bcl-2、bax的表達(dá)與圍絕經(jīng)期綜合征的關(guān)系及中醫(yī)藥治療對(duì)二者影響的研究進(jìn)展

雷 雯，盧 蘇

(南京中藥大學(xué)，江蘇 南京 210046)

bcl-2、bax的表達(dá)與圍絕經(jīng)期綜合征的關(guān)系及中醫(yī)藥治療對(duì)二者影響的研究進(jìn)展

雷 雯，盧 蘇

(南京中藥大學(xué)，江蘇 南京 210046)

細(xì)胞凋亡;bcl-2;bax;更年期綜合征

圍絕經(jīng)期綜合征是婦女絕經(jīng)前后出現(xiàn)性激素波動(dòng)或減少所致的一系列軀體及心理精神癥狀，近期表現(xiàn)主要為月經(jīng)紊亂、血管收縮功能不穩(wěn)定及神經(jīng)精神癥狀，遠(yuǎn)期表現(xiàn)為泌尿生殖功能異常、骨質(zhì)疏松及心血管疾病。中醫(yī)稱之為“絕經(jīng)前后諸證”或“經(jīng)斷前后諸證”。 近年研究顯示，卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，觸發(fā)卵泡閉鎖，且顆粒細(xì)胞產(chǎn)生雌激素減少，促性腺激素受體減少引發(fā)本病,而顆粒細(xì)胞凋亡受基因調(diào)控，其中bcl-2、bax基因在細(xì)胞凋亡通路中起到重要的作用,是許多生理或病理性凋亡的關(guān)鍵因素[1]。目前許多研究表明，中醫(yī)藥可以調(diào)節(jié)bcl-2及bax的表達(dá)，延緩卵巢的衰老，從而達(dá)到改善更年期癥狀的目的?，F(xiàn)將bcl-2及bax的表達(dá)與圍絕經(jīng)期綜合征的關(guān)系及中醫(yī)藥治療對(duì)二者的影響研究進(jìn)展綜述如下。

1 bcl-2及bax的概述

細(xì)胞凋亡是一個(gè)一系列酶參與、由基因調(diào)控的、主動(dòng)的、高度有序的過程，bcl-2蛋白家族在細(xì)胞凋亡通路中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，其可以通過對(duì)線粒體的反應(yīng)，調(diào)節(jié)線粒體蛋白的釋放，調(diào)控細(xì)胞凋亡[2]。bcl-2蛋白家族包括多種細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)因子，其中包括bcl-2亞家族(bcl-2、bcl-xl等)及bax亞家族(bax、bak等)。bcl-2含有的BH4是抑制凋亡蛋白所特有的結(jié)構(gòu)域，決定了其抑制凋亡細(xì)胞的功能；bax含有的BH1、BH2及BH3結(jié)構(gòu)域，可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡；bcl-2基因表達(dá)水平的降低是凋亡信號(hào)通路發(fā)動(dòng)中最先發(fā)生和最關(guān)鍵的步驟之一[3]。通常情況下，bax與bcl-2形成的異二聚體復(fù)合物可以維持促凋亡基因在細(xì)胞內(nèi)的定位分布，使細(xì)胞不進(jìn)入凋亡程序[4]。但當(dāng)bax基因超表達(dá)時(shí)，bax/bax同源二聚體的數(shù)量升高，細(xì)胞對(duì)死亡信號(hào)的反應(yīng)性增強(qiáng)，啟動(dòng)凋亡；而當(dāng)bcl-2基因表達(dá)增高時(shí)，bax/bax同源二聚體解離，生成穩(wěn)定的bcl-2/bax異源二聚體，對(duì)抗bax誘導(dǎo)凋亡的作用[5]。已有研究表明[6]，一切促進(jìn)或抑制細(xì)胞凋亡的影響，都可歸結(jié)成bcl-2/bax比值的變化，從而引發(fā)促進(jìn)或抑制細(xì)胞凋亡。

2 bcl-2及bax的凋亡機(jī)制

定位于線粒體外膜上的bcl-2在接收到細(xì)胞內(nèi)的死亡信號(hào)后激活，與另外的bcl-2家族成員(bax亞家族成員，主要是bax、bak等)相互作用，導(dǎo)致bax亞家族成員的寡聚并插入線粒體膜，引起線粒體膜的通透性改變，跨膜電位丟失，引起細(xì)胞色素C及其他蛋白的釋放[7]，在ATP/dATP存在的情況下，細(xì)胞色素C與凋亡蛋白活化因子(apaf-1)形成多聚復(fù)合體，通過apaf-1氨基酸的Caspase募集結(jié)構(gòu)域募集細(xì)胞質(zhì)中的Caspase-9的前體，并使其自動(dòng)剪切活化啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，激活下游的Caspase-3和Caspase-7，完成其相應(yīng)底物的剪切，引起細(xì)胞凋亡[8]。而定位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的bcl-2抑制凋亡蛋白，可以通過調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)Ca2+濃度，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度維持在合適水平，從而達(dá)到抑制凋亡的作用[9]。

