酪蛋白對雙羧基1，8—萘酰亞胺熒光探針聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)的光譜研究及分析應(yīng)用

劉振　孫洋

摘要：建立高效快速、操作簡便、價格低廉的乳品真蛋白檢測方法具有重要意義。本實驗合成了具有雙羧基官能團的水溶性1，8萘酰亞胺熒光探針2，探針2對酪蛋白具有特異性發(fā)光效應(yīng)，其機理是雙羧基為前導(dǎo)嵌入基團插入酪蛋白膠團子域的疏水腔中，與色氨酸、酪氨酸等氨基酸殘基以氫鍵及疏水作用相結(jié)合后使酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)收縮，萘酰亞胺熒光基元吸附于酪蛋白膠團表面呈現(xiàn)聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng) （Aggregation induced emission， AIE）。以300 nm為激發(fā)波長，一定范圍內(nèi)探針2在480 nm附近處發(fā)光強度與酪蛋白濃度成正比，在pH 5.5條件下建立了酪蛋白AIE定量分析方法；線性范圍為0.1～9.5 mg/L，檢出限 （3σ）為2.9 mg/L，對不同濃度酪蛋白平行測定9次，相對標準偏差<3%；三聚氰胺、銨肥、尿素、乳清蛋白、血清蛋白、I型膠原蛋白及粗卵清蛋白等對于測定結(jié)果無顯著影響（±5%），用于奶粉中總酪蛋白含量的測定結(jié)果與雙縮脲法相一致。

關(guān)鍵詞：1，8萘酰亞胺； 雙羧基； 酪蛋白； 聚集誘導(dǎo)發(fā)光

1引言

乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白（包括乳白蛋白和乳球蛋白）及少量脂肪球膜蛋白，上述蛋白構(gòu)成了乳中的“真蛋白”[1]。酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白量的80%，主要以膠團形式存在。酪蛋白是以磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、 αs2酪蛋白、 β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。由于國標中乳品蛋白質(zhì)檢測方法的缺陷，出現(xiàn)摻加尿素、 銨肥、 三聚氰胺等氮含量高的有機物來提高“蛋白質(zhì)含量”的違法行為，嚴重制約了我國乳制品的質(zhì)量提升，影響了消費者的健康。目前現(xiàn)行的乳品中蛋白質(zhì)的檢測方法[3]會受脂肪及碳水化合物等因素干擾，尤其該法對水解蛋白及動物蛋白等劣質(zhì)蛋白具有相似的響應(yīng)作用，同樣為不法分子摻加劣質(zhì)蛋白以提高蛋白質(zhì)含量提供可乘之機。為此亟需建立適應(yīng)新?lián)郊偾闆r的快速、 高效的真蛋白檢測方法。

目前， 酪蛋白檢測方法有凱氏定氮法[4]、 雙縮脲法[5]、 四階導(dǎo)數(shù)分光光度法[6]、 液質(zhì)聯(lián)用法[7]、 ELISA法[8]、 電泳法[9]、 蛋白質(zhì)免疫印跡[10]、 反相色譜[11]、芯片[12]及熒光探針法[13]。但這些方法都具有不同程度的局限性，如靈敏度和選擇性較差、檢測儀器價格昂貴、操作過程復(fù)雜等。近來，Wang等[13]報道了基于BSPOTPE探針對酪蛋白膠團微環(huán)境極性的改變產(chǎn)生聚集誘導(dǎo)發(fā)光現(xiàn)象 （Aggregation induced emission， AIE），并建立了酪蛋白的檢測方法，但探針只影響酪蛋白微環(huán)境的極性，并未與酪蛋白膠團發(fā)生結(jié)合作用。

本課題組報道了1，8萘酰亞胺類熒光探針與酪蛋白相互作用后的AIE特性[14～16]。本實驗合成了新型雙羧基水溶性1，8萘酰亞胺類熒光探針2，研究了酪蛋白對探針2的聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)的機理，根據(jù)探針2對酪蛋白特異性的識別作用，建立了酪蛋白檢測新方法并應(yīng)用于實際奶粉中總酪蛋白含量的測定。本方法具有快速高效等特點，為乳品質(zhì)量安全監(jiān)測提供了重要信息。

2實驗部分

2.1儀器和試劑

2.3光譜測定

以280 nm為激發(fā)波長，300～400 nm范圍內(nèi)測定酪蛋白內(nèi)源熒光發(fā)射光譜；以300 nm為激發(fā)波長，在440～600 nm范圍內(nèi)測定探針2與酪蛋白體系發(fā)射光譜，入射和出射狹縫帶寬均為5 nm。

