富硒茶多糖對小鼠抗氧化能力的影響

李 虹，梁 磊，康堔喆，郭歡歡，張海猛，王一民，郭 飛，池愛平

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富硒茶多糖對小鼠抗氧化能力的影響

李 虹，梁 磊，康堔喆，郭歡歡，張海猛，王一民，郭 飛，池愛平

陜西師范大學體育學院，陜西 西安，710119。

目的：研究富硒茶多糖對耐力運動條件下游泳小鼠疲勞與24h恢復后的影響。方法：建立5周小鼠耐力運動模型，每周稱重一次，灌胃不同劑量的富硒茶多糖溶液，于力竭游泳即刻和24h恢復后分別取材。記錄立竭游泳時間，力竭即刻和24h恢復后血乳酸（BLA），血清尿素氮（BUN）含量、CK、SOD的活性以及MDA的含量。結果：富硒茶多糖可顯著延長小鼠力竭游泳時間，對體重并無顯著影響；富硒茶多糖可以顯著降低力竭即刻BLA的堆積和BUN的含量，降低CK濃度。不管力竭即刻、24h恢復后，于對照組相比，富硒茶多糖可以顯著降低脂質過氧化產(chǎn)物MDA的含量，提高小鼠肝組織中超氧化物歧化酶SOD的活性。結論：富硒茶多糖能夠提高小鼠的運動能力，對疲勞恢復具有一定的改善作用。它能夠提高部分抗氧化酶的活性，抑制脂質過氧化對機體的損害。

富硒茶多糖；抗氧化；力竭運動；抗疲勞

茶葉是世界人民的三大飲料之一，茶樹是富硒能力較強的植物，茶葉中的硒多為有機硒，是理想的補硒資源[1.2]。紫陽茶中的硒含量豐富，其標準為0.5~2mg/kg，是國內(nèi)首個通過科學鑒定的天然富硒茶。硒是人體15種必須微量元素之一，缺硒能夠使機體的抗氧化能力降低，氧化和抗氧化能力失衡，抗氧化性是其主要生理功能之一，硒化物能夠清除機體內(nèi)有害過氧化自由基，防止過氧化物損傷[3 4]。氧化應激所帶來的破壞可以通過優(yōu)化營養(yǎng)預防，特別是營養(yǎng)抗氧化劑，多糖起著保護多不和脂肪酸防止脂質過氧化的作用[5]。茶多糖是茶葉中和蛋白相結合的一種酸性多糖或蛋白，具有降血脂、血糖、血壓、抗凝血、血栓等功效。富硒茶不僅具有茶多糖的功效，而且由于紫陽富硒茶中的硒主要與堿溶性蛋白相結合，其硒含量也高于其他茶葉[6]。目前對富硒茶的研究主要集中在茶多糖的提取工藝以及硒的形態(tài)和性質等，對富含硒的茶多糖在運動領域抗疲勞抗氧化活性方面報道較少，本實旨在為富硒茶多糖能夠在運動中作為一種運動補劑預防和延緩疲勞產(chǎn)生，為提高運動能力提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材 料

富硒茶購自西安市吳家墳中藥店。實驗動物為健康昆明種雄性小鼠，兩月齡，體重22~26g，由陜西省交大醫(yī)學院實驗動物飼養(yǎng)中心購入，同時購入基礎飼料。進行為期一周的適應性飼養(yǎng)后進行試驗。

1.2 實驗動物模型

選用2個月大的昆明小鼠80只，動物飼養(yǎng)室的溫度為12℃~18℃，相對濕度為43%~50%，光照隨同自然光變化。適應性飼養(yǎng)1w后，隨機分為4組，每組20只，安靜組、運動對照組、STP低劑量組（100 mg/kg· d）、STP高劑量組（200 mg/kg· d），安靜組和運動對照組灌胃生理鹽水，適應性飼養(yǎng)1w后，需要連續(xù)運動5w，每周休息1d，除安靜組外，其余每組每晚8點游泳90min，每次運動前適應性游泳10min，之后在計時。游泳條件：水深40cm，水溫30℃，80*50*60cm的塑料水池，游泳過程中用玻璃棒驅趕小鼠，避免小鼠漂浮在水面上，游泳結束后用毛巾擦干并用電暖扇幫助小鼠烘干防止感冒。

力竭判斷的標準：小鼠游泳動作明顯失調(diào)，劃水頻率緩慢，連續(xù)下沉，在水中連續(xù)打轉，沉入水中超過8s，且在平面上無法完成翻正反射。記錄各組小鼠力竭時間，之后隨機處死各組小鼠的一半，取材，測定運動后即刻的相關生化指標，另一半恢復24h后處死，取材，測定運動恢復后的相關生化指標。血清BLA、BUN、CK、SOD 活性和 MDA 含量，測定全部使用南京建成生物制劑公司生產(chǎn)的試劑盒，按照說明嚴格操作

