利用TLC和HPLC結(jié)合的方法定性檢測(cè)尿液中的雌馬酚

王安易，程永強(qiáng)，歐小群，劉肖南，李 婷，周 韻

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京100083）

利用TLC和HPLC結(jié)合的方法定性檢測(cè)尿液中的雌馬酚

王安易，程永強(qiáng)*，歐小群，劉肖南，李 婷，周 韻

（中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營(yíng)養(yǎng)工程學(xué)院，北京100083）

雌馬酚是人體腸道細(xì)菌分解大豆苷和大豆苷元的最終代謝產(chǎn)物之一，采用薄層色譜法（TLC）分離純化尿液樣品中的雌馬酚后再進(jìn)行高效液相色譜法（HPLC）定性檢測(cè)，可有效減少染料木苷元的干擾，解決了僅依靠HPLC無(wú)法實(shí)現(xiàn)雌馬酚有效分離的問(wèn)題。以氯仿-甲醇（24∶1，v/v）作為T(mén)LC展開(kāi)劑，染料木苷元的Rf值為0.29，雌馬酚的Rf值為0.40。本方法具有準(zhǔn)確度高，干擾度低等優(yōu)點(diǎn)，為定性檢測(cè)尿液中雌馬酚提供了新的方法。

薄層色譜法，高效液相色譜法，雌馬酚，大豆苷元

大豆異黃酮（soy isoflavones）的代謝產(chǎn)物之一——雌馬酚（equol）與其前體物質(zhì)大豆苷元（daidzein）相比具有更高的生物活性[1-6]。雌馬酚的生物活性主要為抗氧化和雌激素樣活性，還具有降低心血管疾病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)、抗腫瘤、緩解更年期癥狀等功能[7]。因此建立有效的雌馬酚檢測(cè)方法，對(duì)人群雌馬酚生產(chǎn)者的鑒定，跟蹤、了解人群飲食與疾病關(guān)系以及從雌馬酚有效生產(chǎn)者體內(nèi)分離篩選雌馬酚腸道生產(chǎn)菌等均具有重要意義。目前應(yīng)用最為普遍最為廣泛的檢測(cè)方法是高效液相色譜法（HPLC）。李巖等[8]建立了檢測(cè)人體尿樣中雌馬酚的HPLC檢測(cè)方法，王靜等[9]建立了同時(shí)檢測(cè)人尿中4種異黃酮組分的HPLC檢測(cè)方法，王路等[10]建立了同時(shí)檢測(cè)人尿中6種異黃酮組分的HPLC檢測(cè)方法，通過(guò)不斷探索和優(yōu)化HPLC檢測(cè)條件，人尿中可有效檢測(cè)出的異黃酮種類(lèi)增多，但是這些檢測(cè)方法在應(yīng)用于雌馬酚檢測(cè)時(shí)幾乎都存在響應(yīng)值低，受染料木苷元（genistein）干擾等問(wèn)題，這給定性檢測(cè)雌馬酚以鑒定雌馬酚有效生產(chǎn)者帶來(lái)難度。人尿成分復(fù)雜，雌馬酚含量較低，易受其他雜質(zhì)干擾，所以探索濃縮純化尿液中的雌馬酚，消除染料木苷元干擾對(duì)雌馬酚的準(zhǔn)確定性檢測(cè)具有重要意義。

目前用于分離純化異黃酮的方法主要有柱層析法、固相萃取法、薄層色譜法等[11]。潘廖明[12]采用聚酰胺柱層析時(shí)，用不同濃度甲醇洗脫，可得到含量分別為90.30%大豆苷和92.0%染料木苷；Mauricio等[13]利用固相萃取法，并使用Strata X填料時(shí)，大豆異黃酮中各組分回收率最高，平均回收率為99.37%，可用于大豆異黃酮分離純化；權(quán)靜[14]利用薄層色譜法，用氯仿-甲醇-乙酸（93∶7∶0.5，v/v）作為展開(kāi)劑成功分離了豆粕中的大豆苷元和染料木苷元，但是將這些方法應(yīng)用于分離純化尿樣中雌馬酚的相關(guān)報(bào)道較少。本文探索性地進(jìn)行了HPLC檢測(cè)條件優(yōu)化，在效果不顯著的情況嘗試使用薄層色譜法（TLC）先對(duì)尿液樣品中的雌馬酚進(jìn)行預(yù)分離，再進(jìn)行HPLC定性檢測(cè)。將雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)品與尿樣同時(shí)進(jìn)行TLC展開(kāi)后比較Rf值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明可以有效分離尿液中的雌馬酚并排除染料木苷元的干擾。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

染料木苷元和雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)品 美國(guó)Sigma-AldrichCorporation；乙腈、甲醇 色譜純，美國(guó)Dikma公司；乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮、二氯甲烷、四氫呋喃、碘 分析純，北京化學(xué)試劑廠；磷酸氫二鉀 分析純、乙酸 色譜純，汕頭市西隴化工股份有限公司；磷酸二氫鉀 分析純，廣東光華股份有限公司；硅膠 青島海洋化工廠分廠；GF254硅膠薄層板 德國(guó)Merck KGaA；純凈水 杭州娃哈哈集團(tuán)；蒸餾水 實(shí)驗(yàn)室自制。

M-20A分析型液相色譜儀、SPD-M20A二極管陣列檢測(cè)器 日本Shimadzu Corporation；反相C18色譜柱 日本Shiseido Corporation，4.6mm×50cm×5μm；GL-20G-Ⅱ離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；RE52-99旋蒸儀 上海亞榮生化儀器廠。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 高效液相檢測(cè)條件優(yōu)化

