人巨細(xì)胞病毒在冠心病患者中的免疫調(diào)節(jié)作用及其臨床意義

寧觀佳，陳漠水

人巨細(xì)胞病毒在冠心病患者中的免疫調(diào)節(jié)作用及其臨床意義

寧觀佳，陳漠水

目的：檢測(cè)冠心病患者人巨細(xì)胞病毒（HCMV）感染情況，探討HCMV感染對(duì)冠心病患者調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的影響。

冠心??；人巨細(xì)胞病毒；調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞

(Chinese Circulation Journal, 2014,29:976.)

冠心病血管的基本病理改變是動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)脈內(nèi)膜上堆積的粥樣脂質(zhì)斑塊，可直接引起管腔狹窄，誘發(fā)局部血栓形成，最終導(dǎo)致心絞痛和心肌梗死臨床癥狀的發(fā)生[1]。人巨細(xì)胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）即人皰疹病毒5型，近年來(lái)的研究顯示HCMV感染可能參與了動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程[2]。本研究檢測(cè)了冠心病患者HCMV的感染情況，探討了HCMV感染對(duì)冠心病患者免疫功能的影響，以期闡明HCMV感染在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中的可能作用機(jī)制。

1 資料和方法

1.1病例資料

收集2012-04至2014-05我院心血管內(nèi)科診治的冠心病患者86例為冠心病組，其中男43例，女43例，年齡56～75歲，平均(66.4±8.2)歲，心絞痛患者46例，心肌梗死患者40例。冠心病的診斷參照美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]：并行冠狀動(dòng)脈計(jì)算機(jī)斷層攝影術(shù)或冠狀動(dòng)脈造影確診。排除標(biāo)準(zhǔn)：近期使用過(guò)免疫抑制劑者，伴發(fā)其他自身免疫性疾病者，伴發(fā)慢性炎癥、惡性腫瘤者。另取本院健康體檢者80例作為對(duì)照組，其中男性40例，女性40例，年齡53～74歲，平均年齡（65.7±8.4）歲。冠心病組和對(duì)照組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2人巨細(xì)胞病毒感染的檢測(cè)

HCMV檢測(cè)使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采集所有受試者靜脈血2 ml，1 000 g離心15 min分離上層血清送檢驗(yàn)科，按試劑盒說(shuō)明操作，并判斷陰性、陽(yáng)性結(jié)果。

1.3調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的流式細(xì)胞儀檢測(cè)

外周血單個(gè)核細(xì)胞中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的比例使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。采集所有受試者靜脈血5 ml，加入紅細(xì)胞裂解液（上?；蛏锟萍加邢薰荆?，1 000 g離心15 min，棄上清，PBS緩沖液洗滌沉渣2次，英國(guó)Abcom公司生產(chǎn)的FITC-CD4、PE-CD25特異性抗體染色細(xì)胞30 min，使用美國(guó)Beckman Coulter公司生產(chǎn)的流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+/ CD25+的T淋巴細(xì)胞。

1.4白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)的檢測(cè)

白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α的表達(dá)檢測(cè)使用ELISA法，檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，采集所有受試者靜脈血2 ml，1 000 g 離心15 min分離上層血清送檢驗(yàn)科，按試劑盒說(shuō)明操作，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品計(jì)算出上述因子的表達(dá)水平。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1冠心病組和對(duì)照組人巨細(xì)胞病毒感染情況分析

冠心病組檢出HCMV感染62例，陽(yáng)性率為72.1%，對(duì)照組檢出HCMV感染22例，陽(yáng)性率為27.5%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表1

2.2冠心病組和對(duì)照組調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平的比較

冠心病組調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例和白介素-10表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組（P＜0.01），而白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平又顯著高于對(duì)照組（P＜0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1

2.3心絞痛和急性心肌梗死患者人巨細(xì)胞病毒感染情況分析

46例心絞痛患者中檢出HCMV感染28例，陽(yáng)性率為60.9%，40例急性心肌梗死患者中檢出HCMV感染34例，陽(yáng)性率為85.0%，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。表1

