• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    黑素皮質素受體-4基因rs17782313位點多態(tài)性與長沙地區(qū)漢族人群原發(fā)性高血壓病的相關性研究

    2014-02-27 11:29:48邱玲玲胡中揚楊錫榮
    中國全科醫(yī)學 2014年11期
    關鍵詞:高血壓研究

    邱玲玲,胡中揚,楊錫榮,王 倩,劉 佳,宋 治

    原發(fā)性高血壓病是遺傳易患性與環(huán)境因素共同作用導致的慢性復雜疾病,是心腦血管疾病的獨立危險因素。全球原發(fā)性高血壓病患病率呈上升趨勢,據統(tǒng)計,2000年有26.4%的成人患有高血壓,預計到2025年總患病率將達到29.2%[1]。超重及肥胖是原發(fā)性高血壓病的危險因素已得到廣泛認知,但目前國內外對與肥胖有關的基因與原發(fā)性高血壓病的相關性研究較少。位于黑素皮質素受體 -4基因 (melanocortin-4 receptor gene,MC4R)附近的單核苷酸多態(tài)性 (SNP)位點rs17782313是全基因組關聯(lián)分析 (genome wide association study,GWAS)發(fā)現(xiàn)的肥胖相關基因位點。Loos等[2]通過對16 876例大樣本的薈萃分析發(fā)現(xiàn)該位點與體質量呈正相關。我國學者在對3 077例年齡在6~18歲的樣本研究中發(fā)現(xiàn)肥胖易感位點如脂肪量和肥胖相關基因 (fat mass and associated gene,F(xiàn)TO)與高血壓相關,但尚未發(fā)現(xiàn)MC4R rs17782313位點多態(tài)性與高血壓的關系。有研究認為該位點與導致高血壓發(fā)病的危險因素相關[3]。本研究旨在通過檢測湖南長沙地區(qū)漢族人群與肥胖相關的rs17782313位點多態(tài)性,進而從遺傳學角度探討該位點與長沙地區(qū)漢族人群原發(fā)性高血壓病的相關性。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象 2011年6月—2012年7月選取在中南大學湘雅三醫(yī)院住院的原發(fā)性高血壓病患者及體檢中心體檢健康者共768例,分為高血壓組 (440例)和對照組 (328例)。高血壓組患者間彼此無親緣關系,其中男258例、女182例;平均年齡 (63.2±10.5)歲;均符合1999年世界衛(wèi)生組織/國際高血壓協(xié)會診斷標準[4]:未服降壓藥的情況下收縮壓≥140 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)和/或舒張壓≥90 mm Hg或已確診為高血壓并服用降壓藥。排除繼發(fā)性高血壓、慢性肝腎功能不全、惡性腫瘤、先天性心臟病、風濕性心臟病患者。對照組為無親緣關系的健康個體,其中男193例、女135例;平均年齡 (61.4±10.2)歲。高血壓組和對照組均為長沙地區(qū)漢族人群,并簽署知情同意書。

    1.2 研究方法

    1.2.1 臨床資料及標本采集 收集一般臨床資料〔性別、年齡、體質量、體質指數 (BMI)、收縮壓(SBP)、舒張壓 (DBP)、總膽固醇 (TC)、低密度脂蛋白膽固醇 (LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、三酰甘油 (TG)、尿酸 (UA)、空腹血糖(FBG)〕。受試者禁食12~14 h后,抽取肘靜脈血約5 ml,加入到乙二胺四乙酸二鉀 (EDTA-K2)抗凝試管中,置于-20℃冰箱中儲存待用。

    1.2.2 基因組DNA提取 取儲存的肘靜脈血300 μl經紅細胞裂解液裂解后嚴格按DNA提取試劑盒 (北京鼎國昌盛生物技術公司)說明書提取基因組DNA,并置于-20℃冰箱保存。

    1.2.3 引物設計和合成 聚合酶鏈反應 (PCR)和單堿基延伸反應引物均由AssayDesigner 3.1軟件包設計,由大連寶生物工程有限公司合成。rs17782313 PCR上游引物為:ACGTTGGATGCTTAAATGTCACCTTCCCCC,下游引物為:ACGTTGGATGAGAAGTTTAAAGCAGGAGAG,單堿基延伸反應引物為:AGCTTTTCTTGTCATTTCCATC。

