in operation process.

Light blockagemethod；Freeze dried powder for injection；Insoluble particles；Inspection；Influencing factors

R927.11

A

2095－5375（2014）09－0525－004

李明慧，女，研究方向：藥物分析，E－mail：1040310436＠qq.com