線粒體通路與心肌缺血再灌注損傷

趙志芳 綜述 崔煒 審校

(1.河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院心血管病研究所心血管內(nèi)科，河北石家莊 050000;2.河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院呼吸內(nèi)科，河北石家莊 050000)

缺血性心臟病已成為一個全球性的健康問題，在我國的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已成為當(dāng)今世界威脅人類生命健康的主要原因之一。因此，盡快恢復(fù)缺血區(qū)血液供應(yīng)是解決缺血性心臟病的根本。隨著經(jīng)皮冠狀動脈介入治療術(shù)、溶栓治療及冠狀動脈旁路搭橋術(shù)等的廣泛應(yīng)用，使缺血性心臟病的臨床轉(zhuǎn)歸大大改善，但是同時，有一部分病人在缺血心肌恢復(fù)血液供應(yīng)的過程中出現(xiàn)了心力衰竭，甚至死亡。這種在恢復(fù)缺血區(qū)血流過程中心肌損傷加重并進(jìn)一步造成心功能障礙的現(xiàn)象稱之為心肌缺血再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)損傷。在1960 年，Jennings等[1]第一次在犬的冠狀動脈結(jié)扎試驗中，觀察到心肌I/R損傷的現(xiàn)象，并指出心肌缺血性損傷不但發(fā)生在缺血當(dāng)時，更主要是發(fā)生在恢復(fù)缺血區(qū)血液供應(yīng)之后。再灌注損傷主要包括心律失常、心肌頓抑、微血管損害、無復(fù)流和炎癥反應(yīng)。心肌缺血往往伴隨嚴(yán)重缺氧、酸中毒、能量耗竭和離子動態(tài)平衡紊亂，導(dǎo)致心肌功能障礙，最終心肌細(xì)胞死亡。在心肌細(xì)胞中，線粒體含量豐富，并且是能量的主要來源地。所以，不難理解線粒體在I/R損傷中發(fā)揮著重要的作用，已逐漸成為心肌保護(hù)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的終末效應(yīng)器。許多研究已經(jīng)證實線粒體是心臟保護(hù)的重要靶器官[2-3]。在I/R損傷中，線粒體ATP敏感性鉀通道(mitochondrial ATP-sensitive potassium channels，mitoKATPchannels)和線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔(mitochondrial permeability transition pore，mPTP)發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

1 mitoKATP通道

1.1 mitoKATP通道與心肌保護(hù)

MitoKATP通道的生理學(xué)作用主要是以下兩方面:(1)通過將K+攝取入線粒體，補(bǔ)償由質(zhì)子泵引起的電荷變化，從而維持pH梯度和線粒體膜電位的穩(wěn)態(tài);(2)通過調(diào)節(jié)K+攝取，維持線粒體內(nèi)的離體平衡，控制線粒體容積的改變。MitoKATP通道的開放，使K+內(nèi)流，膜輕度去極化，降低Ca2+內(nèi)流的驅(qū)動力，減輕線粒體內(nèi)鈣超載。同時基質(zhì)容積的改變能夠激活脂肪酸氧化和電子轉(zhuǎn)移，促進(jìn)能量物質(zhì)ATP的合成作用。二氮嗪(diazoxide)可以有效活化mitoKATP通道，5-羥葵酸(5-hydroxydecanoic acid，5-HD)通過阻斷 mitoKATP通道取消二氮嗪的心肌保護(hù)作用[4]。尼可地爾選擇性的開放mitoKATP通道，可以有效地減少缺血再灌注后心律失常的發(fā)生和心肌酶標(biāo)志物的水平[5]。

1.2 mitoKATP通道與氧化應(yīng)激

在正常新陳代謝中，往往伴隨著自由基的產(chǎn)生，少量的自由基是維持生命活動所必需的，但是如果產(chǎn)生的量過高時，就會對機(jī)體產(chǎn)生致命性的損害作用。由于機(jī)體受到應(yīng)激等因素，組織胞漿和線粒體內(nèi)的促氧化酶的作用，抗氧化物再生作用失活及抗氧化物消耗等促使自由基產(chǎn)生清除平衡受到破壞，進(jìn)而產(chǎn)生過量的氧自由基?；钚匝?reactive oxygen species，ROS)是由氧直接或間接轉(zhuǎn)變而成的氧自由基及衍生物。ROS的濃度超過正常生理極限時就會破壞組織細(xì)胞，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，進(jìn)一步破壞細(xì)胞膜及亞細(xì)胞器，最終導(dǎo)致細(xì)胞損傷[3]。