    1.2.4 基因多態(tài)性檢測 采用PCR及飛行時間質譜技術 (MALDI-TOF-MS)對rs17782313位點進行檢測。PCR及MALDI-TOF-MS主要步驟如下:(1)PCR擴增反應:①PCR反應體系為基因組DNA 10 ng,引物0.1 μmol,4 × dNTP 500 μmol,Taq 酶 1 Unit,10 × Taq酶緩沖液0.5 μl,MgCl21.625 mmol。②擴增條件為94℃預變性15 min;94℃變性20 s,56℃退火30 s,72℃延伸60 s,進行45次循環(huán),最后72℃延伸3 min;4℃保存。(2)蝦堿性磷酸酶 (shrimp alkaline phosphatase,SAP)反應:堿性磷酸酶消化PCR擴增后剩余的dNTP及殘留引物。(3)單堿基延伸反應:①反應體系為生化分析型超純水0.619 μl,特異性終止反應物0.2 μl,延伸 反 應 引 物 0.94 μl,iPLEX 緩 沖 液 0.2 μl,iPLEX酶0.041 μl及經純化后的PCR反應產物7 μl,總體積9 μl。②反應條件為94℃預變性30 s;94℃變性5 s,52℃退火5 s,80℃延伸5 s,共進行40次循環(huán),其中52℃退火5 s及80℃延伸5 s進行5次循環(huán),最后72℃延伸3 min;4℃保存。(4)去鹽及上機檢測:將上一步的反應產物加入陽離子交換樹脂完成去鹽,將產物點樣后利用質譜儀進行分析,并使用Mass ARRAY Typer軟件分析基因分型數據。

    1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計處理,計量資料以 ()表示,采用t檢驗;計數資料采用χ2檢驗;數量性狀 (QTL)位點分析采用單因素線性回歸分析;高血壓的危險因素采用多因素Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 高血壓組和對照組臨床資料比較 兩組的年齡、體質量、BMI、SBP、DBP、TC、LDL-C、TG、UA、FBG比較,差異有統(tǒng)計學意義 (P<0.05);兩組的性別構成、HDL-C比較,差異無統(tǒng)計學意義 (P>0.05,見表1)。

    表1 兩組臨床資料比較Table 1 Comparison of clinical data between the two groups

    2.2 rs17782313位點基因型分布及等位基因頻率比較

    經PCR及MALDI-TOF-MS技術能檢測到基因型的樣本高血壓組為435例,對照組為321例,得到rs17782313位點基因型為 CT、CC、TT(見圖1~3)。高血壓組和對照組的基因分布頻率均符合Hardy-Weinberg平衡檢驗(χ2=0.928、1.464,P=0.335、0.226),說明本實驗所選擇的樣本具有群體代表性。高血壓組和對照組基因型分布和等位基因頻率比較,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.05,見表2)。

    圖1 rs17782313位點 CT基因型 MALDI-TOF-MS質譜圖Figure 1 Diagram of MALDI-TOF-MS for genotype CT of rs17782313

    圖2 rs17782313位點 CC基因型MALDI-TOF-MS質譜圖Figure 2 Diagram of MALDI-TOF-MS for genotype CC of rs17782313

    2.3 QTL位點單因素線性回歸分析 以MC4R基因rs17782313位點為自變量,將表1各代謝指標依次作為因變量,分析各代謝指標與rs17782313位點是否存在線性回歸關系,結果發(fā)現(xiàn)僅TC與rs17782313位點存在線性回歸關系,差異有統(tǒng)計學意義 (r=0.08,β=0.101,P=0.032)。

    2.4 高血壓影響因素的多因素Logistic回歸分析 以有無高血壓作為因變量,以性別、超重和肥胖、高脂血癥(分別為高三酰甘油血癥、高膽固醇血癥、高低密度脂蛋白血癥)、C等位基因作為自變量進行Logistic回歸分析,結果發(fā)現(xiàn)超重和肥胖、高三酰甘油血癥、C等位基因是原發(fā)性高血壓病的獨立危險因素 (P<0.05,見表3)。

    圖3 rs17782313位點 TT基因型MALDI-TOF-MS質譜圖Figure 3 Diagram of MALDI-TOF-MS for genotype TT of rs17782313

