黃芪注射液對大鼠早期壓瘡炎性因子和氧自由基的影響

范麗紅，何英，張平，孫艷杰，羅欣

（1．長沙民政職業(yè)技術(shù)學(xué)院 護(hù)理系，湖南 長沙410004；2．南華大學(xué) 護(hù)理學(xué)院，湖南 衡陽421001；3．衡陽市第一人民醫(yī)院 護(hù)理部，湖南 衡陽421001）

目前，壓瘡的缺血再灌注損傷機(jī)制是國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。炎癥反應(yīng)與氧自由基在壓瘡缺血再灌注損傷中具有重要影響已成為共識。因此，抑制炎性因子與氧自由基的釋放，已成為防治壓瘡的重要策略之一。許多研究［1－2］證明，在黃芪注射液（astragalus injection，AI）的干預(yù)下，一些重要器官，如腎、腦、腸、脊髓等的損傷明顯減輕。但AI對減輕或避免壓瘡缺血再灌注損傷是否有效還有待于研究。血清髓過氧化酶（myeloperoxidase，MPO）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是抑制炎性因子與氧自由基的特征性指標(biāo)。本研究的目的是通過制造早期壓瘡模型，檢測模型的MPO、SOD水平的變化，探討AI的作用。

1 材料與方法

1．1 材料 （1）藥物與試劑：AI（批號：Z51021776，10ml／支，等量于原生藥20g，成都地奧九泓制藥廠生產(chǎn)），MPO、SOD試劑盒（上海滬宇生物有限公司生產(chǎn)）。（2）動物：健康成年雄性遠(yuǎn)交群（sprague dawley，SD）大鼠，體質(zhì)量200～250g，由南華大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供（許可證號：SCXK湘）。

1．2 方法

1．2．1 動物模型制備方法動物模型制備參考文獻(xiàn)［3］，使用10%水合氯醛（300mg／kg）對SD大鼠進(jìn)行腹腔注射麻醉，在262．86mmHg（1mmHg＝0．133kPa）的壓強(qiáng)下，將大鼠仰臥于設(shè)計(jì)好的簡易加壓裝置上。用膠布將大鼠的四肢固定在底盤上，再固定1個(gè)倒立的鐵釘于裝置上，釘尖連接1塊木板，木板上可放置一定重量的物體，釘?shù)追庞诖笫蟠笸冉リP(guān)節(jié)骨隆突處，釘身用2個(gè)小半圓形扣子固定在直立的木板上，使鐵釘垂直作用于皮膚。

1．2．2 分組及給藥 按隨機(jī)數(shù)字表法將SD大鼠分為正常對照組、模型組與AI干預(yù)組（模型組與AI干預(yù)組均采用制備好的動物模型），每組各8只。AI干預(yù)組在造模前給予AI 10ml／kg腹腔注射1周，模型組及正常對照組給予等容積的生理鹽水腹腔注射1周。大鼠缺血再灌注后4h處死3組大鼠，用不加抗凝劑的試管心臟取血2ml，以3600轉(zhuǎn)／min在4℃下離心10min，用溫度為－20℃的冰箱保存上層血清，用于檢測血清MPO、SOD的變化。