在心肌I/R損傷的發(fā)病機(jī)制中，ROS起著雙重作用。實驗證明在心肌保護(hù)中，少量的ROS的產(chǎn)生發(fā)揮重要作用。二氮嗪(diazoxide)，mitoKATP通道的開放劑，能夠增加鼠心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)物[6]，并且二氮嗪可以減少I/R后心肌梗死面積，但是抗氧化劑MPG可以阻斷二氮嗪的心肌保護(hù)效果[7]，說明mitoKATP通道通過促進(jìn)少量的ROS產(chǎn)生發(fā)揮心肌保護(hù)作用，但是大量的ROS產(chǎn)生會導(dǎo)致心肌損傷。缺血預(yù)適應(yīng)(ischemic preconditioning，IPC)能夠減少I/R后ROS的大量產(chǎn)生，并且還發(fā)現(xiàn)二氮嗪可以減少I/R后大量ROS 的產(chǎn)物[8]。Thuc 等[9]發(fā)現(xiàn)普伐他汀預(yù)處理對ROS的產(chǎn)物具有雙重效果，普伐他汀可以引起ROS的適度增加，隨后抑制H2O2導(dǎo)致的ROS大量爆發(fā)。綜上發(fā)現(xiàn)mitoKATP通道的開放可以促使少量的ROS產(chǎn)生，同時又能抑制I/R后的ROS大量爆發(fā)，減輕I/R損傷。

1.3 mitoKATP通道與鈣超載

鈣超載是誘導(dǎo)心肌細(xì)胞死亡的主要原因之一。心肌細(xì)胞通過多種鈣轉(zhuǎn)運機(jī)制，調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)及線粒體內(nèi)的鈣離子(Ca2+)濃度。I/R后，ATP減少，胞膜和肌漿網(wǎng)鈣泵發(fā)生功能障礙，使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加;另外，I/R后細(xì)胞內(nèi)pH值降低，激活Na+-H+交換體，使細(xì)胞內(nèi)Na+濃度增高，進(jìn)而激活Na+-Ca2+交換體，排出Na+，使Ca2+內(nèi)流，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加時，磷脂酶激活，水解膜磷脂，破壞膜結(jié)構(gòu)的完整性。同時，線粒體的鈣轉(zhuǎn)運體將細(xì)胞內(nèi)的鈣運輸?shù)骄€粒體內(nèi)，使線粒體內(nèi)鈣超載。誘發(fā)線粒體結(jié)構(gòu)破壞和功能障礙，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。MitoKATP通道的開放可促使K+內(nèi)流進(jìn)入線粒體，從而使線粒體跨膜電位發(fā)生變化，減少了Ca2+內(nèi)流的動力，減少線粒體內(nèi)鈣超載[10]。二氮嗪可以減少I/R后鈣超載，mitoKATP通道的活化可以加快呼吸鏈的電子傳遞，促進(jìn)氧化磷酸化，使ATP合成增加，保護(hù)線粒體的結(jié)構(gòu)和功能，減輕I/R后心肌損傷。上述效果被mitoKATP通道的阻斷劑5-HD取消[10]。