3 bcl-2及bax與圍絕經(jīng)期綜合征的關(guān)系

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為婦女進(jìn)入圍絕經(jīng)期后，卵巢功能衰退，分泌的雌激素減少，破壞了下丘腦-垂體-卵巢軸的平衡，產(chǎn)生下丘腦和垂體功能亢進(jìn)的現(xiàn)象。這些內(nèi)分泌環(huán)境的變化導(dǎo)致交感神經(jīng)系統(tǒng)、體溫調(diào)節(jié)中樞不穩(wěn)定、血管舒縮平衡失調(diào)、免疫功能降低等一系列臨床癥狀。卵巢功能的壽命決定于卵巢內(nèi)原始卵泡的多少及其耗損率，卵巢中卵泡的發(fā)育過程為始卵泡-初級(jí)卵泡-次級(jí)卵泡-囊狀卵泡-成熟卵泡-排卵。99%的卵泡在不同的發(fā)育階段發(fā)生閉鎖消失，只有少部分卵泡能成熟，最后排卵。卵巢功能減退的重要原因是細(xì)胞的凋亡引起圍絕經(jīng)期卵泡閉鎖的加劇[10]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)已證明，圍絕經(jīng)期綜合征的發(fā)生與卵巢功能的衰退及性激素水平的波動(dòng)相關(guān)[11]。更年期婦女卵泡及顆粒細(xì)胞急劇較少，產(chǎn)生的雌激素及促性腺激素受體減少，從而出現(xiàn)卵巢功能的減退。Kugu等[12]用免疫組化方法檢測(cè)人卵巢顆粒細(xì)胞中的bax蛋白，發(fā)現(xiàn)在早期閉鎖的卵泡中bax蛋白大量表達(dá)，在正常卵泡或明顯閉鎖的卵泡中幾乎不表達(dá)，證明bax在早期卵泡閉鎖中有促進(jìn)顆粒細(xì)胞凋亡的作用。Tilly等[13]證實(shí)在閉鎖卵泡中bcl-2的量不變，而bax的量顯著增加。

