兩種定量測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉含量方法的比較

李榮貞，趙 軍，李慶英，王 彬，王 霞，李 偉

（1.山東生物制品研究所，山東泰安271000；2.山東泰邦生物制品有限公司，山東泰安271000）

兩種定量測(cè)定人血白蛋白中辛酸鈉含量方法的比較

李榮貞1，趙 軍1，李慶英1，王 彬2，王 霞2，李 偉2

（1.山東生物制品研究所，山東泰安271000；2.山東泰邦生物制品有限公司，山東泰安271000）

目的建立一種準(zhǔn)確性高，簡(jiǎn)便快速的方法，對(duì)人血白蛋白中間品的辛酸鈉含量進(jìn)行質(zhì)量控制；方法通過(guò)采用氣相法和乙醚萃取法，分析比較T公司20批制品。結(jié)果乙醚萃取法與氣相法相比，回收率均在97%～101%的范圍內(nèi)，相對(duì)誤差小于2%，萃取法與氣相法差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論此法簡(jiǎn)便快速，結(jié)果可靠，可應(yīng)用于中間產(chǎn)品辛酸鈉含量的測(cè)定。

辛酸鈉含量；乙醚萃取法；氣相法

長(zhǎng)期以來(lái)，辛酸鈉廣泛作為血液制品的保護(hù)劑［1，2］，用以增加白蛋白的穩(wěn)定性，已被證明是安全可靠的，現(xiàn)行2010年版《中國(guó)藥典》（三部）人血白蛋白中辛酸鈉的定量測(cè)定方法為氣相色譜法，成品質(zhì)量指標(biāo)要求含量為0.140～0.180 mmol·g－1蛋白質(zhì)［2］，由于氣相色譜法樣品預(yù)處理時(shí)間長(zhǎng)，針對(duì)血液制品中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制，無(wú)法及時(shí)反映生產(chǎn)狀態(tài)，為車(chē)間提供即時(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。因此為更好的控制中間品質(zhì)量，服務(wù)于生產(chǎn)，確保成品質(zhì)量，我們對(duì)用乙醚萃取法檢測(cè)人血白蛋白制品中辛酸鈉含量的可靠性進(jìn)行驗(yàn)證，并與氣相法檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行比較，證明乙醚萃取法結(jié)果的可靠性。

1 材料

1.1 待檢樣品 T公司人血白蛋白制品，201301～201320連續(xù)20批次。

1.2 主要試劑 1 mol·L－1鹽酸；乙醚（市售分析純）；正丁醇（市售分析純）；混合溶解液（無(wú)水乙醇：吐溫－80∶水＝5∶0.5∶94.5）；1%酚酞指示劑；0.01 mol·L－1氫氧化鈉滴定液。

1.3 儀器 分液漏斗、島津GC－14C氣相色譜儀。

2 方法

2.1 乙醚萃取法 取純化水19 mL，置250 mL分液漏斗中，依次準(zhǔn)確加入20%供試品溶液1 mL，1 mol·L－1鹽酸0.2 mL，搖勻后加入乙醚15 mL及正丁醇1 mL，振搖約15 s，靜置分層，棄去水層，醚層用水洗兩次，每次15 mL，將醚層轉(zhuǎn)入100 mL三角瓶中，用混合溶解液15 mL充分洗滌分液漏斗后一并轉(zhuǎn)入三角燒瓶中，振搖混勻后加入1%酚酞指示劑2～3滴，用氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）滴定至淡粉紅色即為終點(diǎn)，同時(shí)用純化水作空白，并配制標(biāo)準(zhǔn)辛酸鈉水溶液作回收試驗(yàn)，回收率在97%～101%范圍內(nèi)。

V：樣品消耗氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；V0：空白消耗氫氧化鈉滴定液（0.01 mol·L－1）量，mL；M：氫氧化鈉滴定液摩爾濃度，mol·L－1；c：蛋白濃度，%；V1：供試品取樣量，mL。