3結(jié)果與討論

3.1探針2與酪蛋白聚集誘導(dǎo)發(fā)光機理

酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白含量的80%，主要以膠團狀態(tài)存在于乳品中，它是以含磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、αs2酪蛋白、β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。其中αs1酪蛋白和αs2酪蛋白含有4個色氨酸殘基， 包括Trp164， 199， 109和193； 而β酪蛋白和κ酪蛋白各自含有1個色氨酸殘基， 分別為Trp143和176。除此之外， 酪蛋白還含有大量疏水性的酪氨酸殘基。色氨酸和酪氨酸殘基位于位于酪蛋白疏水腔第一和第二子域之間，對于酪蛋白膠團的自組裝具有重要作用，同時也是酪蛋白在350 nm附近內(nèi)源性熒光的主要體現(xiàn)基團[17]。作者設(shè)想探針2的雙羧基作為前導(dǎo)嵌入式基團插入酪蛋白疏水腔中，與色氨酸和酪氨酸殘基以非共價鍵作用，如疏水、氫鍵作用等相結(jié)合，導(dǎo)致未結(jié)合的氨基酸殘基包埋在疏水腔中，使得酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)更加緊實；而1，8萘酰亞胺熒光基元則吸附于膠團表面導(dǎo)致探針分子的聚集，引起聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)[18]。

以300 nm為激發(fā)波長，考察了酪蛋白對探針2熒光光譜的影響（pH 7.4），如圖2A所示，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2在480 nm附近呈現(xiàn)顯著的熒光增強并伴隨最大發(fā)射峰藍移；圖2B為濃度為0～5.0 g/L的酪蛋白對探針2顏色的影響，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2的發(fā)光效應(yīng)逐漸增強；結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，形成新的發(fā)光復(fù)合物，并且復(fù)合物的疏水性隨著酪蛋白濃度的增加而逐漸增大。

為了研究酪蛋白與探針2的熒光增強機理，考察了不同濃度探針2對酪蛋白熒光及吸收光譜的影響（pH 7.4），酪蛋白的內(nèi)源性熒光主要由色氨酸和酪氨酸體現(xiàn)，如圖3A所示，當激發(fā)波長為280 nm時，酪蛋白在350 nm附近呈現(xiàn)特征熒光峰，探針2在395 nm處呈微弱熒光，隨著探針2濃度的增加，酪蛋白熒光被逐漸猝滅并伴隨顯著的藍移；同時在475 nm附近出現(xiàn)新的發(fā)射峰，且光強逐漸增大，發(fā)射峰向短波長方向移動。結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，酪蛋白中的色氨酸和酪氨酸殘基發(fā)色團的疏水性增加，包埋進疏水腔中；而450 nm附近新峰的出現(xiàn)表明形成了探針2酪蛋白復(fù)合物，且復(fù)合物的疏水性隨著探針2濃度的增加而逐漸增大。此外在400 nm處出現(xiàn)的等吸收點表明酪蛋白從游離態(tài)向探針2的結(jié)合態(tài)轉(zhuǎn)變。

摘要：建立高效快速、操作簡便、價格低廉的乳品真蛋白檢測方法具有重要意義。本實驗合成了具有雙羧基官能團的水溶性1，8萘酰亞胺熒光探針2，探針2對酪蛋白具有特異性發(fā)光效應(yīng)，其機理是雙羧基為前導(dǎo)嵌入基團插入酪蛋白膠團子域的疏水腔中，與色氨酸、酪氨酸等氨基酸殘基以氫鍵及疏水作用相結(jié)合后使酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)收縮，萘酰亞胺熒光基元吸附于酪蛋白膠團表面呈現(xiàn)聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng) （Aggregation induced emission， AIE）。以300 nm為激發(fā)波長，一定范圍內(nèi)探針2在480 nm附近處發(fā)光強度與酪蛋白濃度成正比，在pH 5.5條件下建立了酪蛋白AIE定量分析方法；線性范圍為0.1～9.5 mg/L，檢出限 （3σ）為2.9 mg/L，對不同濃度酪蛋白平行測定9次，相對標準偏差<3%；三聚氰胺、銨肥、尿素、乳清蛋白、血清蛋白、I型膠原蛋白及粗卵清蛋白等對于測定結(jié)果無顯著影響（±5%），用于奶粉中總酪蛋白含量的測定結(jié)果與雙縮脲法相一致。