1．2．3 檢測方法（1）蘇木精－伊紅染色法（hematoxylin－eosin staining，H－E），取大鼠受壓中心部位肌肉組織置于4%多聚甲醛中固定，常規(guī)石蠟包埋，切片進(jìn)行H－E染色。（2）大鼠血清MPO、SOD的含量：用酶聯(lián)免疫吸附法（Elisa）測定大鼠血清中MPO及SOD的變化，嚴(yán)格依照試劑盒中的說明書進(jìn)行檢測操作。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 13．0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以ˉx±s表示，采用單因素方差分析，采用q檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，以P＜0．05或P＜0．01表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2．1 AI對壓瘡缺血再灌注損傷大鼠病理改變的影響 肉眼觀察正常對照組大鼠皮膚組織結(jié)構(gòu)未發(fā)生變化，模型組和AI干預(yù)組大鼠皮膚出現(xiàn)持續(xù)性紫紅現(xiàn)象但無明顯差別。H－E染色光鏡觀察，正常對照組大鼠復(fù)層鱗狀上皮結(jié)構(gòu)清晰且完整，可發(fā)現(xiàn)較多清晰的毛囊等附屬器，肌纖維緊密排列，可見清晰的橫紋，炎癥細(xì)胞浸潤不明顯；AI干預(yù)組復(fù)層鱗狀上皮結(jié)構(gòu)不清，部分上皮結(jié)構(gòu)出現(xiàn)斷裂，附屬器等結(jié)構(gòu)減少且見到較多的炎細(xì)胞浸潤，肌纖維斷裂明顯，有蠟樣變性，炎癥細(xì)胞浸潤比較明顯；模型組出現(xiàn)的組織病理學(xué)改變與AI干預(yù)組相似，但模型組的病理損傷更加嚴(yán)重。

2．2 AI對缺血再灌注大鼠血清SOD與MPO活性的影響 模型組較對照組血清MPO水平明顯升高（P＜0．01），SOD水平明顯降低（P＜0．01）。AI干預(yù)組血清MPO水平明顯低于模型組（P＜0．01），SOD水平明顯升高（P＜0．01）。見表1。

表1 三組大鼠動脈血SOD、MPO比較（ˉx±s）

3 討論

壓瘡一直是臨床護(hù)理工作中較為棘手的問題，是臨床常見并發(fā)癥之一［4］。壓瘡不僅增加醫(yī)療費(fèi)用，住院時(shí)間和增加患者痛苦，若繼發(fā)感染還可能產(chǎn)生全身癥狀而危及生命。相對而言，預(yù)防壓瘡費(fèi)用要低得多，降低壓瘡發(fā)生率重在預(yù)防，而預(yù)防壓瘡的關(guān)鍵是要對壓瘡的本質(zhì)有個(gè)清楚的認(rèn)識。

3．1 早期壓瘡動物模型的制作 大部分壓瘡在臨床上都是由于反復(fù)較低的壓力間歇性的作用于組織而產(chǎn)生的。因此根據(jù)王艷艷等［5］的研究，本研究采用262．86mmHg壓強(qiáng)、在3個(gè)循環(huán)的I／R（I＝2．0 h缺血，R＝0．5h再灌注）的作用下建成大鼠早期壓瘡模型，觀察AI對大鼠血清中炎性因子和自由基的影響。

3．2 炎性因子和氧自由基可能是導(dǎo)致早期壓瘡組織損傷的重要因素 研究［6］表明，缺血－再灌注損傷（IRI）機(jī)制在壓瘡的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。而炎性因子和氧自由在其中的作用已得到了人們的共識。在壓瘡發(fā)生過程中，組織I／R后，會導(dǎo)致細(xì)胞膜脂質(zhì)微環(huán)境平衡遭到破壞，產(chǎn)生大量的自由基，促使脂質(zhì)過氧化的作用加強(qiáng)。而SOD是一種氧自由基清除劑，是目前公認(rèn)的能較好反映體內(nèi)氧自由基水平的指標(biāo)。中性粒細(xì)胞可以激活及釋放一系列炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子，過度激發(fā)炎癥反應(yīng)的啟動細(xì)胞。MPO是中性粒細(xì)胞的標(biāo)志酶，其活性高低反映組織中炎性細(xì)胞的浸潤程度。