    表2 兩組基因型和等位基因頻率比較〔n(%)〕Table 2 Comparison of distribution of geneotypes and allele frequencies between the two groups

    表3 高血壓影響因素的多因素Logistic回歸分析Table 3 Multivariate Logistic regression analysis on influencing factors for hypertension

    3 討論

    原發(fā)性高血壓病是多個微效基因遺傳與環(huán)境因素相互作用的復雜疾病。超重和肥胖是原發(fā)性高血壓病的獨立危險因素在國內外早已形成共識,腰臀比 (WHR)、BMI、腰圍 (WC)可預測高血壓的發(fā)生風險[5]。近來研究表明,遺傳因素在原發(fā)性高血壓病的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用[6]。超重和肥胖本身引起的代謝紊亂與動脈硬化存在密切關系,且脂肪組織分泌的脂肪因子如瘦素與高血壓相關[7-8],因此與超重和肥胖相關的基因有可能是引起原發(fā)性高血壓病的候選基因。

    MC4R是Willer等[9]研究發(fā)現(xiàn)的與 BMI、肥胖呈強陽性相關的基因,是能量平衡及飲食攝入的重要調節(jié)因子。rs17782313位點位于MC4R下游188 kb處18q22上。本研究發(fā)現(xiàn),高血壓組CC、CT、TT基因型分布與對照組有明顯差異,且高血壓組C等位基因頻率高于對照組;此外,多因素Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),C等位基因是高血壓的獨立危險因素〔OR(95%CI)=1.444(1.040,2.006),P=0.028〕,提示rs17782313位點攜帶C等位基因者患高血壓的風險是非C等位基因攜帶者的1.444倍。以上說明rs17782313位點多態(tài)性是湖南地區(qū)漢族人群高血壓高發(fā)的重要遺傳危險因素。對于該基因與原發(fā)性高血壓病直接相關還是通過肥胖再導致高血壓的發(fā)生目前尚無定論。

    Timpson等[10]對丹麥白色人種54 244例樣本研究發(fā)現(xiàn),MC4R rs17782313位點多態(tài)性與BMI相關,而與高血壓無直接相關性,每增加10%BMI即可增加3.85 mm Hg SBP和1.79 mm Hg DBP,認為rs17782313位點可能通過BMI這個中間表型間接與高血壓有關。另外,在對我國6~18歲大樣本的研究中也發(fā)現(xiàn),調整BMI后rs17782313位點與高血壓發(fā)病風險的相關性消失,提示該位點可能通過BMI間接與高血壓的易患風險有關[3]。與之相反,本研究結果顯示,rs17782313位點與高血壓發(fā)病直接相關,有可能是由于選擇的研究對象不同造成與上述研究結果不一致。有關學者傾向于認為MC4R與高血壓的發(fā)生有著直接相關關系,并就其可能的內在病理生理機制作了研究。Greenfield等[11]從遺傳學及藥理學角度說明MC4R與高血壓有關,并且通過中樞性黑素皮質信號通路影響高血壓的發(fā)生,這種作用的實現(xiàn)與肥胖所致的高胰島素血癥無關。Sohn等[12]認為MC4R產物黑素皮質素受體-4具有雙向調節(jié)交感神經及副交感神經節(jié)前神經元的作用,從而影響胰島素及血壓的變化。

    在對我國漢族兒童人群的研究中也發(fā)現(xiàn)rs17782313位點與中心性肥胖相關[13]。Dwivedi等[14]研究發(fā)現(xiàn)rs17782313位點在兒童及成年人中均與肥胖相關,但其相關性隨著年齡的增加而減弱。本研究尚未發(fā)現(xiàn)rs17782313位點與BMI或肥胖存在線性回歸關系,與以上結論不一致,但與Vasan等[15]的研究結果一致??赡芘c以下因素有關:(1)與研究對象的選擇有關,本研究的研究對象平均年齡>60歲,屬于老年人群,隨著年齡的增加,容易出現(xiàn)骨質疏松、脊柱變形,因此所測身高與體質量可能存在一定偏差,從而對以BMI為指標界定的肥胖可能造成一定影響;此外,rs17782313位點本身可能與年齡存在相關性,因為隨著年齡的增加環(huán)境因素可能會掩蓋或減弱微效基因作用[14]。(2)不同地區(qū)、不同人群的背景存在差異性。(3)可能與本研究的樣本量,所選擇的統(tǒng)計學方法有關。本研究結果顯示,rs17782313位點與TC存在線性回歸關系,但未發(fā)現(xiàn)與LDL-C相關,與有關學者發(fā)現(xiàn)該位點與TC及LDL-C均相關不同[16]。Cheung等[17]認為 rs17782313 位點與代謝綜合征有相關性。Wilkinson等[18]發(fā)現(xiàn)高膽固醇血癥患者與對照組相比有更高的中心脈壓及更嚴重的動脈硬化程度。綜合以上文獻信息,提示rs17782313位點有可能通過血清TC的變化導致動脈硬化、血管重構,從而間接引起高血壓。