關(guān)鍵詞：1，8萘酰亞胺； 雙羧基； 酪蛋白； 聚集誘導(dǎo)發(fā)光

1引言

乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白（包括乳白蛋白和乳球蛋白）及少量脂肪球膜蛋白，上述蛋白構(gòu)成了乳中的“真蛋白”[1]。酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白量的80%，主要以膠團形式存在。酪蛋白是以磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、 αs2酪蛋白、 β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。由于國標中乳品蛋白質(zhì)檢測方法的缺陷，出現(xiàn)摻加尿素、 銨肥、 三聚氰胺等氮含量高的有機物來提高“蛋白質(zhì)含量”的違法行為，嚴重制約了我國乳制品的質(zhì)量提升，影響了消費者的健康。目前現(xiàn)行的乳品中蛋白質(zhì)的檢測方法[3]會受脂肪及碳水化合物等因素干擾，尤其該法對水解蛋白及動物蛋白等劣質(zhì)蛋白具有相似的響應(yīng)作用，同樣為不法分子摻加劣質(zhì)蛋白以提高蛋白質(zhì)含量提供可乘之機。為此亟需建立適應(yīng)新?lián)郊偾闆r的快速、 高效的真蛋白檢測方法。

目前， 酪蛋白檢測方法有凱氏定氮法[4]、 雙縮脲法[5]、 四階導(dǎo)數(shù)分光光度法[6]、 液質(zhì)聯(lián)用法[7]、 ELISA法[8]、 電泳法[9]、 蛋白質(zhì)免疫印跡[10]、 反相色譜[11]、芯片[12]及熒光探針法[13]。但這些方法都具有不同程度的局限性，如靈敏度和選擇性較差、檢測儀器價格昂貴、操作過程復(fù)雜等。近來，Wang等[13]報道了基于BSPOTPE探針對酪蛋白膠團微環(huán)境極性的改變產(chǎn)生聚集誘導(dǎo)發(fā)光現(xiàn)象 （Aggregation induced emission， AIE），并建立了酪蛋白的檢測方法，但探針只影響酪蛋白微環(huán)境的極性，并未與酪蛋白膠團發(fā)生結(jié)合作用。

本課題組報道了1，8萘酰亞胺類熒光探針與酪蛋白相互作用后的AIE特性[14～16]。本實驗合成了新型雙羧基水溶性1，8萘酰亞胺類熒光探針2，研究了酪蛋白對探針2的聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)的機理，根據(jù)探針2對酪蛋白特異性的識別作用，建立了酪蛋白檢測新方法并應(yīng)用于實際奶粉中總酪蛋白含量的測定。本方法具有快速高效等特點，為乳品質(zhì)量安全監(jiān)測提供了重要信息。

2實驗部分

2.1儀器和試劑

2.3光譜測定

以280 nm為激發(fā)波長，300～400 nm范圍內(nèi)測定酪蛋白內(nèi)源熒光發(fā)射光譜；以300 nm為激發(fā)波長，在440～600 nm范圍內(nèi)測定探針2與酪蛋白體系發(fā)射光譜，入射和出射狹縫帶寬均為5 nm。

3結(jié)果與討論

3.1探針2與酪蛋白聚集誘導(dǎo)發(fā)光機理

酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白含量的80%，主要以膠團狀態(tài)存在于乳品中，它是以含磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、αs2酪蛋白、β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。其中αs1酪蛋白和αs2酪蛋白含有4個色氨酸殘基， 包括Trp164， 199， 109和193； 而β酪蛋白和κ酪蛋白各自含有1個色氨酸殘基， 分別為Trp143和176。除此之外， 酪蛋白還含有大量疏水性的酪氨酸殘基。色氨酸和酪氨酸殘基位于位于酪蛋白疏水腔第一和第二子域之間，對于酪蛋白膠團的自組裝具有重要作用，同時也是酪蛋白在350 nm附近內(nèi)源性熒光的主要體現(xiàn)基團[17]。作者設(shè)想探針2的雙羧基作為前導(dǎo)嵌入式基團插入酪蛋白疏水腔中，與色氨酸和酪氨酸殘基以非共價鍵作用，如疏水、氫鍵作用等相結(jié)合，導(dǎo)致未結(jié)合的氨基酸殘基包埋在疏水腔中，使得酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)更加緊實；而1，8萘酰亞胺熒光基元則吸附于膠團表面導(dǎo)致探針分子的聚集，引起聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)[18]。

以300 nm為激發(fā)波長，考察了酪蛋白對探針2熒光光譜的影響（pH 7.4），如圖2A所示，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2在480 nm附近呈現(xiàn)顯著的熒光增強并伴隨最大發(fā)射峰藍移；圖2B為濃度為0～5.0 g/L的酪蛋白對探針2顏色的影響，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2的發(fā)光效應(yīng)逐漸增強；結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，形成新的發(fā)光復(fù)合物，并且復(fù)合物的疏水性隨著酪蛋白濃度的增加而逐漸增大。

