PTEN、P27和BAG-1在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及臨床意義＊

梁艷芳，曾今誠，康東平，王玲梅，陳 燦，阮建波

（1.東莞市太平人民醫(yī)院／暨南大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬東莞醫(yī)院病理科，廣東東莞523808；2.廣東省醫(yī)學(xué)分子診斷重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東東莞523808；3.廣東醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，廣東東莞523808）

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖道常見三大惡性腫瘤之一，是婦科腫瘤中的常見病、多發(fā)病。近年來，其發(fā)病率已上升至女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的20%～30%。目前，子宮內(nèi)膜癌的漏診率較高，究其原因，主要是其缺乏特異臨床表現(xiàn)，預(yù)后常與腫瘤生物學(xué)特性及惡性程度等多種因素相關(guān)。因此，如何早期診斷及正確判斷預(yù)后成為目前子宮內(nèi)膜癌臨床研究的熱點(diǎn)之一。細(xì)胞周期失控是癌變的重要原因，一旦細(xì)胞正常的生長、發(fā)育平衡被打破，細(xì)胞將發(fā)生增殖失控而導(dǎo)致癌變。為進(jìn)一步研究這些因素在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及相互作用，本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)子宮內(nèi)膜癌組織中PTEN、P27、BAG-1的表達(dá)情況，并探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇東莞市太平人民醫(yī)院2005～2011年手術(shù)切除經(jīng)病理確診的子宮內(nèi)膜癌患者102例標(biāo)本、子宮內(nèi)膜增生90例的標(biāo)本（其中單純性增生40例，復(fù)雜性增生16例，不典型增生34例）和正常子宮內(nèi)膜組織44例的標(biāo)本。102例患者年齡34～64歲，平均53.40歲；按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）進(jìn)行手術(shù)-病理分期：Ⅰ期60例，Ⅱ期22例，Ⅲ～Ⅳ期20例；組織學(xué)分級(jí)：G1級(jí)44例，G2級(jí)34例，G3級(jí)24例；無肌層浸潤52例，有肌層浸潤50例，其中淺肌層浸潤（＜1／2）30例，深肌層浸潤（≥1／2）20例。以上標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。

1.2 試劑 PTEN和P27鼠抗人單克隆抗體、免疫組織化學(xué)試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。BAG-1兔抗人單克隆抗體購自深圳晶美生物工程有限公司。染色步驟按試劑盒要求進(jìn)行。用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作陰性對(duì)照，已知結(jié)腸癌和乳腺癌陽性切片作為陽性對(duì)照。

1.3 方法 采用免疫組織化學(xué)SP法。PTEN陽性染色位于細(xì)胞質(zhì)，呈黃色或棕黃色顆粒。P27陽性染色主要位于細(xì)胞核內(nèi)，為棕黃色顆粒。BAG-1陽性染色位于細(xì)胞質(zhì)，部分細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核棕黃色顆粒。采用雙盲法隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野（×400），每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞。觀察陽性細(xì)胞所占的百分比及染色強(qiáng)度。對(duì)陽性細(xì)胞所占的百分比計(jì)分（＜5%＝0分，5%～25%＝1分，26%～50%＝2分，51%～75%＝3分，＞75%＝4分）及染色強(qiáng)度（無色＝0，淡黃色＝1，棕黃色＝2，深棕色＝3）進(jìn)行評(píng)分，累積0分為陰性（-），累積大于或等于1分為陽性（＋），其中1～2分為（＋），3～4分為（＋＋），5～6分為（＋＋＋）。以累積積分大于或等于3分為高表達(dá)，否則視為低表達(dá)。