    綜上所述,本研究提示rs17782313位點多態(tài)性與湖南長沙地區(qū)漢族人群原發(fā)性高血壓病相關,從遺傳流行病學角度認為該位點攜帶C等位基因者存在遺傳易患性,但是原發(fā)性高血壓病是多基因遺傳與多環(huán)境因素共同作用的慢性疾病,故高血壓發(fā)病仍存在環(huán)境等因素的作用。由于本研究樣本量較小,結果可能存在一定的局限性。因此,今后應在擴大樣本量的基礎上進一步針對強微效基因之間或微效基因與環(huán)境因素之間交互作用進行研究,以進一步明確原發(fā)性高血壓病的發(fā)病機制。

    1 Kearney PM,Whelton M,Reynolds K,et al.Global burden of hypertension:analysis of worldwide data [J]. Lancet, 2005,365(9455):217-223.

    2 Loos RJ,Lindgren CM,Li S,et al.Common variants near MC4R are associated with fat mass,weight and risk of obesity [J].Nat Genet,2008,40(6):768-775.

    3 Xi B,Zhao X,Shen Y,et al.Associations of obesity susceptibility loci with hypertension in Chinese children[J].Int J Obes(Lond),2013,37(7):926-930.

    4 中國高血壓防治指南起草委員會.中國高血壓防治指南[J].高血壓雜志,2000,8(1):99.

    5 Feldstein CA,Akopian M,Olivieri AO,et al.A comparison of body mass index and waist-to-h(huán)ip ratio as indicators of hypertension risk in an urban Argentine population:a hospital- based study[J].Nutr Metab Cardiovasc Dis,2005,15(4):310 -315.

    6 Yamamoto H,Okuzaki D,Yamanishi K,et al.Genetic analysis of genes causing hypertension and stroke in spontaneously hypertensive rats[J].Int J Mol Med,2013,31(5):1057 -1065.

    7 Segal-Lieberman G,Rosenthal T.Animal models in obesity and hypertension[J].Curr Hypertens Rep,2013,15(3):190 -195.

    8 Allison MA,Ix JH,Morgan C,et al.Higher leptin is associated with hypertension:the Multi-Ethnic Study of Atherosclerosis[J].J Hum Hypertens,2013,27(10):617 -622.

    9 Willer CJ,Speliotes EK,Loos RJ,et al.Six new loci associated with body mass index highlight a neuronal influence on body weight regulation[J].Nat Genet,2009,41(1):25 -34.

    10 Timpson NJ,Harbord R,Davey Smith G,et al.Does greater adiposity increase blood pressure and hypertension risk?Mendelian randomization using the FTO/MC4R genotype[J].Hypertension,2009,54(1):84-90.

    11 Greenfield JR,Miller JW,Keogh JM,et al.Modulation of blood pressure by central melanocortinergic pathways[J].N Engl J Med,2009,360(1):44-52.

    12 Sohn JW,Harris LE,Berglund ED,et al.Melanocortin 4 receptors reciprocally regulate sympathetic and parasympathetic preganglionic neurons[J].Cell,2013,152(3):612 -619.

    13 Xi B,Cheng H,Shen Y,et al.Study of 11 BMI-associated loci identified in GWAS for associations with central obesity in the Chinese children[J].PLoS One,2013,8(2):e56472.

    14 Dwivedi OP,Tabassum R,Chauhan G,et al.Strong influence of variants near MC4R on adiposity in children and adults:a cross-sectional study in Indian population[J].J Hum Genet,2013,58(1):27-32.

