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    Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義*

    2014-02-27 07:46:48孟淑娟陳小君于永利
    西部醫(yī)學(xué) 2014年11期
    關(guān)鍵詞:尿路膀胱癌上皮

    孟淑娟,陳小君,尹 豐,王 勇,于永利

    (唐山鋼鐵集團(tuán)有限公司醫(yī)院1.病理科,2.泌尿科;3.曹妃甸區(qū)工人醫(yī)院,河北 唐山063000)

    膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,90%以上為膀胱尿路上皮癌,其生物學(xué)行為表現(xiàn)為易發(fā)、多發(fā)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移。復(fù)發(fā)和浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是膀胱癌治療失敗的主要原因。腫瘤細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的增高是實(shí)現(xiàn)浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的前提。侵襲的腫瘤細(xì)胞常表現(xiàn)出特殊的形態(tài)特征[1]。Fascin蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的一種,能與F-肌動(dòng)蛋白緊密結(jié)合,與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力和細(xì)胞間的相互作用密切相關(guān),其作為結(jié)合細(xì)胞突起作用的結(jié)合蛋白,來(lái)輔助完成細(xì)胞附著、細(xì)胞之間相互作用和細(xì)胞移動(dòng)的功能[2]。

    1 對(duì)象與方法

    1.1 研究對(duì)象 收集2009年9月~2012年10月在唐鋼醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除并保存完好的石蠟標(biāo)本:膀胱尿路上皮癌109例,均為初發(fā)病例,術(shù)前均未接受放、化療;年齡55~85歲,中位年齡68歲,其中男性78例,女性31例。腺性膀胱炎20例,年齡38~74歲,中位年齡58歲,其中男性15例,女性5例。對(duì)照組為10例癌旁膀胱粘膜組織,均取自開(kāi)放性手術(shù)斷端,距腫瘤邊緣大于5cm,經(jīng)病理確診無(wú)癌組織浸潤(rùn)。所有病例的臨床病理資料完整,經(jīng)高年資病理醫(yī)師復(fù)查H.E切片,證實(shí)病理診斷,并確定每例膀胱尿路上皮癌的組織學(xué)分級(jí)及臨床分期。根據(jù)1973年WHO公布的膀胱惡性腫瘤病理分級(jí)方法:G1:28例,G2:45例,G3:36例。臨床分期根據(jù)UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn):淺表型(Tis~T1):63例,浸潤(rùn)型(T2~T4):46例。腫瘤單發(fā)35例,多發(fā)74例。術(shù)后證實(shí)18例伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,91例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

    1.2 實(shí)驗(yàn)試劑 鼠抗人Fascin單克隆抗體(工作液,克隆號(hào)FCN01),S-P通用二抗試劑盒,DAB顯色劑均購(gòu)自上海太陽(yáng)生物科技有限公司。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 采用免疫組化S-P法染色 組織經(jīng)10%中性甲醛固定,石蠟包埋,切成厚度4μm組織切片;將組織切片貼附于經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片上,并經(jīng)60℃烤2小時(shí)。實(shí)驗(yàn)步驟嚴(yán)格按試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。陽(yáng)性對(duì)照用脾組織切片,BPS代替一抗作陰性對(duì)照。

    1.3.2 免疫組化結(jié)果判定 所有組織切片的評(píng)分由兩名病理醫(yī)師在不知情的前提下各自獨(dú)立進(jìn)行,遇到結(jié)果不一致時(shí),兩名醫(yī)師討論,得出綜合分析意見(jiàn)。