3．3 AI干預(yù)早期壓瘡的療效評價(jià) 本研究結(jié)果顯示，大鼠血清中反映炎癥反應(yīng)的MPO升高，且結(jié)合光鏡下觀察到中性粒細(xì)胞浸潤的表現(xiàn)可推知由于受壓組織反復(fù)經(jīng)歷I／R的循環(huán)過程，局部組織呈現(xiàn)出炎癥過程。反映抗氧自由基損傷作用的指標(biāo)SOD活性降低，表明氧自由基和炎癥反應(yīng)參與了壓瘡的發(fā)生發(fā)展，與文獻(xiàn)一致［7－9］，說明炎性反應(yīng)與氧自由基相互作用，共同促使早期壓瘡形成。這可能因?yàn)榻M織缺血時(shí)，體內(nèi)的補(bǔ)體系統(tǒng)被激活，活化中性粒細(xì)胞。I／R時(shí)O2重新供應(yīng)組織的需求，顯著增加了激活的中性粒細(xì)胞的耗氧量，生成的氧自由基迅速增加，導(dǎo)致細(xì)胞損傷。因此，阻斷中性粒細(xì)胞大量聚集、跨膜遷徙、活化及進(jìn)一步的氧自由基等損傷是目前藥物早期干預(yù)、阻斷、治療壓瘡的一個(gè)研究熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)旨在探討AI能否有效抑制中性粒細(xì)胞與繼發(fā)的自由基損害，從而對壓瘡的防治發(fā)揮確切有效的保護(hù)作用。已有研究［9］證明，AI具有抗炎、清除氧自由基，發(fā)揮抗脂質(zhì)過氧化作用。本研究用黃芪注射液干預(yù)后，SOD活性增加、MPO活性降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0．01）。提示AI有較強(qiáng)的抗炎與抗氧化功能，有利于保護(hù)皮膚組織。

綜上所述，炎性反應(yīng)和氧自由基參與了壓瘡IR／I的發(fā)生發(fā)展過程。AI對其有保護(hù)作用，可能是通過抑制這一途徑減輕組織損傷，延緩壓瘡損傷的進(jìn)行性劇變。但其抑制炎性反應(yīng)和氧自由基中誰占主體地位還不清楚。此外，在臨床上對于一些高危人群的血清學(xué)指標(biāo)，護(hù)理人員應(yīng)該有意識的進(jìn)行關(guān)注，發(fā)現(xiàn)異常應(yīng)積極采取有效措施，以預(yù)防并發(fā)癥的發(fā)生，達(dá)到減輕患者痛苦、提高患者生活質(zhì)量的目的。

［1］屈強(qiáng)，尚榮安，王小兵，等．黃芪注射液預(yù)處理對大鼠脊髓缺血再灌注損傷脊髓ICAM－1表達(dá)的影響［J］．中國中醫(yī)骨傷科雜志，2009，17（6）：10－12．

［2］趙燕，何婧，管弦，等．黃芪注射液對急性肺損傷小鼠鈉通道表達(dá)的影響［J］．南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（11）：1603－1605．

［3］蔡福滿，姜麗萍，楊曄琴，等．壓瘡不完全性缺血再灌注損傷簡易模型的建立［J］．中國病理生理雜志，2009，25（4）：830－832．

［4］張燕，彭文．壓瘡的危險(xiǎn)因素分析及護(hù)理研究現(xiàn)狀［J］．中國醫(yī)藥導(dǎo)刊，2012，14（2）：304－305．

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［6］Tsuji S，Ichioka S，Sekiya N，et al．Analysis of ischemiareperfusion injury in a microcirculatory model of pressure ulcers［J］．Wound Repair Regen，2005，13（2）：209－215．

［7］Bronneberg D，Spiekstra S W，Cornelissen L H，et al．Cytokine and chemokine release upon prolonged mechanical loading of the epidermis［J］．Exp Dermatol，2007，16（7）：567－573．

［8］蔡福滿，姜麗萍，楊曄琴，等．氧自由基損傷在壓瘡形成中的作用機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究［J］．護(hù)理學(xué)雜志，2008，23（14）：12－14．

［9］楊富國，董果雄，張社華．黃芪注射液對內(nèi)皮細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷 的 保 護(hù) 作 用［J］．中 國 微 循 環(huán)，2004，8（3）：136－139．