1.3 富硒茶多糖的提取

對于富硒茶中茶多糖的提取主要采用的是熱水浸提的方法。首先將富硒茶葉洗凈，進行粉碎預處理，目的是去除泥土等雜質，加大在萃取過程中與溶劑的接觸面積[7]。將粉碎后的茶葉放入溫度為50℃濃度為80%的乙醇中浸提2小時，干燥后放入80℃的蒸餾水中2h，浸提2到3次，固液比為1：15，每一次的浸提物最后都要被過濾出來。由此可得粗多糖。接著采用Sevage法除蛋白，配制V（正丁醇）：V（三氯甲烷）為4:1的混合液，將粗多糖與混合液混合，劇烈震蕩30min，靜置沉淀取上清液，將上清液和無水乙醇以1:4的體積混合，靜置一夜，之后離心，將沉淀物用乙醇、丙酮、乙醚依次洗滌，冷凍干燥，即得粗的富硒茶多糖。

1.4 統(tǒng)計學分析

應用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，小鼠游泳至力竭時間進行獨立t 檢驗，計量資料采用均數(shù)±標準差（x ± s）表示，各組間比較采用單因素方差分析。

2 結果與分析

2.1 各組小鼠體重的比較

如圖1所示，四組小鼠在經(jīng)過五周的訓練其體重都在逐漸上升，從第3周開始上升幅度較大，補充STP高劑量組小鼠體重略高于其余3組，說明補充富硒茶多糖可能會使體重有所上升。

圖1 各組小鼠體重的比較

2.2 各組小鼠力竭游泳時間的比較

表1 富硒茶多糖對小鼠力竭游泳時間的影響

*：p<0.05與運動對照組比較，**：p<0.01與運動對照組比較

如表1所示，STP高低劑量組小鼠力竭游泳時間均長于運動對照組，其中低劑量組游泳力竭時間與對照組相比顯著延長，具有顯著性差異（p<0.05），高劑量組與對照組相比力竭時間延長極顯著（p<0.01），其延長百分率達17.17%。判斷疲勞的方法之一就是游泳的時間，所以從力竭時間來看，STP組的游泳時間均顯著延長，說明富硒茶多糖具有明顯的抗疲勞作用。

2.3 各組小鼠力竭即刻和24h恢復后血清肌酸激酶（CK）含量的比較

表2 各組小鼠力竭即刻及24h恢復后血清肌酸激酶（CK）含量的比較（U/L）

*：p<0.05與安靜組比較;＊：p<0.05與運動對照組比較

從表2中看出，運動后即刻運動對照組和STP組CK含量低于安靜組（p<0.05），STP組CK含量均低于運動對照組（p<0.05）;24h恢復后與力竭即刻相比，4組CK含量都有所升高，但STP組升高的幅度低于其他兩組，無論是力竭即刻還是恢復后STP組CK均顯著低于安靜組和運動對照組，說明富硒茶多糖對降低機體CK含量具有積極作用。

2.4 各組小鼠力竭測試即刻和24h恢復后血乳酸（BLA）含量與恢復率比較

表3 各組小鼠力竭測試即刻和24h后血乳酸（BLA）含量與恢復率比較

*： p﹤0.05 與安靜組比較比較.#：p<0.05與運動對照組比較

由表3可知，運動后即刻，STP組的血乳酸濃度低于安靜組和運動對照組（p<0.05），24h恢復后4組小鼠血乳酸含量之間無明顯差異（p>0.05），血乳酸恢復率無統(tǒng)計學意義（p>0.05）。

2.5 各組小鼠力竭測試即刻和24h恢復后血清尿素氮（BUN）含量與變化率比較

*：p﹤0.05 與安靜組比較; **：p﹤0.01 與安靜組比較

#：p﹤0.05 與運動對照組比較; ##：p﹤0.01 與運動對照組比較.

如表4所示，力竭即刻運動對照組血清尿素氮含量低于安靜組（p<0.05），STP組的血尿素氮含量顯著低于安靜組和運動對照組（p<0.01）；24h恢復后4組小鼠血清尿素氮都有所降低，STP高劑量組的變化幅度最小。

2.6 各組小鼠力竭測試即刻、24h恢復后SOD與MDA含量的比較

表5 各組小鼠力竭測試即刻、24h恢復后SOD與MDA含量的比較

*：p﹤0.05 與安靜組比較; **：p﹤0.01 與安靜組比較

#： p﹤0.05 與運動對照組比較; ##： p﹤0.01 與運動對照組比較.

從表5中可以看出，力竭運動即刻STP高劑量組MDA含量低于安靜組和運動對照組（p<0.05），STP低劑量組與安靜組和運動對照組相比無明顯差異；24h恢復后4組MDA含量增高不明顯，高劑量組MDA含量仍低于其余3組，無論是力竭即刻還是恢復后，STP高劑量組MDA含量均低于安靜組和對照組（p<0.05）。力竭即刻STP高劑量組SOD活性高于安靜組和運動對照組（p<0.05），24h恢復后，STP組SOD活性均高于安靜組和運動對照組（p<0.05），其中高劑量組與安靜組和對照組相比具有極顯著性差異（p<0.01）。