    Fascin表達(dá)陽(yáng)性信號(hào)為棕黃色至棕褐色顆粒,定位于細(xì)胞胞漿和(或)胞膜,依據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù)得分相乘評(píng)分。①染色強(qiáng)度計(jì)分標(biāo)準(zhǔn):用以確定為陽(yáng)性的乳腺癌標(biāo)本的反應(yīng)強(qiáng)度作為對(duì)照,無(wú)色為0分、表達(dá)強(qiáng)度弱于它為1分、與其相同為2分、比之強(qiáng)為3分。②陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)數(shù):普通光鏡相同放大倍數(shù)下計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),少于25%為1分、25%~50%為2分、51%~75%為3分、75%以上為4分。兩項(xiàng)得分相乘分為4個(gè)級(jí)別:0分(-)、1~4分(+,弱陽(yáng)性)、5~8分(++,中度陽(yáng)性)、9~12分(+++,強(qiáng)陽(yáng)性)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析時(shí),(+)以上視為陽(yáng)性。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 運(yùn)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件,數(shù)據(jù)處理采用χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)性檢驗(yàn),小樣本資料采用Fisher精確概率檢驗(yàn)法,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    Fascin在膀胱癌旁粘膜中無(wú)表達(dá),20例腺性膀胱炎中2例(10%)表達(dá)弱陽(yáng)性,其余表達(dá)陰性;109例膀胱尿路上皮癌中18例(16.5%)表達(dá)陰性,91例(83.5%)表達(dá)陽(yáng)性:其中39例(35.8%)為弱陽(yáng)性,35例(32.1%)為中度陽(yáng)性,17例(15.6%)為強(qiáng)陽(yáng)性。膀胱癌旁粘膜組與腺性膀胱炎組表達(dá)差異無(wú)顯著性(P>0.05),膀胱癌旁粘膜組與膀胱尿路上皮癌組、腺性膀胱炎組與膀胱尿路上皮癌組比較,差異有顯著性(P<0.05),見(jiàn)表1,圖1。

    表1 Fascin在膀胱癌旁粘膜、腺性膀胱炎及膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)Table 1 The expression of fascin in bladder cancer adjacent mucosa,cystitis glandular and bladder urothelial carcinoma

    圖1 Fascin在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)(IHC×200)Fig.1 Negative expression of fascin in bladder urothelial carcinoma(IHC×200)

    Fascin在不同組織學(xué)分級(jí)的膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為:G1:71.4%(20/28),G2:80.0%(36/45),G3:97.2%(35/36),F(xiàn)ascin的表達(dá)陽(yáng)性率在不同的組織學(xué)分級(jí)中,總體有顯著性差異(P<0.05)。不同臨床分期Fascin表達(dá)的陽(yáng)性率為淺表型(Tis~T1)74.6%(47/63),浸潤(rùn)型(T2~T4)95.7%(44/46),F(xiàn)ascin在膀胱尿路上皮癌淺表型(Tis~T1)及浸潤(rùn)型(T2~T4)分組間陽(yáng)性率的差異顯著(P<0.05)。Fascin有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽(yáng)性率為100%(18/18)、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組為80.2%(73/91),其陽(yáng)性率有顯著性差異(P<0.05),見(jiàn)表2。

    表2結(jié)果顯示,在膀胱尿路上皮癌的患者中,F(xiàn)ascin的表達(dá)與性別、腫瘤數(shù)目等臨床病理特征無(wú)關(guān),而與腫瘤臨床分期和組織學(xué)分級(jí)則呈正相關(guān)。隨著膀胱尿路上皮癌的臨床分期和組織學(xué)分級(jí)的增高,腫瘤細(xì)胞中Fascin表達(dá)增強(qiáng),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的Fascin的表達(dá)明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的。

    表2 膀胱尿路上皮癌中Fascin的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Table 2 The relationship between expression of Fascin in bladder urothelial carcinoma and clinical pathological parameters