表1 PTEN、P27、BAG-1在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)［n（%）］

表2 PTEN、P27、BAG-1表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系［n（%）］

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)，關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson相關(guān)分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 PTEN、P27、BAG-1在子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)SP法顯示，PTEN和BAG-1主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，P27主要表達(dá)于細(xì)胞核。PTEN、P27、BAG-1在子宮內(nèi)膜組織中均存在差異表達(dá)。PTEN和P27在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜增生組織中低表達(dá)，而BAG-1在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜增生組織中高表達(dá)，χ2檢驗(yàn)分析顯示，三者在子宮內(nèi)膜癌或子宮內(nèi)膜增生組織中的表達(dá)與正常子宮內(nèi)膜組織比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。子宮內(nèi)膜癌組織中PTEN和P27表達(dá)與子宮內(nèi)膜增生組織中的表達(dá)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.000，P＝0.234；χ2＝9.025，P＝0.128）；子宮內(nèi)膜癌組織中BAG-1表達(dá)與子宮內(nèi)膜增生組織中的表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝0.063，P＝0.001）。

2.2 PTEN、P27、BAG-1與患者臨床病理特征的關(guān)系 免疫組織化學(xué)SP法結(jié)果顯示，PTEN在G1級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯高于G2～G3級(jí)（P＜0.05），BAG-1在G1級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯低于G2～G3級(jí)（P＜0.05），P27表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌組織學(xué)分級(jí)無關(guān)（P＞0.05）。PTEN和P27表達(dá)均與患者FIGO臨床分期、肌層浸潤程度、年齡及腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05），BAG-1表達(dá)與患者FIGO臨床分期和肌層浸潤程度相關(guān)，Ⅱ～Ⅳ期明顯高于Ⅰ期（P＜0.05），肌層浸潤程度越深表達(dá)越高（P＜0.05）。BAG-1表達(dá)與患者年齡及腫瘤大小無關(guān)（P＞0.05）。見表2。

2.3 PTEN、P27、BAG-1在子宮內(nèi)膜癌中的相關(guān)性分析Pearson相關(guān)分析子宮內(nèi)膜癌PTEN、P27、BAG-1之間的關(guān)聯(lián)性顯示，子宮內(nèi)膜癌中PTEN和P27表達(dá)存在相關(guān)性（P＜0.05），BAG-1和P27兩者在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)無關(guān)聯(lián)性（P＞0.05），見表3；PTEN和BAG-1表達(dá)之間也存在關(guān)聯(lián)性（P＜0.05），見表4。