1.4 mitoKATP通道的檢測

檢測mitoKATP通道的方法如下:(1)電生理學(xué)記錄是證實 mitoKATP通道存在的最確切的證據(jù)。Inoue等[11]從肝臟細(xì)胞上提取線粒體，通過膜片鉗直接測定線粒體上的K+電流，其可被0.8 mmol/L的ATP抑制，從而證實了mitoKATP通道的存在。(2)測定由純化線粒體片段重建的蛋白脂質(zhì)體對K+的攝取。這種方法已經(jīng)被Garlid和他的同事們廣泛地使用[12]。(3)在520 nm處，測定光密度直徑而判斷線粒體的基質(zhì)容積[4]。因為mitoKATP通道開放，K+內(nèi)流，伴隨著滲透性離子和水的進(jìn)入，暫時性地超過K+/H+交換能力，結(jié)果可導(dǎo)致線粒體基質(zhì)容積增加。(4)測定黃素蛋白自發(fā)熒光評估線粒體氧化還原狀態(tài)。一系列的研究[13-14]通過測定黃素蛋白自發(fā)熒光評估m(xù)itoKATP的開放情況。mitoKATP通道的開放導(dǎo)致氧化磷酸化的適度解耦聯(lián)，表現(xiàn)為黃素蛋白的熒光增加。(5)Northern印跡法與RT-PCR方法測定kir6.1 mRNA和SUR1 mRNA的表達(dá)水平[15-16]。(6)蛋白質(zhì)印跡(western blot)技術(shù)被用來測定mitoKATP通道亞單位的蛋白表達(dá)水平[15]。

2 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔

2.1 線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔與心肌保護(hù)

由于細(xì)胞環(huán)境的不同，mPTP通常有以下三種狀態(tài):(1)生理情況下的關(guān)閉狀態(tài);(2)低通透性開放狀態(tài)，可使線粒體內(nèi)Ca2+釋放，減輕線粒體內(nèi)鈣超載;(3)高通透性開放狀態(tài)，可使分子量＜1.5 kD(≈1.5×103)的溶質(zhì)分子通過線粒體膜，導(dǎo)致線粒體內(nèi)水腫，呼吸鏈和氧化磷酸化失耦聯(lián)，ATP合成受阻，線粒體膜電位下降，細(xì)胞色素C等前凋亡蛋白釋放[17]。所有促進(jìn)mPTP開放的因素都可以被mPTP生理性拮抗劑阻斷，例如腺嘌呤核苷酸、質(zhì)子的濃度增加，線粒體膜電位的超極化和鎂離子等[18]。mPTP的開放也能被一些藥物阻斷，如環(huán)孢素 A(cyclosporine A，CsA)[19]。抑制mPTP的開放可減輕I/R后的損傷程度。環(huán)孢素A能減少缺氧復(fù)氧后乳酸脫氫酶(LDH)的釋放，增加ATP的含量，上述效果可被mPTP的開放劑蒼術(shù)苷(atractyloside)取消[20]。普伐他汀可明顯改善缺氧復(fù)氧后心肌細(xì)胞的收縮力，發(fā)揮心肌保護(hù)作用，mPTP的開放劑蒼術(shù)苷抑制了普伐他汀的作用[21]。Onishi等[22]在七氟醚預(yù)處理研究中，證實七氟醚通過增加mPTP開放的閾值發(fā)揮心肌保護(hù)作用。尼可地爾也可以抑制I/R造成的線粒體通透性轉(zhuǎn)變，從而發(fā)揮保護(hù)心肌的作用[23]。

多項研究表明，mPTP在心肌I/R損傷中發(fā)揮著重要的作用。高pH值、ATP耗竭、高磷酸鹽、鈣超載、ROS的爆發(fā)等因素均可誘發(fā)mPTP的開放[24]。其中鈣超載和ROS是mPTP開放的主要誘發(fā)因素。

2.2 mPTP與氧化應(yīng)激

線粒體是氧自由基產(chǎn)生的主要場所。生理情況下，生物體內(nèi)存在抗氧化劑與抗氧化酶系統(tǒng)，能夠及時清除氧自由基。但當(dāng)心肌發(fā)生I/R時，氧自由基生成系統(tǒng)增強(qiáng)，內(nèi)源性氧自由清除系統(tǒng)功能下降，使氧自由基大量產(chǎn)生。氧自由基在體內(nèi)發(fā)生連鎖反應(yīng)產(chǎn)生的高活性的氧化還原中間產(chǎn)物統(tǒng)稱為ROS。其可作用于ANT的硫醇，促進(jìn)其氧化，進(jìn)而誘導(dǎo)mPTP的持久開放，最終導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙及細(xì)胞死亡[25]。心肌細(xì)胞內(nèi)可能存在ROS誘導(dǎo)ROS釋放(ROS-induced ROS release，RIRR)。事實上，mPTP在ROS誘導(dǎo)ROS釋放中發(fā)揮重要作用，過多的ROS誘發(fā)mPTP的開放，由于mPTP的開放導(dǎo)致的細(xì)胞色素C及吡啶核苷酸的丟失抑制呼吸鏈，進(jìn)而促進(jìn)ROS的產(chǎn)生[26]，從而加重心肌細(xì)胞損傷。