2.2 氣相色譜法 參照2010年版《中國(guó)藥典》（三部）附錄ⅥK辛酸鈉測(cè)定法。

3 結(jié)果與討論

用兩種方法對(duì)20批人血白蛋白制品進(jìn)行了辛酸鈉含量的測(cè)定（結(jié)果見(jiàn)表1），乙醚萃取法所測(cè)定的20批人血白蛋白的回收率均在97%～101%的范圍內(nèi)，統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果表明：兩種方法最大相對(duì)偏差均不超過(guò)2%（氣相色譜法最大允許誤差為2%），檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著差異（P＜0.05）。由此可見(jiàn)乙醚萃取法與現(xiàn)行的2010年版《中國(guó)藥典》（三部）附錄ⅥK GC法測(cè)定辛酸鈉含量結(jié)果具有高度的一致性。

表1 兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)比

4 結(jié)論

辛酸鈉是人血白蛋白生產(chǎn)過(guò)程中加入的穩(wěn)定劑，現(xiàn)行2010年版《中國(guó)藥典》（三部）規(guī)定用GC法檢測(cè)人白成品，辛酸鈉含量每1 g蛋白質(zhì)中應(yīng)為0.140～0.180 mmol，由于質(zhì)量指標(biāo)要求范圍較窄，血液制品生產(chǎn)企業(yè)為確保成品辛酸鈉含量符合規(guī)定，在制品分裝前對(duì)半成品進(jìn)行辛酸鈉含量測(cè)定，而現(xiàn)行《中國(guó)藥典》中規(guī)定的方法，樣品處理時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，不能即時(shí)反映結(jié)果。通過(guò)實(shí)驗(yàn)分析，乙醚萃取法準(zhǔn)確性與可靠性良好，簡(jiǎn)便快速，可用于血液制品人血白蛋白中間產(chǎn)品辛酸鈉含量的質(zhì)量控制，確保成品辛酸鈉含量符合《中國(guó)藥典》的規(guī)定。

在檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)注意下列幾點(diǎn)：①隨著混合溶解液放置時(shí)間延長(zhǎng)，空白耗堿量會(huì)逐漸增高，混合溶解液使用期限不得超過(guò)2個(gè)月；②萃取過(guò)程中要注意振搖的速度和幅度，振搖太輕，萃取不完全，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏低，振搖過(guò)度，容易發(fā)生乳化現(xiàn)象，導(dǎo)致結(jié)果偏高；如遇乳化現(xiàn)象，兩相比重相近難以分離時(shí)，可采用延長(zhǎng)靜止時(shí)間或加少量電解質(zhì)（如氯化鈉）破乳，使兩相分離；③若溶液呈堿性而產(chǎn)生乳化，加入少量稀硫酸或采用過(guò)濾等方法除去；④接近終點(diǎn)時(shí)一定要搖勻，避免局部濃度過(guò)高造成假終點(diǎn)；⑤每次試驗(yàn)必須用0.04 mmol·L－1的辛酸鈉做回收試驗(yàn)，回收率在97%～101%范圍內(nèi)，試驗(yàn)成立，否則試驗(yàn)不成立。

［1］鄒莉，鄒煒，彭良俊，等.辛酸鈉對(duì)人免疫球蛋白中病毒的滅活效果［J］.中國(guó)生物制品學(xué)雜志，2012，25（5）：585－588.

［2］Horowitz B，Piёt MP，Prince AM，et al.Inactivation of lipid enveloped viruses in labile blood derivatives by unsaturated fatty acids［J］.Vox Sang，1988，54（1）：14－20.

［3］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2010年版（三部）［S］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

Study on two methods of sodium caprilate assay determ ination in human serum album in

LIRong-zhen1，ZHAO Jun1，LIQing-ying1，WANG Bin2，WANG Xia2，LIWei2

（1.Shandong Institute of Biological Products，Taian 271000，China；2.Shandong Taibang Biological Products Co.Ltd.，Taian 271000，China）

ObjectiveTo establish an accurate and rapid method to detect sodium caprylate during the process of human serum albumin（HSA）.M ethods20 samples of company T was analyzed with ether extraction and gas chromatography（GC）.ResultsThemean recovery ranged from 97%to 101%and RSD was less than 2%.ConclusionThe results showed that this method was rapid，convenient and accurate，which could meet the quality control during the production of HSA.

Sodium caprylate assay；Ether extraction；Gas chromatography

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0085－002

李榮貞，女，研究方向：生物制品質(zhì)量控制，E－mail：lrc7098＠163.com