4 中醫(yī)藥對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征患者bcl-2及bax的影響研究

中醫(yī)認(rèn)為圍絕經(jīng)期綜合征主要表現(xiàn)在心-腎-子宮生殖軸的紊亂，其根本在于腎陰虧虛，癸水不充，導(dǎo)致陰虛不能涵養(yǎng)心肝，特別是不能涵養(yǎng)心血心神，發(fā)為本病[14]。脾胃為后天之本，絕經(jīng)前后，腎氣漸衰，若脾氣猶健，脾胃健運(yùn)則氣血充盈，可彌補(bǔ)先天之虧乏。因此對(duì)圍絕經(jīng)期綜合征的治療強(qiáng)調(diào)從脾腎論治，補(bǔ)腎健脾，兼治他臟，以達(dá)到平調(diào)陰陽的目的。對(duì)于本病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)，近代各家也有不同的觀點(diǎn)，趙粉琴等[15]認(rèn)為“陽明、三陽脈衰”不僅可以引起肌膚、顏面、毛發(fā)的改變，而且會(huì)因“沖脈隸于陽明”的關(guān)系，引起月經(jīng)之本的沖脈功能失常，導(dǎo)致女性生殖生理的衰退，漸漸形成“七七”之年,即“太沖脈衰少，天癸竭，地道不通，故形壞而無子也”，即生殖功能的衰竭。楊敏等[16]研究顯示：當(dāng)肝、腎、脾有病變時(shí)，容易患圍絕經(jīng)經(jīng)期綜合征，又以肝最為突出；當(dāng)機(jī)體有氣滯、陰虛、氣虛、血虛病理變化時(shí)，容易患圍絕經(jīng)期綜合征，又以氣滯最為突出。夏桂成等[17]經(jīng)治療統(tǒng)計(jì)，90%的圍絕經(jīng)期患者屬于陰虛或偏陰虛,并在治療中發(fā)現(xiàn)陰虛僅是患者進(jìn)入更年期的標(biāo)志，而發(fā)生本病與氣火偏旺、心血心神失調(diào)有關(guān)。盧蘇等[18]認(rèn)為絕經(jīng)前后諸證源之于腎，發(fā)之于心，心腎失濟(jì)是絕經(jīng)前后諸證發(fā)病的關(guān)鍵。李穎等[19]通過復(fù)制更年期大鼠的模型，研究補(bǔ)腎健脾中藥復(fù)方對(duì)去勢(shì)大鼠血清中bcl-2和bax水平的影響，發(fā)現(xiàn)中藥補(bǔ)腎健脾方組血清中的bcl-2含量高于模型組,bax的含量低于模型組，表明補(bǔ)腎健脾方可以在一定程度上抑制去勢(shì)大鼠細(xì)胞的凋亡。趙薇等[20]采用圍絕經(jīng)期大鼠動(dòng)物模型，予左歸飲低、中、高劑量灌胃，觀察左歸飲對(duì)圍絕經(jīng)期大鼠卵巢bal-2及bax表達(dá)的影響。結(jié)果顯示與青年組比較,圍絕經(jīng)期大鼠卵巢bcl-2的表達(dá)顯著降低，bax表達(dá)明顯升高，低、中劑量左歸飲可有效改善這種表達(dá)的異常。表明左歸飲可以通過抑制大鼠卵巢細(xì)胞的過度凋亡，改善卵巢的功能狀態(tài)，從而緩解圍絕經(jīng)期的癥狀。李亞麗等[21]使用亞急性衰老大鼠模型，觀察何首烏飲對(duì)衰老大鼠卵巢組織凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2表達(dá)的影響，發(fā)現(xiàn)大鼠顆粒細(xì)胞中何首烏飲組bax蛋白表達(dá)較模型組明顯降低，而bcl-2蛋白表達(dá)量升高。表示何首烏飲能通過調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)蛋白bax、bcl-2的表達(dá)，延緩卵巢細(xì)胞的凋亡從而起到抗衰老的作用。崔清志等[22]研究發(fā)現(xiàn)益坤寧組大鼠卵巢中bcl-2、bax mRNA表達(dá)以及bcl-2/bax mRNA比值高于對(duì)照組(P<0.01)，推斷益坤寧通過上調(diào)圍絕經(jīng)期大鼠卵巢中bcl-2/bax mRNA比值和蛋白比值，從而抑制細(xì)胞凋亡，延緩卵巢衰老。郭碧濤等[23]研究發(fā)現(xiàn)養(yǎng)肝和血方能夠上調(diào)初老雌性大鼠卵巢細(xì)胞bcl-2蛋白的表達(dá)，降低bax蛋白的表達(dá)，從而上調(diào)bcl-2和bax比值，達(dá)到抑制卵巢細(xì)胞凋亡和延緩卵巢功能衰退的作用，起到治療圍絕經(jīng)期綜合征近期階段癥狀的作用。其同時(shí)與六味地黃丸進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示較六味地黃丸能更好地延緩卵巢功能衰退，從而論證了圍絕經(jīng)前期從肝論治的重要性。秦佳佳[24]通過復(fù)制自然衰老的圍絕經(jīng)期大鼠模型，觀察中成藥坤寧安調(diào)控圍絕經(jīng)期大鼠卵巢顆粒細(xì)胞凋亡因子bcl-2 mRNA表達(dá)的特點(diǎn)。結(jié)果顯示，青年對(duì)照組大鼠顆粒細(xì)胞bcl-2 mRNA呈強(qiáng)陽性表達(dá)，圍絕經(jīng)期模型組大鼠卵巢顆粒細(xì)胞bcl-2 mRNA呈弱陽性表達(dá)，在閉鎖卵泡顆粒細(xì)胞中未見bcl-2 mRNA基因表達(dá)。這說明圍絕經(jīng)期大鼠卵泡顆粒細(xì)胞凋亡的發(fā)生與bcl-2 mRNA表達(dá)密切相關(guān)，同時(shí)說明bcl-2基因是生理或病理性凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素，即bcl-2是細(xì)胞凋亡的抑制基因。實(shí)驗(yàn)還顯示，坤寧安能夠促進(jìn)bcl-2基因抑制卵巢顆粒細(xì)胞凋亡，可能是坤寧安治療圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制之一。

5 結(jié) 語

圍絕經(jīng)期綜合征發(fā)病年齡一般在40～55歲，根據(jù)流行病學(xué)的統(tǒng)計(jì)估算，84.12%的女性在圍絕經(jīng)期都會(huì)出現(xiàn)圍絕經(jīng)期綜合征的各種癥狀[25]，并對(duì)生活質(zhì)量造成一定的影響[26]。治療上主要采用激素替代療法(HRT)，該方法具有嚴(yán)格的適應(yīng)證及禁忌證，且存在潛在的致癌危險(xiǎn)及其他不良反應(yīng)，國內(nèi)多數(shù)患者難以接受。中醫(yī)認(rèn)為本病主要的發(fā)病機(jī)制為腎虛，并涉及心、肝、脾多臟器系統(tǒng)，多采取辨證論治，可以通過調(diào)整患者內(nèi)分泌系統(tǒng)，改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境，從而緩解或減輕更年期的各種癥狀，提高生活質(zhì)量。但中醫(yī)藥調(diào)控bcl-2及bax的機(jī)制還不是很明確，需要進(jìn)一步從細(xì)胞分子水平深入研究，進(jìn)一步闡明中醫(yī)藥對(duì)卵巢細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制。

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2013-05-10