為了研究酪蛋白與探針2的熒光增強機理，考察了不同濃度探針2對酪蛋白熒光及吸收光譜的影響（pH 7.4），酪蛋白的內(nèi)源性熒光主要由色氨酸和酪氨酸體現(xiàn)，如圖3A所示，當激發(fā)波長為280 nm時，酪蛋白在350 nm附近呈現(xiàn)特征熒光峰，探針2在395 nm處呈微弱熒光，隨著探針2濃度的增加，酪蛋白熒光被逐漸猝滅并伴隨顯著的藍移；同時在475 nm附近出現(xiàn)新的發(fā)射峰，且光強逐漸增大，發(fā)射峰向短波長方向移動。結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，酪蛋白中的色氨酸和酪氨酸殘基發(fā)色團的疏水性增加，包埋進疏水腔中；而450 nm附近新峰的出現(xiàn)表明形成了探針2酪蛋白復(fù)合物，且復(fù)合物的疏水性隨著探針2濃度的增加而逐漸增大。此外在400 nm處出現(xiàn)的等吸收點表明酪蛋白從游離態(tài)向探針2的結(jié)合態(tài)轉(zhuǎn)變。

摘要：建立高效快速、操作簡便、價格低廉的乳品真蛋白檢測方法具有重要意義。本實驗合成了具有雙羧基官能團的水溶性1，8萘酰亞胺熒光探針2，探針2對酪蛋白具有特異性發(fā)光效應(yīng)，其機理是雙羧基為前導(dǎo)嵌入基團插入酪蛋白膠團子域的疏水腔中，與色氨酸、酪氨酸等氨基酸殘基以氫鍵及疏水作用相結(jié)合后使酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)收縮，萘酰亞胺熒光基元吸附于酪蛋白膠團表面呈現(xiàn)聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng) （Aggregation induced emission， AIE）。以300 nm為激發(fā)波長，一定范圍內(nèi)探針2在480 nm附近處發(fā)光強度與酪蛋白濃度成正比，在pH 5.5條件下建立了酪蛋白AIE定量分析方法；線性范圍為0.1～9.5 mg/L，檢出限 （3σ）為2.9 mg/L，對不同濃度酪蛋白平行測定9次，相對標準偏差<3%；三聚氰胺、銨肥、尿素、乳清蛋白、血清蛋白、I型膠原蛋白及粗卵清蛋白等對于測定結(jié)果無顯著影響（±5%），用于奶粉中總酪蛋白含量的測定結(jié)果與雙縮脲法相一致。

關(guān)鍵詞：1，8萘酰亞胺； 雙羧基； 酪蛋白； 聚集誘導(dǎo)發(fā)光

1引言

乳蛋白包括酪蛋白、乳清蛋白（包括乳白蛋白和乳球蛋白）及少量脂肪球膜蛋白，上述蛋白構(gòu)成了乳中的“真蛋白”[1]。酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白量的80%，主要以膠團形式存在。酪蛋白是以磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、 αs2酪蛋白、 β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。由于國標中乳品蛋白質(zhì)檢測方法的缺陷，出現(xiàn)摻加尿素、 銨肥、 三聚氰胺等氮含量高的有機物來提高“蛋白質(zhì)含量”的違法行為，嚴重制約了我國乳制品的質(zhì)量提升，影響了消費者的健康。目前現(xiàn)行的乳品中蛋白質(zhì)的檢測方法[3]會受脂肪及碳水化合物等因素干擾，尤其該法對水解蛋白及動物蛋白等劣質(zhì)蛋白具有相似的響應(yīng)作用，同樣為不法分子摻加劣質(zhì)蛋白以提高蛋白質(zhì)含量提供可乘之機。為此亟需建立適應(yīng)新?lián)郊偾闆r的快速、 高效的真蛋白檢測方法。

目前， 酪蛋白檢測方法有凱氏定氮法[4]、 雙縮脲法[5]、 四階導(dǎo)數(shù)分光光度法[6]、 液質(zhì)聯(lián)用法[7]、 ELISA法[8]、 電泳法[9]、 蛋白質(zhì)免疫印跡[10]、 反相色譜[11]、芯片[12]及熒光探針法[13]。但這些方法都具有不同程度的局限性，如靈敏度和選擇性較差、檢測儀器價格昂貴、操作過程復(fù)雜等。近來，Wang等[13]報道了基于BSPOTPE探針對酪蛋白膠團微環(huán)境極性的改變產(chǎn)生聚集誘導(dǎo)發(fā)光現(xiàn)象 （Aggregation induced emission， AIE），并建立了酪蛋白的檢測方法，但探針只影響酪蛋白微環(huán)境的極性，并未與酪蛋白膠團發(fā)生結(jié)合作用。