2.3 mPTP與鈣超載

細(xì)胞外的Ca2+通過肌膜和橫管膜上的L型鈣通道進(jìn)入胞漿，觸發(fā)肌漿網(wǎng)終池大量釋放貯存的Ca2+，使胞漿內(nèi)Ca2+濃度升高而引起心肌收縮。心肌收縮結(jié)束時，肌漿網(wǎng)膜上的鈣泵逆濃度差將胞漿內(nèi)的Ca2+主動泵回肌漿網(wǎng)，同時肌膜可以通過鈉鈣交換和鈣泵將Ca2+排除胞外，使胞漿Ca2+濃度下降。在心肌I/R中，細(xì)胞內(nèi)酸中毒，質(zhì)子濃度明顯高于胞外，激活鈉氫交換體，使Na+進(jìn)入胞漿，胞漿內(nèi)的高Na+又使Na+Ca2+交換體激活，進(jìn)而導(dǎo)致胞漿內(nèi)Ca2+濃度增高。胞漿內(nèi)的Ca2+可通過線粒體膜上的載體進(jìn)入線粒體內(nèi)。鈣超載是誘發(fā)mPTP開放的重要因素之一[27]。VDAC表面有Ca2+的結(jié)合位點，游離的鈣與mPTP的金屬位點結(jié)合，促使mPTP開放。當(dāng)線粒體內(nèi)的鈣濃度低于0.2 μm 時，mPTP失活;當(dāng)高于 10 μm 時，誘導(dǎo) mPTP的開放。心肌細(xì)胞發(fā)生缺血，缺氧或氧化應(yīng)激時，ATP生成迅速減少，使細(xì)胞膜上離子泵功能下降，同時細(xì)胞外鈣內(nèi)流增加，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的鈣超載，胞質(zhì)中的鈣順著電化學(xué)梯度通過轉(zhuǎn)運系統(tǒng)進(jìn)入線粒體內(nèi)，引起線粒體內(nèi)鈣超載，進(jìn)而誘發(fā)mPTP的開放。

鈣超載是I/R損傷的主要因素，減少鈣超載可以阻斷或者減輕心肌損傷。Ngoh等[28]研究發(fā)現(xiàn)O-Glc-NAcylation預(yù)處理明顯減少缺氧或氧化應(yīng)激引起的鈣超載，進(jìn)而抑制mPTP的開放，發(fā)揮心肌保護(hù)作用。