2.4心絞痛和急性心肌梗死患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平的變化

急性心肌梗死患者調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及血清中白介素-10表達(dá)水平顯著低于心絞痛患者（P＜0.01），而白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平急性心肌梗死患者又顯著高于心絞痛患者（P＜0.01），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1

表1 兩組患者人巨細(xì)胞病毒感染率、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平的比較

表1 兩組患者人巨細(xì)胞病毒感染率、調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及血清中白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平的比較

注：與對(duì)照組比較*P＜0.05 **P＜0.01；與心絞痛患者比較△P＜0.05 △△P＜0.01

腫瘤壞死因子-α (μg/ml)對(duì)照組 80 27.5（22） 6.38±1.42 27.84±4.23 9.12±2.12 16.42±2.57冠心病組 86 72.1（62）* 3.32±0.73** 16.54±3.84** 28.91±4.38** 36.34±6.05**心絞痛患者 46 60.9（28） 4.24±1.03 21.43±4.16 20.55±3.43 31.12±5.83急性心肌梗死患者 40 85.0（34）△ 2.06±0.52△△ 10.91±2.23△△ 36.58±5.72△△ 44.49±7.24△△組別 例數(shù) 人巨細(xì)胞病毒感染率[% (例)]調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例(%)白介素-10 (μg/ml)白介素-6 (μg/ml)

3 討論

HCMV在自然界中存在潛伏性感染[4]，本研究在健康對(duì)照人群中檢測(cè)到27.5%的感染率，流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示人群HCMV感染率會(huì)隨著年齡增長(zhǎng)而增加[5]，而冠心病就是一個(gè)老年性疾病，二者都有隨年齡增加而發(fā)病增加的趨勢(shì)，這一結(jié)果提示了二者之間存在一定的相關(guān)聯(lián)系[6]，本研究的檢測(cè)顯示冠心病患者的HCMV陽(yáng)性檢出率顯著高于健康對(duì)照人群，而且在急性心肌梗死患者HCMV陽(yáng)性檢出率又顯著高于心絞痛患者，上述結(jié)果提示了HCMV感染可能參與了冠心病的發(fā)生和病程進(jìn)展。

國(guó)內(nèi)外的研究顯示HCMV感染可以啟動(dòng)動(dòng)脈粥樣硬化形成程序[7]，但其具體機(jī)制仍未明了。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞是最近幾年發(fā)現(xiàn)的CD4陽(yáng)性T細(xì)胞亞群，在體內(nèi)起到免疫抑制的作用[8]，已有研究觀察到HCMV感染的患者會(huì)出現(xiàn)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的減低[9]，可能是病毒感染T細(xì)胞，抑制了T細(xì)胞的活化，本研究觀察到了冠心病患者調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞較健康對(duì)照顯著減低，急性心肌梗死患者調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞又顯著低于心絞痛患者。調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的體內(nèi)效應(yīng)因子是白介素-10，白介素-10可以抑制白介素-6和腫瘤壞死因子-α等炎性因子的表達(dá)，已知炎性因子是冠心病動(dòng)脈粥樣硬化病變的主要始動(dòng)因子[10]，本研究也觀察到了冠心病患者白介素-10表達(dá)的減低，并且急性心肌梗死患者較心絞痛患者減低的更顯著，同時(shí)冠心病患者白介素-6和腫瘤壞死因子-α炎性因子較健康對(duì)照人群顯著升高，急性心肌梗死患者較心絞痛患者升高的更加顯著。上述結(jié)果提示HCMV感染抑制了T細(xì)胞向調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的分化，打破了機(jī)體的免疫抑制平衡狀態(tài)，從而誘發(fā)了高炎癥狀態(tài)，進(jìn)一步導(dǎo)致了冠心病患者動(dòng)脈血管病變的發(fā)生、發(fā)展。綜上所述，本研究顯示冠心病患者中HCMV檢出率高，HCMV感染可能通過(guò)抑制調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生參與了冠心病患者動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，本研究提示控制HCMV感染有可能成為延緩冠心病患者動(dòng)脈粥樣硬化病變的新靶點(diǎn)，HCMV感染調(diào)控調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí)。

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Immunity of Human Cytomegalovirus in Patients of Coronary Artery Disease With its Clinical Efficacy