    15 Vasan SK,F(xiàn)all T,Neville MJ,et al.Associations of variants in FTO and near MC4R with obesity traits in South Asian Indians[J].Obesity(Silver Spring),2012,20(11):2268-2277.

    16 Tao L,Zhang Z,Chen Z,et al.A Common variant near the melanocortin 4 receptor is associated with low-density lipoprotein cholesterol and total cholesterol in the Chinese Han population[J].Mol Biol Rep,2012,39(6):6487 -6493.

    17 Cheung CY,Tso AW,Cheung BM,et al.Genetic variants associated with persistent central obesity and the metabolic syndrome in a 12-year longitudinal study[J].Eur J Endocrinol,2011,164(3):381-388.

    18 Wilkinson IB,Prasad K,Hall IR,et al.Increased central pulse pressure and augmentation index in subjects with hypercholesterolemia[J].J Am Coll Cardiol,2002,39(6):1005 -1011.

    猜你喜歡
    高血壓研究
    FMS與YBT相關性的實證研究
    全國高血壓日
    高血壓用藥小知識
    中老年保健(2021年5期)2021-08-24 07:07:16
    2020年國內翻譯研究述評
    遼代千人邑研究述論
    這些高血壓的治療誤區(qū)你知道嗎
    視錯覺在平面設計中的應用與研究
    科技傳播(2019年22期)2020-01-14 03:06:54
    EMA伺服控制系統(tǒng)研究
    如何把高血壓“吃”回去?
    高血壓,并非一降了之
    午夜老司机福利剧场| 日本黄色片子视频| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲成人久久爱视频| 免费看日本二区| 久久久久精品国产欧美久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 99精品在免费线老司机午夜| 成人美女网站在线观看视频| 少妇的逼水好多| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 免费av毛片视频| av在线观看视频网站免费| 丁香欧美五月| 久久久久久久久大av| 有码 亚洲区| 欧美一区二区亚洲| 一个人观看的视频www高清免费观看| 中亚洲国语对白在线视频| 亚洲欧美日韩高清专用| 美女 人体艺术 gogo| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲av不卡在线观看| 国产在视频线在精品| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲,欧美,日韩| 小说图片视频综合网站| 久久热精品热| 一级a爱片免费观看的视频| 免费av毛片视频| 午夜福利免费观看在线| 一个人免费在线观看电影| 男女下面进入的视频免费午夜| 无遮挡黄片免费观看| av天堂中文字幕网| 欧美日韩黄片免| 午夜福利在线在线| 五月伊人婷婷丁香| 久久亚洲精品不卡| 宅男免费午夜| 国产精品一区二区三区四区久久| 我要看日韩黄色一级片| 久9热在线精品视频| 国产成人a区在线观看| 一区二区三区激情视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 好男人在线观看高清免费视频| 国产在线精品亚洲第一网站| 免费在线观看影片大全网站| 深夜精品福利| 国产成人av教育| a级一级毛片免费在线观看| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品一区二区三区四区久久| 午夜激情福利司机影院| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产高清激情床上av| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 免费av不卡在线播放| 日本 av在线| 老鸭窝网址在线观看| 内地一区二区视频在线| 日本黄大片高清| 精品午夜福利在线看| 亚洲最大成人手机在线| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲 国产 在线| 婷婷色综合大香蕉| 男人舔女人下体高潮全视频| 五月伊人婷婷丁香| av国产免费在线观看| 国产不卡一卡二| АⅤ资源中文在线天堂| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲七黄色美女视频| 在现免费观看毛片| 一进一出抽搐动态| 精品日产1卡2卡| 午夜精品一区二区三区免费看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日本黄色视频三级网站网址| 国产三级在线视频| 国产精品免费一区二区三区在线| av在线天堂中文字幕| 午夜老司机福利剧场| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 午夜久久久久精精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国内精品一区二区在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 精品人妻视频免费看| 我的女老师完整版在线观看| 国产精品三级大全| 天天躁日日操中文字幕| 国产成人aa在线观看| 国产成人啪精品午夜网站| 国产精品野战在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 国产高清激情床上av| 国产精品爽爽va在线观看网站| 一边摸一边抽搐一进一小说| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产 一区 欧美 日韩| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日本免费一区二区三区高清不卡| 一区福利在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| 中国美女看黄片| 国产日本99.