2.4 mPTP的檢測

檢測mPTP的方法主要有:(1)檢測線粒體的腫脹程度。mPTP開放的同時伴隨著線粒體的腫脹，并在520 nm處的吸光度減小[29]，通過測定線粒體腫脹程度間接反映mPTP的開放情況。(2)通過檢測線粒體吸收Ca2+的能力反映mPTP的開放情況[29]。應(yīng)用Ca2+敏感的熒光探針，當(dāng)線粒體外的鈣濃度增加時，Ca2+轉(zhuǎn)運至線粒體內(nèi)，線粒體內(nèi)鈣飽和，達(dá)到誘發(fā)mPTP的開放，Ca2+從線粒體內(nèi)釋放，線粒體外出現(xiàn)瞬間熒光強(qiáng)度增加，通過檢測線粒體吸收Ca2+的能力，判斷mPTP的易感性。(3)線粒體膜電位的測定，mPTP的開放，導(dǎo)致線粒體膜電位的下降，通過熒光標(biāo)記的線粒體膜電位的變化，間接反映mPTP的開放情況[30]。(4)應(yīng)用酯化鈣黃綠素(calcein/AM)和氯化鈷(CoCl2)共同孵育的方法進(jìn)行mPTP開放程度的測定[31]。Calcein/AM能夠通過活細(xì)胞膜擴(kuò)散進(jìn)入胞漿和線粒體，之后被非特異性酯酶催化生成不易透出細(xì)胞膜的水溶性綠色熒光物質(zhì)calcein。加入的CoCl2不能進(jìn)入線粒體，但是能進(jìn)入細(xì)胞，并能與胞漿中的calcein結(jié)合，淬滅其熒光。所以當(dāng) mPTP未開放時，CoCl2能夠猝滅胞漿中的calcein所發(fā)出的綠色熒光，但并不影響線粒體內(nèi)的熒光強(qiáng)度。當(dāng)mPTP開放時，線粒體內(nèi)的calcein通過mPTP進(jìn)入胞漿，從而被胞漿中的CoCl2所淬滅。通過用激光掃描共聚焦顯微鏡檢測熒光強(qiáng)度的強(qiáng)弱，進(jìn)而反映mPTP開放的程度。熒光強(qiáng)度的變化與mPTP的開放程度呈反比關(guān)系。(5)通過檢測心肌組織內(nèi)NAD+的含量反映mPTP的開放情況。線粒體內(nèi)擁有組織中NAD+含量的90%以上。心肌I/R時，NAD+通過開放的mPTP被釋放，進(jìn)而被灌流液沖洗掉，因此，心肌組織中NAD+含量的高低能反映mPTP的開放情況，含量越低說明mPTP的開放程度越大，心肌損傷越嚴(yán)重[32]。(6)通過用3H-2-脫氧葡萄糖(3H-2-deoxygiucose，3H-DOG)預(yù)處理離體心臟，因為3H-DOG可在細(xì)胞質(zhì)中磷酸化為3H-DOG-6-P，后者不能被轉(zhuǎn)運至細(xì)胞外，也不能在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行代謝，當(dāng)mPTP開放后，3H-DOG-6-P會通過mPTP進(jìn)入線粒體。通過檢測線粒體內(nèi)的3H-DOG-6-P的含量，可評估m(xù)PTP的開放情況[30]。(7)細(xì)胞色素 C的檢測。在正常情況下，細(xì)胞色素C存在于線粒體內(nèi)外膜之間的腔隙中，mPTP的開放使細(xì)胞色素C從線粒體釋放到胞質(zhì)，應(yīng)用免疫組化技術(shù)或免疫熒光技術(shù)可檢測細(xì)胞色素C，間接反映mPTP的開放情況。

3 mitoKATP通道與mPTP的關(guān)系

Gao等[33]研究發(fā)現(xiàn)葛根素(0.24 mmol/L)預(yù)處理可以降低I/R后LDH的釋放，改善血流動力學(xué)，減少線粒體的腫脹程度(通過檢測線粒體的腫脹程度間接反映mPTP的開放程度)，mitoKATP通道的阻斷劑5-HD取消了葛根素的上述效果，說明葛根素可能是通過mitoKATP通道的活化抑制mPTP的開放，進(jìn)而發(fā)揮心肌保護(hù)作用。但是 mitoKATP通道的活化是如何抑制mPTP的開放的呢?研究發(fā)現(xiàn)mitoKATP通道的活化增加非缺氧條件下ROS的適度增加，降低再灌注后ROS的爆發(fā)，調(diào)節(jié)線粒體內(nèi)K+平衡，促進(jìn)Ca2+從線粒體釋放到胞漿，降低Ca2+內(nèi)流的驅(qū)動力，減輕線粒體鈣超載，改善線粒體能量代謝[34]。ROS的爆發(fā)與鈣超載激活mPTP的開放，抑制ROS的大量產(chǎn)生及鈣超載，可以減少 mPTP的開放[28]。另外，mitoKATP通道的活化也可能通過蛋白激酶C epsilon(PKCε)的活化，進(jìn)而抑制mPTP的開放[35]。當(dāng)然，也許還有其他的信號途徑需要進(jìn)一步證實。

4 展望

線粒體的結(jié)構(gòu)和功能的完整性對于心肌細(xì)胞的存活具有重要意義。心肌I/R使線粒體內(nèi)的各種動態(tài)平衡受到破壞，各種因素相互影響，導(dǎo)致I/R損傷。隨著研究的不斷深入，有效的保護(hù)線粒體結(jié)構(gòu)和功能的措施將成為防治心肌I/R的重要策略。

[1]Jennings RB，Sommers HM，Smyth GA，et al.Myocardial necrosis induced by temporary occlusion of a coronary artery in the dog[J].Arch Pathol，1960，70:68-78.

