香蕉花及其提取物的急性毒性評價

王必尊，盛占武，*，王 會，胡瑩瑩

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院?？趯嶒炚荆Ｄ虾？?70102；2.海南省香蕉遺傳改良重點實驗室，海南?？?71101；3.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南海口570228）

香蕉花及其提取物的急性毒性評價

王必尊1，2，盛占武1，2，*，王 會3，胡瑩瑩3

（1.中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院海口實驗站，海南?？?70102；2.海南省香蕉遺傳改良重點實驗室，海南?？?71101；3.海南大學(xué)食品學(xué)院，海南海口570228）

通過1次大劑量給藥，觀察小鼠出現(xiàn)的毒性反應(yīng)及死亡情況，考察香蕉花及其提取物應(yīng)用的安全性。依據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》進行急性毒性實驗，小鼠灌胃給藥1次，藥后正常飼養(yǎng)，連續(xù)觀察14d。結(jié)果顯示：供試品香蕉花及其乙醇提取物在5g/kg劑量下，對KM小鼠灌胃給藥急性毒性實驗未見明顯的毒性反應(yīng)癥狀。

香蕉花，乙醇提取物，急性毒性

香蕉花是香蕉成熟采摘后的廢棄物，在我國年產(chǎn)約為100多萬t，目前在產(chǎn)區(qū)大多直接廢棄。在我國云南、斯里蘭卡、馬來群島、印尼、菲律賓、老撾等國將香蕉花作為蔬菜食用。在印度，香蕉花作為提高女性母乳、減緩?fù)唇?jīng)和治療糖尿病的藥材食用已有上千年的歷史[1]。我國主栽品種巴西和粉蕉的香蕉花富含鈣、鐵、鉀等礦物質(zhì)和膳食纖維，黃酮含量較高，具有較強的抗氧化活性[2-4]。國外品種Musa x Paradisiaca，Musa sapientum L.和Musa sp.var elakki bale香蕉花的水、氯仿、乙醇提取物具有顯著的降血糖、抗氧化、抑制糖尿病小鼠體內(nèi)AGEs的形成和增加埃利希腹水腫瘤細(xì)胞的葡萄糖攝入量的活性[5-11]。前期研究表明，香蕉花營養(yǎng)成分[2]豐富且提取物具有較強的抗氧化和抑制α-糖苷酶活性[12]。本研究擬對兩個品種的香蕉花及其乙醇提取物進行急性毒性評價，以期為香蕉花資源的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

巴西蕉（Musa spp.，Baxijiao）和粉蕉（Musa spp.，Paradisiaca）花蕾 海南省大面積種植；新鮮香蕉花蕾 采摘后，手工剝離花，清洗瀝干、40℃干燥、粉碎至200目，黑色聚乙烯塑料袋包裝并置于－20℃貯藏；香蕉花乙醇提取物[12]乙醇濃度為60%，料液比為1∶30，提取溫度為65℃，提取時間為1h；KM小鼠 體重范圍：18.0～22.0g，等級：SPF級，雌雄各半，雌者無孕，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物合格證號：No 0066178，實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（粵）2008-0002；動物飼料 SPF級鼠料，配制符合GB 14924.3-2001標(biāo)準(zhǔn)；羧甲基纖維素鈉、苦味酸、品紅等試劑 均為國產(chǎn)分析純。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物實驗預(yù)實驗 取16只檢疫合格的KM種小鼠，雌雄各半，按照“實驗中實驗動物的標(biāo)記”標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程將動物分為4組，每組逐一編號。禁食（不禁水）24h后，分別將供試的香蕉花干樣及其乙醇提取物配制成125mg/mL的供試品混懸液，1日內(nèi)給藥1次，上午給藥。給藥途徑采用灌胃給藥，給藥體積為0.4mL/10g，給藥最大劑量為5g/kg。給藥時觀察藥物對動物的毒性反應(yīng)情況、死亡數(shù)和死亡時間，從給藥當(dāng)日到給藥后48h，依據(jù)表1每天觀察一次動物的一般癥狀。實驗期間對死亡動物進行大體剖檢，檢查各主要生命器官（心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、胸腺、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢和腸道等）及給藥局部是否異常，對異常臟器進一步做病理檢查。