免费观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 中文资源天堂在线| 亚洲中文字幕日韩| 久久国产乱子免费精品| 免费高清视频大片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 午夜激情福利司机影院| 真实男女啪啪啪动态图| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 麻豆久久精品国产亚洲av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩高清综合在线| 色视频www国产| 国产精品久久电影中文字幕| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 国产午夜精品论理片| 日本熟妇午夜| 日韩免费av在线播放| 国产精品,欧美在线| 精品免费久久久久久久清纯| 一进一出抽搐动态| 国产 一区 欧美 日韩| 一个人看视频在线观看www免费| 99视频精品全部免费 在线| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲18禁久久av| 日韩av在线大香蕉| 免费在线观看成人毛片| 欧美最黄视频在线播放免费| av福利片在线观看| 久久国产乱子免费精品| 露出奶头的视频| 国产欧美日韩一区二区精品| 亚洲不卡免费看| 特级一级黄色大片| ponron亚洲| 久久久久久久久久黄片| 亚洲黑人精品在线| 欧美色欧美亚洲另类二区| 日韩大尺度精品在线看网址| 欧美最新免费一区二区三区 | 变态另类丝袜制服| 97热精品久久久久久| 成人鲁丝片一二三区免费| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲第一区二区三区不卡| 午夜a级毛片| 国产高清有码在线观看视频| 99热6这里只有精品| 99热这里只有是精品50| 黄色日韩在线| 亚洲精品成人久久久久久| 国产精品女同一区二区软件 | 午夜激情福利司机影院| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲专区国产一区二区| 搡老岳熟女国产| 嫩草影院精品99| 简卡轻食公司| 精品久久久久久久久久免费视频| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 深夜a级毛片| 我要看日韩黄色一级片| 精品人妻熟女av久视频| 国产成人a区在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 草草在线视频免费看| 欧美一区二区亚洲| 国产美女午夜福利| 国产高清三级在线| av天堂中文字幕网| 国产高清激情床上av| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 首页视频小说图片口味搜索| 赤兔流量卡办理| 三级国产精品欧美在线观看| 香蕉av资源在线| 免费搜索国产男女视频| 特大巨黑吊av在线直播| 国产伦一二天堂av在线观看| 午夜免费成人在线视频| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲最大成人手机在线| 真实男女啪啪啪动态图| 久久精品91蜜桃| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 一本久久中文字幕| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 波野结衣二区三区在线| 亚洲片人在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国语自产精品视频在线第100页| 3wmmmm亚洲av在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6 | 18美女黄网站色大片免费观看| 校园春色视频在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 丁香欧美五月| а√天堂www在线а√下载| 国产精品久久久久久久久免 | 国产不卡一卡二| 一区二区三区四区激情视频 | 中文字幕av在线有码专区| 国产精品一区二区性色av| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人午夜高清在线视频| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 免费看a级黄色片| 极品教师在线免费播放| 色视频www国产| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲欧美日韩无卡精品| 天美传媒精品一区二区| 桃色一区二区三区在线观看| 人人妻人人看人人澡| 在线观看av片永久免费下载| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧美黑人巨大hd| 色综合欧美亚洲国产小说| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产不卡一卡二| 精品免费久久久久久久清纯| 成年女人毛片免费观看观看9| 少妇熟女aⅴ在线视频| 精品久久久久久,| 深爱激情五月婷婷| 一a级毛片在线观看| 欧美性猛交黑人性爽| bbb黄色大片| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产男靠女视频免费网站| 制服丝袜大香蕉在线| 免费看日本二区| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 91久久精品电影网| 国产精品三级大全| x7x7x7水蜜桃| 一个人看视频在线观看www免费| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲av熟女| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲综合色惰| 亚洲成av人片免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩精品青青久久久久久| 亚洲av电影在线进入| 国产成人欧美在线观看| 免费看光身美女| 一进一出好大好爽视频| 毛片女人毛片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 