3 討 論

運動性疲勞是運動本身引起的機體工作能力暫時降低，經(jīng)過適當時間休息和調(diào)整可以恢復的生理現(xiàn)象，是一個極其復雜的身體變化綜合反應過程，對人體來說又是一種保護性機制。研究顯示，在長時間大強度運動中，糖原大量耗盡、血糖濃度降低、乳酸堆積都能誘發(fā)運動性疲勞的發(fā)生[8]。資料表明，血乳酸、血清肌酸激酶、血清尿素氮是反映肌體的有氧代謝能力和疲勞程度的重要指標[9]。血清尿素氮和血乳酸是在運動過程中堆積的代謝廢物，會導致機體疲勞產(chǎn)生，阻礙運動能力的發(fā)揮，實驗結果顯示，服用富硒茶多糖小鼠在力竭即刻血尿素氮和血乳酸含量均低于其它兩組，在24h恢復后變化不顯著，說明富硒茶多糖可以減少運動過程中血清尿素氮和乳酸堆積，從力竭游泳時間可以看出服用茶多糖組小鼠力游泳時間顯著長于其余兩組（p<0.01），說明其能夠顯著提高機體耐力水平，其存在的可能機制與肝糖原儲備，減少血尿素氮和乳酸堆積有關。

力竭運動會使機體自由基產(chǎn)生增多，抗氧化酶因受到自由基的傷害導致活性下降，使機體抗氧化系統(tǒng)不能有效清除自由基，自由基產(chǎn)生過多或清除能力下降與癌癥、衰老及自身免疫功能喪失等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展密切相關。為維持機體自身正常運轉和健康狀態(tài)，加強機體的抗氧化系統(tǒng)是預防自由基對機體造成傷害的有效措施，所以構筑一道抗自由基氧化的防線就是本實驗研究的目的之一。通過測定組織中 MDA 的濃度可以反映機體自由基生成的情況，通過測定 SOD 的活性可反映機體內(nèi)自由基清除的情況[10]。MDA是生物體內(nèi)脂質氧化的最終產(chǎn)物，其含量能夠反映機體脂質過氧化反映的強弱，從而間接地反映出細胞的損傷程度[11]，SOD被視為生命科技中最具神奇魔力的酶、人體內(nèi)的垃圾清道夫，氧自由基的自然天敵，是機體內(nèi)氧自由基的頭號殺手，是生命健康之本。實驗結果表明，在力竭即刻服用富硒茶多糖小鼠MDA含量顯著低于安靜組和運動對照組，24h恢復后MDA含量增高幅度不大，說明富硒茶多糖可以減輕由于活性氧自由基增多對細胞的破壞，能夠抑制脂質過氧化反應。其機理可能是富硒茶多糖富含抗氧化成分，可直接中和自由基，夠提高機體抗氧化酶的活性，抑制H2O2的大量堆積，使自由基代謝達到平衡[12]。結果顯示，耐力運動導致SOD活性下降，STP高劑量組小鼠SOD活性在力竭即刻顯著升高，在24h恢復后與安靜組和對照組相比活性仍顯著升高，說明富硒茶多糖對維護SOD活性具有積極作用。對于STP保護抗氧化酶活性機制尚不明確，有待于進一步研究。

4 結 論

富硒茶多糖可以降低血清尿素氮和血乳酸的堆積，延長耐力運動時間，延緩運動性疲勞的發(fā)生；同時富硒茶多糖可以抑制力竭運動小鼠抗氧化酶活性和SOD含量過度降低，降低脂質過氧化產(chǎn)物MDA的含量；研究結果表明富硒茶多糖具有明顯的抗疲勞和抗氧化的作用。富硒茶多糖所具有的這些生物活性可能與其多糖的結構有密切關系，有待于下一步進行研究。

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Effect of Selenium-rich Tea Polysaccharide on the Endurance of Mice and Fatigue Recovery

LI Hong, LIANG Lei, KANG Shen-zhe, etl

Institute of P.E., Shaanxi Normal University, Shaanxi Xi’an, 710119, China.

Objective: To investigate the effects of Selenium-rich Tea Polysaccharide on the ability of swimming and anti-fatigue activity of the mice after 24h. Methods: The endurance exercise model of mice was established about five weeks, Weighing once a week, Selenium-rich Tea Polysaccharide were orally administrated to mice in different dose. The materials were restored respectively in exhaustion swimming immediately and after 24 h. Prolonged exhaustive exercise time of the mice swimming time were recorded and the content of BLA, BUN, MDA and the activity of CK and SOD were determined. Results: The administration with STP markedly prolonged exhaustive exercise time of the mice. There is no obvious effect on body weight.STP can decrease the content of BLA, BUN and CK. The content of MDA of STP was markedly decrease whatever in exhaustion immediately or recovery after 24 hours and the activity of SOD was increase. Conclusion: STP can improve the ability of the movement and fatigue. It can improve the activity of antioxidant enzymes, inhibition of lipid per oxidation damage to the body.

Selenium-rich Tea; Polysaccharide; Exhaustive exercise; Ant fatigue activity

1007―6891（2014）04―0029―04

10.13932/j.cnki.sctykx.04.08

G804.7

A

2014-04-17