NING Guan-jia, CHEN Mo-shui.
Department of Cardiology, Haikou People’s Hospital, Haikou (570208), Hainan, China

NING Guan-jia, Email: ngjlsy@126.com.cn

Objective: To detect the infectious condition of human cytomegalovirus (HCMV) in coronary artery disease (CAD) patients and to explore the effect of HCMV infection on Treg cells in CAD patieuts.Methods: A total of 86 CAD patients treated in our hospital from 2012-04 to 2014-05 were studied. The patients were divided into 2 groups: Angina Pectoris (AP) group, n=46 and Acute myocardial infarction (AMI) group, n=40. In addition, there was a Control group with 80 healthy subjects. The Treg cell amount was detected by fl ow cytometry analysis, the expression levels of HCMV and IL-10, IL-6, TNF-α were examined by ELISA.Results: The positive rate of HCMV infection was higher in CAD group than that in Control group as 72.1% vs 27.5%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in CAD group were (3.32 ± 0.73) % and (16.54 ± 3.84) μg/ml, (28.91 ± 4.38) μg/ml, (36.34 ± 6.05) μg/ml, while in Control group were (6.38 ± 1.42) % and (27.84 ± 4.23) μg/ml, (9.12 ± 2.12) μg/ml, (16.42 ± 2.57) μg/ml respectively, all P＜0.01. The positive rate of HCMV infection was higher in AMI group than that in AP group as 85.0% vs 60.9%, P＜0.05. The ratio of Treg cell and the levels of IL-10, IL-6, TNF-α expression in AP group were (4.24 ± 1.03) % and (21.43 ± 4.16) μg/ml, (20.55 ± 3.43) μg/ml, (31.12 ± 5.83) μg/ml, while in AMI group were (2.06 ± 0.52) % and (10.91 ± 2.23) μg/ml, (36.58 ± 5.72) μg/ml, (44.49 ± 7.24) μg/ml respectively, all P＜0.01.Conclusion: CAD patients had the higher positive rate of HCMV infection, which may inhibit Treg cell production and then, involved in CAD occurrence and development.

Coronary artery disease; Human cytomegalovirus; Treg cell

2014-07-14）

（編輯：漆利萍）

570208 海南省，海口市人民醫(yī)院 心血管內(nèi)科

寧觀佳 主治醫(yī)師 學(xué)士 主要從事冠心病臨床研究 Email: ngjlsy@126.com.cn 通訊作者：寧觀佳

R541

A

1000-3614（2014）12-0976-03

10.3969/j.issn.1000-3614.2014.12.005

方法：收集2012-04至2014-05我院心血管內(nèi)科診治的冠心病患者（冠心病組）86例，其中心絞痛患者46例，心肌梗死患者40例。另取我院健康體檢者80例作為對(duì)照組。HCMV檢測(cè)使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法，調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)，白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)的檢測(cè)使用ELISA法。

結(jié)果：冠心病組HCMV陽(yáng)性率為72.1%，顯著高于對(duì)照組的27.5%（P＜0.05）。冠心病組調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平分別為（3.32±0.73）%、（16.54±3.84）μg/ml、（28.91±4.38）μg/ml、（36.34±6.05）μg/ml，對(duì)照組分別為（6.38±1.42）%、（27.84±4.23）μg/ml、（9.12±2.12）μg/ml、（16.42±2.57）μg/ml，上述指標(biāo)在兩組間具有顯著性差異（P＜0.01）。急性心肌梗死患者HCMV陽(yáng)性率為85.0%，顯著高于心絞痛患者的60.9%（P＜0.05）。心絞痛患者調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞比例以及白介素-10、白介素-6和腫瘤壞死因子-α表達(dá)水平分別為（4.24±1.03）%、（21.43±4.16）μg/ml、（20.55±3.43）μg/ml、（31.12±5.83）μg/ml，急性心肌梗死患者分別為（2.06±0.52）%、（10.91±2.23）μg/ml、（36.58±5.72）μg/ml、（44.49±7.24）μg/ml，上述指標(biāo)在兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

結(jié)論：冠心病患者中HCMV檢出率高，HCMV感染可能通過(guò)免疫系統(tǒng)抑制調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生，并參與了冠心病患者動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。