[2]Fantinelli JC，Gonzalez ALF，Perez NIA，et al.Protective effects of N-(2-mercaptopropionyl)-glycine against ischemia-reperfusion injury in hypertrophied hearts[J].Exp Mol Pathol，2013，94(1):277-284.

[3]Penna C，Perrelli MG，Pagliaro P.Mitochondrial pathways，permeability transition pore，and redox signaling in cardioprotection:therapeutic implications[J].Antioxid Redox Signal，2013，18(5):556-599.

[4]Anastacio MM，Kanter EM，Makepeace CM，et al.Relationship between mitochondrial matrix volume and cellular volume in response to stress and the role of ATP-sensitive potassium channel[J].Circulation，2013，128(11 Suppl 1):S130-135.

[5]Ahmed LA，Salem HA，Attia AS，et al.Pharmacological preconditioning with nicorandil and pioglitazone attenuates myocardial ischemia/reperfusion injury in rats[J].Eur J Pharmacol，2011，663:51-58.

[6]Garlid AO，Jaburek M，Jacobs JP，et al.Mitochondrial reactive oxygen spe-cies:which ROS signals cardioprotection[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2013，305(7):H960-968.

[7]Vigneron F，Dos SP，Lemoine S，et al.GSK-3beta at the crossroads in the signalling of heart preconditioning:implication of mTOR and Wnt pathways[J].Cardiovasc Res，2011，90(1):49-56.

[8]Sun Z，Zhang X，Ito K，et al.Amelioration of oxidative mitochondrial DNA damage and deletion after renal ischemic injury by the KATP channel opener diazoxide[J].Am J Physiol Renal Physiol，2008，294(3):F491-498.

[9]Thuc LC，Teshima Y，Takahashi N，et al.Mitochondrial K(ATP)channelsderived reactive oxygen species activate pro-survival pathway in pravastatininduced cardioprotection[J].Apoptosis，2010，15(6):669-678.

[10]Ragone MI，Consolini AE.CARDIAC role of the mitochondrial Ca2+transporters in the high-[K+ ](o)cardioprotection of rat hearts under ischemia and reperfusion:a mechano-energetic study[J].J Cardiovasc Pharmacol，2009，54(3):213-222.

[11]Inoue I，Nagase H，Kishi K，et al.ATP-sensitive K+channel in the mitochondrial inner membrane[J].Nature，1991，352(6332):244-247.

[12]Matkovic K，Koszela-Piotrowska I，Jarmuszkiewicz W，et al.Ion conductance pathways in potato tuber(Solanum tuberosum)inner mitochondrial membrane[J].Biochim Biophys Acta，2011，1807(3):275-285.

[13]Muravyeva M，Baotic I，Bienengraeber M，et al.Cardioprotection during diabetes:the role of mitochondrial DNA[J].Anesthesiology，2014，120(4):870-879.

[14]Muravyeva M，Sedlic F，Dolan N，et al.Preconditioning by isoflurane elicits mitochondrial protective mechanisms independent of sarcolemmal KATP channel in mouse cardiomyocytes[J].J Cardiovasc Pharmacol，2013，61(5):369-377.

[15]Kefaloyianni E，Bao L，Rindler MJ，et al.Measuring and evaluating the role of ATP-sensitive K+channels in cardiac muscle[J].J Mol Cell Cardiol，2012，52(3):596-607.

[16]Nie L，Tang M，Zeng Y，et al.Properties and functions of KATP during mouse perinatal development[J].Biochem Biophys Res Commun，2012，418(1):74-80.

[17]Shanmuganathan S，Hausenloy DJ，Duchen MR，et al.Mitochondrial permeability transition pore as a target for cardioprotection in the human heart[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2005，289(1):H237-242.