本課題組報道了1，8萘酰亞胺類熒光探針與酪蛋白相互作用后的AIE特性[14～16]。本實驗合成了新型雙羧基水溶性1，8萘酰亞胺類熒光探針2，研究了酪蛋白對探針2的聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)的機理，根據(jù)探針2對酪蛋白特異性的識別作用，建立了酪蛋白檢測新方法并應(yīng)用于實際奶粉中總酪蛋白含量的測定。本方法具有快速高效等特點，為乳品質(zhì)量安全監(jiān)測提供了重要信息。

2實驗部分

2.1儀器和試劑

2.3光譜測定

以280 nm為激發(fā)波長，300～400 nm范圍內(nèi)測定酪蛋白內(nèi)源熒光發(fā)射光譜；以300 nm為激發(fā)波長，在440～600 nm范圍內(nèi)測定探針2與酪蛋白體系發(fā)射光譜，入射和出射狹縫帶寬均為5 nm。

3結(jié)果與討論

3.1探針2與酪蛋白聚集誘導(dǎo)發(fā)光機理

酪蛋白是乳品真蛋白中最重要的蛋白質(zhì)，約占總蛋白含量的80%，主要以膠團狀態(tài)存在于乳品中，它是以含磷蛋白質(zhì)為主體的幾種蛋白質(zhì)的復(fù)合體，主要分為αsl酪蛋白、αs2酪蛋白、β酪蛋白和κ酪蛋白4種[2]。其中αs1酪蛋白和αs2酪蛋白含有4個色氨酸殘基， 包括Trp164， 199， 109和193； 而β酪蛋白和κ酪蛋白各自含有1個色氨酸殘基， 分別為Trp143和176。除此之外， 酪蛋白還含有大量疏水性的酪氨酸殘基。色氨酸和酪氨酸殘基位于位于酪蛋白疏水腔第一和第二子域之間，對于酪蛋白膠團的自組裝具有重要作用，同時也是酪蛋白在350 nm附近內(nèi)源性熒光的主要體現(xiàn)基團[17]。作者設(shè)想探針2的雙羧基作為前導(dǎo)嵌入式基團插入酪蛋白疏水腔中，與色氨酸和酪氨酸殘基以非共價鍵作用，如疏水、氫鍵作用等相結(jié)合，導(dǎo)致未結(jié)合的氨基酸殘基包埋在疏水腔中，使得酪蛋白膠團結(jié)構(gòu)更加緊實；而1，8萘酰亞胺熒光基元則吸附于膠團表面導(dǎo)致探針分子的聚集，引起聚集誘導(dǎo)發(fā)光效應(yīng)[18]。

以300 nm為激發(fā)波長，考察了酪蛋白對探針2熒光光譜的影響（pH 7.4），如圖2A所示，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2在480 nm附近呈現(xiàn)顯著的熒光增強并伴隨最大發(fā)射峰藍移；圖2B為濃度為0～5.0 g/L的酪蛋白對探針2顏色的影響，隨著酪蛋白濃度的增加，探針2的發(fā)光效應(yīng)逐漸增強；結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，形成新的發(fā)光復(fù)合物，并且復(fù)合物的疏水性隨著酪蛋白濃度的增加而逐漸增大。

為了研究酪蛋白與探針2的熒光增強機理，考察了不同濃度探針2對酪蛋白熒光及吸收光譜的影響（pH 7.4），酪蛋白的內(nèi)源性熒光主要由色氨酸和酪氨酸體現(xiàn)，如圖3A所示，當激發(fā)波長為280 nm時，酪蛋白在350 nm附近呈現(xiàn)特征熒光峰，探針2在395 nm處呈微弱熒光，隨著探針2濃度的增加，酪蛋白熒光被逐漸猝滅并伴隨顯著的藍移；同時在475 nm附近出現(xiàn)新的發(fā)射峰，且光強逐漸增大，發(fā)射峰向短波長方向移動。結(jié)果表明，探針2與酪蛋白發(fā)生結(jié)合作用，酪蛋白中的色氨酸和酪氨酸殘基發(fā)色團的疏水性增加，包埋進疏水腔中；而450 nm附近新峰的出現(xiàn)表明形成了探針2酪蛋白復(fù)合物，且復(fù)合物的疏水性隨著探針2濃度的增加而逐漸增大。此外在400 nm處出現(xiàn)的等吸收點表明酪蛋白從游離態(tài)向探針2的結(jié)合態(tài)轉(zhuǎn)變。