表3 PTEN和P27關(guān)聯(lián)性分析（n）

表4 PTEN和BAG-1關(guān)聯(lián)性分析（n）

3 討 論

PTEN是1997年發(fā)現(xiàn)的具磷酸酯酶活性的抑癌基因。近年來研究發(fā)現(xiàn)其抑癌作用的發(fā)揮主要體現(xiàn)在通過參與PTEN／PI3K／AKT、PTEN／FAK／P130cas、PTEN／ERK、p53／MDM2、FRAP／mTOR等多條信號(hào)途徑，誘導(dǎo)細(xì)胞周期停止和程序性細(xì)胞死亡，調(diào)節(jié)細(xì)胞粘連、遷移和分化，抑制血管的生成等［1］。特別是PTEN參與調(diào)節(jié)的PI3K／AKT信號(hào)途徑是一個(gè)獨(dú)立于其他通路的新的生長因子信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)，參與調(diào)控腫瘤細(xì)胞代謝、生長、凋亡、惡變等生物學(xué)特性。PTEN是目前已知的子宮內(nèi)膜癌中突變率最高的基因，蔣宋薇等［2］研究也認(rèn)為PTEN表達(dá)缺失與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有關(guān)。本研究通過檢測(cè)102例子宮內(nèi)膜癌組織，90例子宮內(nèi)膜增生組織和44例正常子宮內(nèi)膜組織也發(fā)現(xiàn)，癌組織和增生組織PTEN的表達(dá)有較高缺失率。PTEN的表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。本研究還發(fā)現(xiàn)，癌組織中PTEN缺失表達(dá)與P27缺失表達(dá)存在關(guān)聯(lián)性（P＜0.05）。同時(shí)與BAG-1過表達(dá)存在關(guān)聯(lián)性（P＜0.05）。P27是一個(gè)重要的候選抑癌基因，是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白家族的重要成員，在控制細(xì)胞G1／S期檢查點(diǎn)中具有重要作用。P27表達(dá)缺失使腫瘤細(xì)胞容易跨過G1／S期檢查點(diǎn)從而誘導(dǎo)細(xì)胞惡性增殖。P27低表達(dá)已被認(rèn)為與腫瘤預(yù)后不良及高侵襲性密切相關(guān)［3］。近來Abu Backer等［4］認(rèn)為，P27在鑒別子宮頸內(nèi)腺癌與子宮內(nèi)膜癌中具有重要意義。子宮內(nèi)膜癌中P27缺失表達(dá)較子宮頸內(nèi)腺癌更高。本研究也顯示，子宮內(nèi)膜癌中具有較高P27缺失率。BAG-1是BAG家族的重要成員，在拮抗肝細(xì)胞生長因子、血小板衍生生長因子介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中發(fā)揮重要作用［5］。BAG-1可通過與Bcl-2、肝細(xì)胞生長因子受體、熱休克蛋白 Hsp70／Hsc70、Raf-1激酶及多種甾體類激素受體相互作用，形成復(fù)合體，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長增殖和凋亡抑制的作用，BAG-1也是通過多種途徑來實(shí)現(xiàn)凋亡抑制的。相關(guān)研究表明，BAG-1在多種惡性腫瘤中均有較高的表達(dá)且與腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)［6-7］。本研究通過免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)了PTEN、P27、BAG-1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示PTEN和P27在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜增生組織中低表達(dá)，而BAG-1在子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜增生組織中高表達(dá)。PTEN在G1級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯高于G2～G3級(jí)，BAG-1在G1級(jí)子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)明顯低于G2～G3級(jí)，且PTEN和BAG-1表達(dá)之間存在相關(guān)性。PTEN表達(dá)與患者FIGO臨床分期、肌層浸潤程度、年齡及腫瘤大小無關(guān)。BAG-1表達(dá)與患者FIGO臨床分期和有無肌層浸潤相關(guān)，與患者年齡及腫瘤大小無關(guān)。究竟是PTEN表達(dá)影響了BAG-1表達(dá)，還是BAG-1表達(dá)影響著PTEN表達(dá)？還有待深入研究。作者認(rèn)為，PTEN和BAG-1在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生過程中具有重要作用，并可能存在某種關(guān)聯(lián)性。PTEN是目前已知的子宮內(nèi)膜癌中突變率最高的基因，其在子宮內(nèi)膜癌中的本質(zhì)作用還在深入研究中。目前，多數(shù)研究認(rèn)為BAG-1在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中具有重要作用。Townsend等［8］研究發(fā)現(xiàn)，BAG-1在乳腺癌中的陽性率為92%（147／160），并認(rèn)為乳腺癌組織學(xué)分級(jí)與BAG-1細(xì)胞核陽性呈負(fù)相關(guān)，高分化腫瘤核表達(dá)減弱，但與細(xì)胞質(zhì)表達(dá)關(guān)聯(lián)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。目前，在婦科腫瘤中BAG-1的研究主要集中于宮頸癌和卵巢癌的基礎(chǔ)性研究，在子宮內(nèi)膜癌的研究相對(duì)較少。早年Ribeiro-Silva［9］發(fā)現(xiàn)10%以上的宮內(nèi)膜鱗腺癌細(xì)胞BAG-1陽性表達(dá)。夏守國等［10］研究發(fā)現(xiàn)BAG-1可能參與子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡與分化的調(diào)控。張賓等［11］在子宮內(nèi)膜樣腺癌中的研究發(fā)現(xiàn)BAG-1高表達(dá)與子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。結(jié)合本研究結(jié)果，作者認(rèn)為BAG-1可能在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生發(fā)展中起到一個(gè)比較重要的作用。Bamberger等［12］發(fā)現(xiàn)P27可調(diào)控正常子宮內(nèi)膜增生，其低或缺失表達(dá)可能是子宮內(nèi)膜癌發(fā)生的重要步驟。本研究結(jié)果表明，P27表達(dá)水平隨著子宮內(nèi)膜癌惡性程度的增加而下降，但與患者FIGO臨床分期、有關(guān)肌層浸潤、年齡及腫瘤大小無關(guān)。本研究提示PTEN、P27缺失表達(dá)和BAG-1過表達(dá)可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生發(fā)展中起一定的作用。

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