久久精品人妻少妇| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产成人欧美在线观看| 成人国产综合亚洲| 国产免费av片在线观看野外av| 俺也久久电影网| 国产色婷婷99| 亚洲专区中文字幕在线| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产熟女xx| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 午夜福利在线在线| 亚洲人与动物交配视频| 三级国产精品欧美在线观看| 毛片女人毛片| 精品国产亚洲在线| 午夜老司机福利剧场| 亚洲最大成人中文| 免费观看人在逋| 赤兔流量卡办理| 国产精品一区二区三区四区久久| 九色国产91popny在线| 在线观看一区二区三区| 欧美极品一区二区三区四区| 成人三级黄色视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 99在线人妻在线中文字幕| 国产av一区在线观看免费| av天堂在线播放| 简卡轻食公司| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产亚洲精品久久久com| 看十八女毛片水多多多| 99国产精品一区二区蜜桃av| 亚洲国产精品合色在线| 国产高清有码在线观看视频| 国内精品一区二区在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| a级毛片a级免费在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲熟妇熟女久久| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲精品色激情综合| 久久久久精品国产欧美久久久| 欧美bdsm另类| 人妻久久中文字幕网| 日本五十路高清| 国产高清有码在线观看视频| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 日本免费一区二区三区高清不卡| 观看美女的网站| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲av二区三区四区| 亚洲av美国av| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 十八禁网站免费在线| 午夜激情福利司机影院| 动漫黄色视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 婷婷精品国产亚洲av| 亚洲无线在线观看| 国产精品永久免费网站| 欧美在线黄色| 首页视频小说图片口味搜索| 不卡一级毛片| 嫩草影院入口| 欧美日韩综合久久久久久 | 毛片女人毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜福利在线观看吧| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 日韩精品青青久久久久久| av女优亚洲男人天堂| 精品国产亚洲在线| 最近在线观看免费完整版| 国产精品久久久久久久电影| 成年人黄色毛片网站| 一区二区三区激情视频| 一本一本综合久久| 国产精品综合久久久久久久免费| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产乱人视频| 免费在线观看亚洲国产| 亚洲自拍偷在线| 美女高潮的动态| 亚洲乱码一区二区免费版| 午夜激情福利司机影院| 亚洲真实伦在线观看| 亚洲欧美激情综合另类| 日韩欧美精品v在线| 日本黄色片子视频| 亚洲精品成人久久久久久| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| avwww免费| 亚洲男人的天堂狠狠| 少妇丰满av| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产野战对白在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 色在线成人网| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 色av中文字幕| 男女下面进入的视频免费午夜| 欧美极品一区二区三区四区| 亚洲片人在线观看| 国产大屁股一区二区在线视频| 我的女老师完整版在线观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 99热只有精品国产| 脱女人内裤的视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| or卡值多少钱| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 欧美最新免费一区二区三区 | 人妻制服诱惑在线中文字幕| 69av精品久久久久久| 黄色配什么色好看| 亚洲精品影视一区二区三区av| 国产精品1区2区在线观看.| 毛片一级片免费看久久久久 | 国产高潮美女av| 欧美色视频一区免费| 成人av一区二区三区在线看| 热99re8久久精品国产| 此物有八面人人有两片| 女人被狂操c到高潮| 亚洲欧美日韩无卡精品| 国产人妻一区二区三区在| 波野结衣二区三区在线| 国产真实乱freesex| 91狼人影院| 免费高清视频大片| 国产久久久一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 我要搜黄色片| 亚洲av成人精品一区久久| 午夜影院日韩av| 给我免费播放毛片高清在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美精品国产亚洲| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产av在哪里看| 国产精华一区二区三区| 伊人久久精品亚洲午夜| 九色成人免费人妻av| 亚洲不卡免费看| 日本与韩国留学比较| 久久九九热精品免费| 亚洲最大成人中文| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产野战对白在线观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 少妇高潮的动态图| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 国产高清三级在线| 久久这里只有精品中国| 老司机午夜十八禁免费视频| 精品国产亚洲在线| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲av日韩精品久久久久久密| av在线老鸭窝| 