[18]di Lisa F，Bernardi P.A CaPful of mechanisms regulating the mitochondrial permeability transition[J].J Mol Cell Cardiol，2009，46(6):775-780.

[19]Basso E，Petronilli V，F(xiàn)orte MA，et al.Phosphate is essential for inhibition of the mitochondrial permeability transition pore by cyclosporin A and by cyclophilin D ablation[J].J Biol Chem，2008，283(39):26307-26311.

[20]Naparus A，Ashrafpour H，Hofer SO，et al.Efficacy and mechanism of hypoxic postconditioning in salvage of ex vivo human rectus abdominis muscle from hypoxia/reoxygenation injury[J].Eur J Pharmacol，2012，686(1-3):90-96.

[21]Lemoine S，Allouche S，Coulbault L，et al.Mechanisms involved in cardioprotective effects of pravastatin administered during reoxygenation in human myocardium in vitro[J].Anesthesiology，2012，116(4):824-833.

[22]Onishi A，Miyamae M，Kaneda K，et al.Direct evidence for inhibition of mitochondrial permeability transition pore opening by sevoflurane preconditioning in cardiomyocytes:comparison with cyclosporine A[J].Eur J Pharmacol，2012，675(1-3):40-46.

[23]Carreira RS，Monteiro P，Kowaltowski AJ，et al.Nicorandil protects cardiac mitochondria against permeability transition induced by ischemia-reperfusion[J].J Bioenerg Biomembr，2008，40(2):95-102.

[24]Perrelli MG，Pagliaro P，Penna C.Ischemia/reperfusion injury and cardioprotective mechanisms:role of mitochondria and reactive oxygen species[J].World J Cardiol，2011，3(6):186-200.

[25]Robin E，Guzy RD，Loor G，et al.Oxidant stress during simulated ischemia primes cardiomyocytes for cell death during reperfusion[J].J Biol Chem，2007，282(26):19133-19143.

[26]di Lisa F，Kaludercic N，Carpi A，et al.Mitochondrial pathways for ROS formation and myocardial injury:the relevance of p66(Shc)and monoamine oxidase[J].Basic Res Cardiol，2009，104(2):131-139.

[27]Davidson SM，Yellon DM，Murphy MP，et al.Slow calcium waves and redox changes precede mitochondrial permeability transition pore opening in the intact heart during hypoxia and reoxygenation[J].Cardiovasc Res，2012，93(3):445-453.

[28]Ngoh GA，Watson LJ，F(xiàn)acundo HT，et al.Augmented O-GlcNAc signaling attenuates oxidative stress and calcium overload in cardiomyocytes[J].Amino Acids，2011，40(3):895-911.

[29]Wong R，Steenbergen C，Murphy E.Mitochondrial permeability transition pore and calcium handling[J].Methods Mol Biol，2012，810:235-242.

[30]Dedkova EN，Blatter LA.Measuring mitochondrial function in intact cardiac myocytes[J].J Mol Cell Cardiol，2012，52(1):48-61.

[31]Zhu J，Rebecchi MJ，Glass PS，et al.Cardioprotection of the aged rat heart by GSK-3beta inhibitor is attenuated:age-related changes in mitochondrial permeability transition pore modulation[J].Am J Physiol Heart Circ Physiol，2011，300(3):H922-930.

[32]Zhu J，Rebecchi MJ，Tan M，et al.Age-associated differences in activation of Akt/GSK-3beta signaling pathways and inhibition of mitochondrial permeability transition pore opening in the rat heart[J].J Gerontol A Biol Sci Med Sci，2010，65(6):611-619.

[33]Gao Q，Pan HY，Qiu S，et al.Atractyloside and 5-hydroxydecanoate block the protective effect of puerarin in isolated rat heart[J].Life Sci，2006，79(3):217-224.

[34]O＇Rourke B.Evidence for mitochondrial K+channels and their role in cardioprotection[J].Circ Res，2004，94(4):420-432.

[35]Garlid KD，Costa AD，Quinlan CL，et al.Cardioprotective signaling to mitochondria[J].J Mol Cell Cardiol，2009，46(6):858-866.