1.2.2動物實驗正式實驗

1.2.2.1動物分組與編號 針對4種供試樣品，分別取60只檢疫合格的KM種小鼠，按“實驗動物分組”標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程分為供試品組、陰性對照組和空白對照組，每組20只，雌雄各半，實驗各組分別按中心“實驗中實驗動物的標(biāo)志”標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)格將動物編號為1～20號，其中1～10為雌性，11～20為雄性。供試品組灌喂香蕉花及其提取物，陰性對照組灌喂羧甲基纖維素鈉溶液，空白對照組僅喂食SPF級鼠料。

1.2.2.2劑量設(shè)計 供試品組劑量設(shè)計：由于在預(yù)實驗中按“最大給藥量”法：給藥體積為40mL/kg，給藥濃度為125mg/mL，即日給藥量為40mL/kg×125mg/mL= 5g/kg時，動物未發(fā)生藥物毒性，引起動物死亡。因此，正式實驗時的給藥劑量、濃度和給藥體積與預(yù)實驗一致，故本實驗按“最大給藥量法”進行。陰性對照組：陰性對照組給予與供試品同等體積的1%（g/mL）羧甲基纖維素鈉溶液。對照組：為正常喂食組。給藥體積：供試品組和陰性對照組給藥容積為40mL/kg（0.4mL/10g）。給藥途徑：供試品和陰性對照品采用灌胃給藥，按“小鼠灌胃給藥”標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程執(zhí)行，全部藥量在10s內(nèi)給完。供試品和陰性對照品給藥時間及頻率：1日內(nèi)給藥1次，上午給藥。小鼠飲食：給藥前24h內(nèi)禁食，不禁水。

1.2.2.3藥物配制 供試樣品混懸液的配制：稱取5g供試樣品至于50mL燒杯中，緩慢加入少量配制好的1%（g/mL）羧甲基纖維素鈉溶液倒入其中，攪拌均勻，當(dāng)配制體積為40mL時，供試品混懸液呈粘稠狀，經(jīng)過測試剛好通過小鼠灌胃器，此時濃度為125mg/mL。陰性對照組溶液配制：稱取5.0g羧甲基纖維素鈉置于干燥燒杯中，加蒸餾水250mL后，加熱攪拌成糊狀，冷卻后移至500mL容量瓶中加水定容，即得500mL濃度為1%（g/mL）羧甲基纖維素鈉溶液。

1.2.2.4檢測指標(biāo) 癥狀觀察：給藥時查看藥物對小鼠的毒性反應(yīng)情況，登記好小鼠的死亡數(shù)量和死亡時間，從給藥當(dāng)日到給藥后14d，依據(jù)表1每天觀察一次小鼠的一般癥狀，填寫“急性毒性實驗給藥記錄表”和“急性毒性實驗癥狀觀察記錄表”。尸體檢查：實驗期間對死亡動物進行大體剖檢，檢查各主要生命器官檢查及給藥局部是否異常。體重：給藥前和給藥后1、3、7、14d各稱重一次體重。

1.2.2.5大體解剖 所有的動物均應(yīng)進行大體解剖，包括實驗過程中因瀕死而處死的動物、死亡的動物以及實驗結(jié)束時仍存活的動物。

表1 癥狀觀察Table.1 Symptoms observed

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS軟件選擇“單因素方差分析”法進行統(tǒng)計學(xué)處理，計算出均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差，并且分析供試品組、陰性對照組與空白對照組之間的體重差異。

2 結(jié)果與討論

2.1 預(yù)實驗結(jié)果

經(jīng)預(yù)實驗觀察，受試的KM小鼠均未出現(xiàn)死亡也未出現(xiàn)明顯的中毒癥狀，初步結(jié)果顯示兩個品種的香蕉花（巴西蕉和粉蕉）及其提取物的毒性很小，故采用最大給藥量法進行正式實驗。