国产主播在线观看一区二区| 色视频www国产| 国产三级中文精品| 男人和女人高潮做爰伦理| 婷婷精品国产亚洲av| 天美传媒精品一区二区| 色综合婷婷激情| АⅤ资源中文在线天堂| 午夜久久久久精精品| 亚洲片人在线观看| 亚洲av不卡在线观看| 国产精品一区二区性色av| 97超视频在线观看视频| 国产精品伦人一区二区| 日韩欧美国产一区二区入口| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲av熟女| 日韩欧美在线乱码| 长腿黑丝高跟| 久久国产精品人妻蜜桃| 99久久精品热视频| 午夜福利成人在线免费观看| 色在线成人网| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产爱豆传媒在线观看| 久久九九热精品免费| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美在线一区亚洲| 国产精品99久久久久久久久| 九九热线精品视视频播放| 日日夜夜操网爽| 亚洲18禁久久av| 久久人妻av系列| 丰满的人妻完整版| 欧美国产日韩亚洲一区| 午夜福利欧美成人| 在线免费观看不下载黄p国产 | 此物有八面人人有两片| 麻豆成人午夜福利视频| 久久精品91蜜桃| 十八禁人妻一区二区| 黄色日韩在线| 日本 欧美在线| 亚洲经典国产精华液单 | 老熟妇乱子伦视频在线观看| 日韩欧美免费精品| 国产熟女xx| 黄色视频,在线免费观看| 午夜视频国产福利| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲在线观看片| 国产精品一区二区三区四区久久| 真实男女啪啪啪动态图| 亚洲激情在线av| 直男gayav资源| 国产一区二区在线观看日韩| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 亚洲乱码一区二区免费版| 99久久精品国产亚洲精品| 久久久久亚洲av毛片大全| 热99re8久久精品国产| 国产乱人视频| 亚洲人与动物交配视频| 日韩免费av在线播放| 精品人妻熟女av久视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 两个人的视频大全免费| 一级作爱视频免费观看| 欧美日韩黄片免| 99riav亚洲国产免费| 欧美日韩综合久久久久久 | 十八禁网站免费在线| 午夜精品一区二区三区免费看| 五月玫瑰六月丁香| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 五月玫瑰六月丁香| 日韩大尺度精品在线看网址| 免费高清视频大片| 99热精品在线国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 欧美潮喷喷水| 国产三级黄色录像| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产一区二区在线av高清观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲精品粉嫩美女一区| 少妇的逼水好多| 一个人免费在线观看的高清视频| 9191精品国产免费久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 91九色精品人成在线观看| 听说在线观看完整版免费高清| 在线播放无遮挡| 免费观看人在逋| 黄色一级大片看看| 久久亚洲真实| 精品不卡国产一区二区三区| 亚洲欧美清纯卡通| 三级国产精品欧美在线观看| 国产真实乱freesex| 91午夜精品亚洲一区二区三区 | 91麻豆av在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 色视频www国产| 久久精品人妻少妇| 精品无人区乱码1区二区| 免费看a级黄色片| 中出人妻视频一区二区| 亚洲国产精品sss在线观看| 99久国产av精品| 亚洲美女视频黄频| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 深夜精品福利| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲一区二区三区不卡视频| 观看美女的网站| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 免费搜索国产男女视频| av天堂中文字幕网| 久久久久九九精品影院| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一级作爱视频免费观看| ponron亚洲| 99热6这里只有精品| 亚洲自拍偷在线| 亚洲人成网站在线播| 日本精品一区二区三区蜜桃| 国内精品一区二区在线观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 他把我摸到了高潮在线观看| 色5月婷婷丁香| 欧美乱妇无乱码| 一a级毛片在线观看| 中文字幕高清在线视频| 午夜免费激情av| 88av欧美| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 亚洲人与动物交配视频| 久久精品国产清高在天天线| 久久久久久久久久成人| 国产真实乱freesex| 国产不卡一卡二| 亚洲三级黄色毛片| 夜夜爽天天搞| 日韩免费av在线播放| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 90打野战视频偷拍视频| 日本黄色视频三级网站网址| 精品日产1卡2卡| a级毛片a级免费在线| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 色av中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲第一区二区三区不卡| 成熟少妇高潮喷水视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 精品国产亚洲在线| 中文字幕免费在线视频6| 中文字幕熟女人妻在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 日韩欧美在线二视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图 | 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲熟妇熟女久久| 国产老妇女一区| 欧美中文日本在线观看视频| 一进一出好大好爽视频| 脱女人内裤的视频| 在线观看美女被高潮喷水网站 | 欧美bdsm另类| 一本精品99久久精品77| 变态另类丝袜制服|