HPLC法測定金菊五花茶顆粒中蘆丁和蒙花苷的含量

舒金富，羅紅梅

（衢州市食品藥品檢驗所，浙江衢州324000）

HPLC法測定金菊五花茶顆粒中蘆丁和蒙花苷的含量

舒金富，羅紅梅

（衢州市食品藥品檢驗所，浙江衢州324000）

目的建立金菊五花茶顆粒中蘆丁和蒙花苷的含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱E-clipse XDB－C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm），流動相為甲醇（A）－乙腈（B）－0.1%磷酸溶液（C），梯度洗脫，流速1.0 mL·min－1；檢測波長334 nm；柱溫30℃。結(jié)果蘆丁線性范圍在21.22～339.58μg，r＝0.999 4，樣品加樣平均回收率為100.0%（RSD＝1.10%）；蒙花苷線性范圍在1.75～28.08μg，r＝0.999 3，樣品加樣平均回收率為99.2%（RSD＝1.17%）。結(jié)論該方法簡便、準確，可用于制劑的質(zhì)量控制。

高效液相色譜法；金菊五花茶顆粒；蘆??；蒙花苷；含量測定

金菊五花茶顆粒是由金銀花、木棉花、葛花、野菊花、槐花、甘草等組成，具有清熱利濕，涼血解毒，清肝明目的功效。蘆丁為槐花的主要成分，蒙花苷為野菊花的主要成分，因此有必要對此兩種成分進行質(zhì)量控制，本文采用高效液相色譜法測定其蘆丁和蒙花苷的含量，進行了質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200型高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器（DAD）；Mettler XP205電子天平；超聲儀（250 W，華南超聲設(shè)備廠）。

1.2 藥品與試劑 蘆丁對照品（批號：100080－200707，含量90.5%），蒙花苷對照品（批號：111528－2000606，含量86.7%）、均由中國藥品生物制品檢定所供；甲醇、乙腈為色譜純，乙醇為分析純，水為屈臣氏蒸餾水；金菊五花茶顆粒樣品3批（廣東嘉應(yīng)制藥股份有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Eclipse XDB－C18（4.6 mm×150mm，5μm）；柱溫30℃；流動相：甲醇（A）－乙腈（B）－0.1%磷酸溶液（C），梯度洗脫［0～4 min，4%（A）：14%（B）：82%（C）；4～10 min，7%（A）：20%（B）：73%（C）；10～28 min，10%（A）：25%（B）：65%（C）］；流速1.0 mL·min－1；檢測波長334 nm；進樣量20μL。

2.2 對照品溶液制備 精密稱取蘆丁對照品58.62 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照貯備液（1）。精密稱取蒙花苷對照品10.12 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照貯備液（2）。精取上述兩種對照品貯備液各2 mL，置與50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱取樣品約2 g，置100 mL量瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，超聲30 min，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液制備 取除去槐花、野菊花以外的其他藥材，按金菊五花茶顆粒生產(chǎn)過程所得陰性樣本，再按樣品制備方法制成陰性溶液。

圖1 金菊五花茶的色譜圖

2.5 線性關(guān)系考察 分別各精密吸取“2.2”項下的對照品貯備液（1）、（2）各0.25、0.50、1.0、2.0、4.0 mL分別置于25 mL量瓶中，加甲醇稀至刻度，搖勻，各取20μL注入液相色譜儀中測定，以峰面積為縱坐標，對照品濃度為橫坐標，進行線性回歸。

蘆丁回歸方程為Y＝17.197X－85.006 r＝0.999 4，可見蘆丁在21.22～339.58μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

蒙花苷回歸方程為Y＝41.818X＋11.055，r＝0.999 3，可見蒙花苷在1.75～28.08μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗 精密吸取對照品溶液20μL重復(fù)進樣6次，記錄對照品峰面積，計算蘆丁RSD為1.65%，蒙花苷RSD為1.46%，表明本實驗精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，在上述色譜條件下，分別在溶液制備后的0、1、3、5、7、9 h進行測定，以峰面積計算蘆丁RSD為1.58%，蒙花苷RSD為1.75%，表明供試品溶液在9 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 重現(xiàn)性實驗 取同一批樣品6份，精密稱定，按上述供試液的制備方法和色譜條件進行測定，蘆丁及蒙花苷的RSD分別為1.36%和1.51%，結(jié)果表明本方法的重現(xiàn)性良好。

2.9 加樣回收率實驗 精密稱取已知含量的同一批樣品9份，每份約1 g，按低、中、高三個劑量分別各加入0.8、1.0、1.2 mL的上述兩種對照品貯備液，每個劑量平行3次，按“2.3”項下制成供試品溶液，測定其中的蘆丁和蒙花苷的含量，并計算回收率。蘆丁平均回收率為100.0%，RSD為1.10%，蒙花苷平均回收率為99.2%，RSD為1.17%。結(jié)果見表1，2。

表1 蘆丁回收率實驗考察結(jié)果

表2 蒙花苷回收率實驗考察結(jié)果

2.10 樣品的含量測定 取樣品3批，按照供試品溶液的制備方法制成供試品溶液，分別精取對照品溶液和供試品溶液和20μL，按上述色譜條件測定蒙花苷和蘆丁的含量，結(jié)果見表3。

表3 樣品的含量測定

3 討論

3.1 在流動相的選擇中，采用了甲醇－0.1%磷酸溶液，乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－乙腈－0.1%磷酸溶液，甲醇－0.2%磷酸溶液等不同梯度不同流動相組成的實驗中，結(jié)果采用甲醇－乙腈－0.1%磷酸溶液的本方法梯度較為合適。

3.2 對蘆丁和蒙花苷分別進行紫外掃描兩者的最大吸收波長分別為325 nm（蒙花苷）和359 nm（蘆丁），考慮蒙花苷在325 nm和334 nm測得響應(yīng)值變化不大而蘆丁的含量比蒙花苷大近20倍，因此選擇334 nm作為測定波長。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：295.

［2］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑（第十冊）［S］.Z10－92.

［3］王琳.HPLC測定金菊五花茶沖劑中蘆丁的含量［J］，中國實用醫(yī)藥.2007，2（21）：50－51.

Determ ination of rutin and linarin in Jinju W uhuacha Granules by HPLC

SHU Jin-fu，LUO Hong-mei
（Quzhou Institute for Food and Drug Control，Quzhou 324000，China）

ObjectiveTo establish amethod for determining the contents of rutin and linarin in Jinju Wuhuacha Granules by HPLC.M ethodsAn Eclipse XDB－C18column（4.6mm×150mm，5μm）was used withmethanol（A）－acetonitrile（B）－0.1%phosphoric acid（C）as the mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min－1，and the UV－detection wavelength was set at 334 nm，column temperature at30℃.Resu ltsThe calibration curves for rutin between 21.22 and 339.58μg（r＝0.999 4）and for linarin between 1.75 and 28.08μg（r＝0.999 3）were linear.Recoverieswere 100.0% with RSD 1.10%for rutin and 99.2%with RSD 1.17%for linarin.ConclusionThemethod was simple and reliable for the quality control of Jinjuwuhuacha Granules.

HPLC；Jinju Wuhuacha Granules；Rutin；Linarin；Quantitative determination

R927.2

A

2095－5375（2014）02－0080－003

舒金富，男，研究方向：藥品檢驗，E－mail：qzsjfu＠163.com