    3 討論

    Fascin蛋白是細(xì)胞骨架蛋白的一種,分子量為55kD,由Bryan等[3]首先在海膽卵母細(xì)胞胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn),其結(jié)構(gòu)獨(dú)特、進(jìn)化保守,廣泛存在于無(wú)脊椎動(dòng)物與脊椎動(dòng)物之中。Fascin在正常上皮細(xì)胞中不表達(dá)或較低,而在骨骼肌和平滑肌細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等一些特殊的細(xì)胞中高表達(dá)[4]。研究發(fā)現(xiàn)在人體多種上皮來(lái)源的腫瘤細(xì)胞中出現(xiàn)Fascin的表達(dá)上調(diào),并與這些腫瘤的高病理分級(jí)和臨床分期及侵襲轉(zhuǎn)移等相關(guān)[5~8]。因此,在上皮惡性腫瘤中Fascin的表達(dá)上調(diào)是一種普遍現(xiàn)象,與腫瘤的惡性生物學(xué)行為存在一定的關(guān)系。mi-133a和miR-145存在FSCN1mRNA 的靶序列,可直接與FSCN1mRNA結(jié)合,從而抑制FSCN1mRNA和蛋白的表 達(dá)[9]。 實(shí) 驗(yàn) 發(fā) 現(xiàn) 轉(zhuǎn) 染 miR-133a、mi-145 和 si-FSCN1的膀胱癌細(xì)胞活動(dòng)力明顯被抑制,同時(shí)Fascin在侵襲性膀胱癌中的表達(dá)明顯高于非侵襲性膀胱癌。有研究表明Fascin蛋白在正常膀胱黏膜中不表達(dá),在膀胱良性病變?nèi)绨螂籽祝ㄏ傩?、囊性)、?jīng)典的外生性乳頭狀瘤、內(nèi)翻性乳頭狀瘤中表達(dá)無(wú)增加;但在表淺乳頭狀膀胱癌中42%呈片狀或弱彌漫表達(dá)、浸潤(rùn)性膀胱癌95%呈強(qiáng)彌漫分布;并且Fascin表達(dá)增強(qiáng)常常出現(xiàn)在微浸潤(rùn)前沿腫瘤細(xì)胞中;這些均提示Fascin表達(dá)增強(qiáng)與膀胱癌侵襲力增加具有一致性[10,11]。Fascin在膀胱癌的浸潤(rùn)中發(fā)揮著重要作用,F(xiàn)ascin在浸潤(rùn)性尿路上皮癌中的表達(dá)明顯高于非浸潤(rùn)性尿路上皮癌,但對(duì)于腫瘤的組織學(xué)分級(jí)的關(guān)系還需要進(jìn)一步研究。

    本實(shí)驗(yàn)說(shuō)明Fascin的表達(dá)可能對(duì)膀胱癌的侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有一定的促進(jìn)作用,F(xiàn)ascin的高表達(dá)使患者更易出現(xiàn)淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移,膀胱癌分級(jí)越高,患者預(yù)后越差。這與以往Fascin蛋白在上皮性腫瘤組織中的研究結(jié)果一致。

    研究證實(shí)Fascin的過(guò)表達(dá)會(huì)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖周期變短,細(xì)胞膜突起增多,細(xì)胞間連接消失,粘附力下降,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)[12]。綜合分析Fascin在膀胱尿路上皮癌中表達(dá)情況,發(fā)現(xiàn)在組織學(xué)分級(jí)較高的腫瘤中以及腫瘤浸潤(rùn)邊緣細(xì)胞Fascin蛋白染色較強(qiáng),腫瘤分化越低其染色強(qiáng)度越強(qiáng)。同時(shí)可見(jiàn)偽足樣突起的細(xì)胞,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中該腫瘤細(xì)胞數(shù)較多。分析其原因,可能為Fascin表達(dá)使腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞骨架重排,細(xì)胞膜突起增多,使其具有較強(qiáng)的侵襲、轉(zhuǎn)移能力,與高級(jí)別腫瘤更具有侵襲性,更易發(fā)生轉(zhuǎn)移相關(guān)。在試驗(yàn)中,在乳頭狀尿路上皮癌中,分化好的乳頭中央軸心血管染色陽(yáng)性,而緊鄰其膀胱癌細(xì)胞染色陽(yáng)性,但是乳頭邊緣的細(xì)胞卻染色陰性,形成明顯的對(duì)比。分析原因,可能與靠近乳頭軸心的腫瘤細(xì)胞侵襲性較強(qiáng)有關(guān),具體機(jī)制和原因有待進(jìn)一步研究。

    在上皮性來(lái)源的腫瘤中Fascin表達(dá)上調(diào)具有普遍性,但陽(yáng)性表達(dá)率有明顯差異,在乳腺癌中陽(yáng)性率只有16%[12],而在非小細(xì)胞肺癌中陽(yáng)性率為98%[13]。Fascin的高表達(dá)與腫瘤的惡性程度和患者預(yù)后有一定的聯(lián)系,但其調(diào)節(jié)通路還在進(jìn)一步研究中。有觀點(diǎn)認(rèn)為不同組織來(lái)源的腫瘤在發(fā)生機(jī)制上可能存在差異,同一腫瘤也可能受多種途徑調(diào)節(jié),但Fascin表達(dá)與各腫瘤不同的發(fā)生機(jī)制存在或多或少的聯(lián)系。

    4 結(jié)論

    Fascin蛋白在不同臨床分期和組織學(xué)分級(jí)及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌中的陽(yáng)性率存在差異,本研究結(jié)果提示可將其作為預(yù)測(cè)膀胱癌惡性程度及患者預(yù)后的一種指標(biāo)。

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