2.2 正式實驗結(jié)果

根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果，設(shè)計以受試物兩個品種的香蕉花及其乙醇提取物5g/kg體重的劑量，經(jīng)口一次灌胃。藥后及停藥觀察期間，各組小鼠進食、飲水均正常，體重呈增長趨勢，用SPSS單因素方差分析供試品組與陰性對照組各時段體重的差異，供試品組與空白對照組比較無明顯差異（p＞0.05），詳見表2～表5。各組小鼠外觀特征基本正常，毛發(fā)色澤正常，有少數(shù)動物出現(xiàn)聳毛現(xiàn)象，皮膚顏色粉紅正常，耳、眼、口、鼻未見異樣分泌物，呼吸道反應(yīng)正常，未見咳嗽、哮喘及噴嚏現(xiàn)象，四肢活動、步態(tài)正常，灌胃后24h內(nèi)，藥物組多數(shù)動物排出棕黑色軟糞便，24h以后糞便逐漸恢復(fù)正常，呈灰褐色，顆粒狀成形糞便，無一動物死亡。

表2 巴西蕉花對KM小鼠體重的影響Table.2 Effect of banana flower（Musa spp.，Baxijiao）on body weight of KM mice

注：用SPSS單因素方差分析檢驗分析供試品組與陰性對照組各時段體重的差異，p均>0.05；表3～表5同。

表3 粉蕉花對KM小鼠體重的影響Table.3 Effect of banana flower（Musa spp.，Paradisiaca）on body weight of KM mice

表4 粉蕉提取物對KM小鼠體重的影響Table.4 Effect of banana flower（Musa spp.，Paradisiaca）extract on body weight of KM mice

表5 巴西蕉花提取物對KM小鼠體重的影響Table.5 Effect of banana flower（Musa spp.，Baxijiao）extract on body weight of KM mice

2.3 大體解剖

KM小鼠恢復(fù)期結(jié)束時，供試品組、陰性對照組與空白對照組的小鼠頸椎脫臼處死，對小鼠進行大體剖檢，檢查給藥局部（鼻腔）及各主要生命器官心臟、肝臟、脾臟、肺臟、腎臟、腎上腺、胸腺、膀胱、睪丸、附睪、子宮、卵巢和腸道等未見異常。

3 結(jié)論

為觀察動物在接受過量供試香蕉花（巴西蕉和粉蕉）及其乙醇提取物后可能產(chǎn)生的急性中毒反應(yīng)，初步解釋其毒性作用，了解可能的毒性靶器官，為香蕉花及其提取物的后續(xù)研究提供信息參考，進行了香蕉花及其提取物的急性毒性評價。實驗結(jié)果表明：供試品組、陰性對照組合空白對照組在給藥后均未見異常毒性反應(yīng)癥狀，大體剖檢各主要組織器官未見異常。與給藥前比較，供試品組、陰性對照組合空白對照組小鼠平均體重增長在給藥后恢復(fù)期期間呈上升趨勢。供試的4個樣品在5g/kg劑量下，按0.4mL/10g給藥，對KM小鼠灌胃給藥急性毒性實驗未見明顯的毒性反應(yīng)癥狀。因此，供試品最大劑量大于5g/kg，根據(jù)急性毒性（LD50）劑量分級，香蕉花及其提取物屬于實際無毒（5001～15000mg/kg）級別。

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Acute toxicity evaluation of banana flower and its extracts

WANG Bi-zun1，2，SHENG Zhan-wu1，2，*，WANG Hui3，HU Ying-ying3
（1.Haikou Experimental Station，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 570102，China；2.Hainan Key Laboratory of Banana Genetic Improvement，Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences，Haikou 570101，China；3.College of Food Science，Hainan University，Haikou 570228，China）

Acute toxicity of banana flower（Musa spp.，Baxijiao and Musa spp.，Paradisiaca）and its extracts was evaluated，through once large dose feeding samples and observing the rapid toxicity effect on the KM mice. The test of acute toxicity according to guidance for technology：acute toxicity for traditional Chinese drug and natural drug.Mice were fed by intragastric administration once，after that was fed normal.Then the symptom of mice were observed and recorded in the next 14d.Results showed that there was no evident poisoning symptom or death for mice after test on the mice of different sex，which had eaten these samples with 5g/kg.

Banana flower；ethnoal extract；acute toxicity

TS201.4

A

1002-0306（2014）04-0338-04

2013－06－17 *通訊聯(lián)系人

王必尊（1962-），男，大學(xué)本科，副研究員，研究方向：農(nóng)業(yè)廢棄物綜合利用。

國家自然科學(xué)基金（31201303）；海南省自然科學(xué)基金（309043）。