1.2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制參照文獻(xiàn)[15]中的方法。染料木苷元儲(chǔ)備液（1mg/mL）：染料木苷元固體標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存瓶（1mg）中加入少量甲醇（色譜純）將其完全溶解，全部轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中定容，于4℃冰箱保存。

染料木苷元標(biāo)準(zhǔn)液：取染料木苷元儲(chǔ)備液1mL，用甲醇（色譜純）定容于10mL容量瓶中，經(jīng)0.22μm PP型（聚丙烯）Whatman一次性針頭過(guò)濾器過(guò)濾后，即得染料木苷元標(biāo)準(zhǔn)液，于4℃冰箱中保存。

雌馬酚儲(chǔ)備液（1mg/mL）：向雌馬酚固體標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存瓶（10mg）中加入少量甲醇（色譜純）將其完全溶解，全部轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中定容，于4℃冰箱保存。

雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)液：取雌馬酚儲(chǔ)備液1mL，用甲醇（色譜純）定容于10mL容量瓶中，經(jīng)0.22μm PP型（聚丙烯）Whatman一次性針頭過(guò)濾器過(guò)濾后，即得雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)液，于4℃冰箱中保存。

混合標(biāo)準(zhǔn)液（genistein∶equol=20∶8，v/v）：取染料木苷元標(biāo)準(zhǔn)液80μL，雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)液200μL，經(jīng)0.22μm PP型（聚丙烯）Whatman一次性針頭過(guò)濾器過(guò)濾后，于4℃冰箱中保存。

1.2.1.2 對(duì)照組的HPLC檢測(cè)條件 對(duì)照組采用劉肖南等[15]分析條件。色譜柱為Shiseido C18（4.6mm×50cm× 5μm）；采用二極管陣列檢測(cè)器（PDA）；流動(dòng)相包括水相和有機(jī)相，其中水相為0.1%（v/v）乙酸溶液，有機(jī)相為乙腈/甲醇（5/2，v/v）；其他檢測(cè)參數(shù)為：柱溫35℃，檢測(cè)波長(zhǎng)270nm，進(jìn)樣量20μ，流速0.8mL/min，靈敏度，0.020AUFs；采用梯度洗脫，詳細(xì)洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 洗脫程序Table.1 HPLC elution program

1.2.1.3 改變有機(jī)相組成 在其他條件不變的情況下，分別向有機(jī)相中添加四氫呋喃（THF）和二氯甲烷（DCM）。有機(jī)相組成見(jiàn)表2。

表2 有機(jī)相組成Table.2 The composition of organic phase

1.2.2 利用薄層色譜法分離純化尿液中雌馬酚

1.2.2.1 尿樣預(yù)處理方法 取10mL尿樣置于50mL離心管中，加入pH=7.0的磷酸鹽緩沖液[16]15mL，乙酸乙酯25mL，渦旋振蕩器振蕩20s，離心6000×g，5min后取上清液在65℃，0.04MPa，75r/min下旋蒸至溶劑全部蒸出。向蒸餾燒瓶加入1～2mL甲醇并渦旋振蕩20s至蒸出物全部溶解后，經(jīng)0.45μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，于4℃冰箱中保存，保存時(shí)間不超過(guò)48h。

1.2.2.2 對(duì)照樣品的配制 參照1.2.1.1中標(biāo)準(zhǔn)混合液配制。

1.2.2.3 雌馬酚和染料木苷元薄層色譜定性和分離方法的建立 將GF254薄層板（10cm×10cm）在使用前于110℃活化30min。在距底邊邊緣1cm處用微型注射器點(diǎn)樣，標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品和預(yù)處理好的樣品點(diǎn)樣量各為4μL。將GF254薄層板放入充滿展開(kāi)劑（見(jiàn)表3）蒸汽的層析缸內(nèi)，預(yù)飽和20min后，上行展開(kāi)8cm，取出薄層板，揮干后于充滿碘蒸氣的碘缸中顯色。測(cè)定各斑點(diǎn)的Rf值并計(jì)算分離度R，確定最佳展開(kāi)劑組成。

其中分離度R[17]的計(jì)算公式為：

用冷風(fēng)吹去碘，收集色譜帶，并用甲醇反復(fù)浸泡至被吸附的樣品全部洗脫，將洗脫液氮吹至干，加入100μL甲醇，過(guò)0.45μm有機(jī)濾膜，于4℃冰箱中保存，以備HPLC檢測(cè)。

表3 TLC展開(kāi)劑的組成Table.3 The composition of developing solvent in TLC analysis

2 結(jié)果與分析

2.1 分離條件的選擇

在液相色譜中，當(dāng)固定相一定時(shí)，流動(dòng)相的種類(lèi)和配比能?chē)?yán)重影響分離效果，并且反相高效液相中常使用THF和DCM調(diào)節(jié)流動(dòng)相極性以獲得更好的分離效果[18]。所以本文研究了改變流動(dòng)相組成對(duì)雌馬酚和染料木苷元分離效果的影響，結(jié)果見(jiàn)表4。當(dāng)有機(jī)相組成為1%THF和5%THF時(shí)，雖然雌馬酚和染料木苷元的保留時(shí)間和分離度都隨著THF加入量的增加有所提高，分離度從0.88提高到1.41，但是與對(duì)照相比，分離度反而減?。焕^續(xù)增大THF的比例，分離效果并沒(méi)有明顯改善，而且基線顯著向上漂移，所以THF并不能有效提高雌馬酚和染料木苷元的分離度，去除染料木苷元的干擾。

當(dāng)向原有機(jī)相中添加不同比例的DCM后，雌馬酚和染料木苷元的保留時(shí)間均顯著提前，但是分離度均低于對(duì)照組，并且染料木苷元出峰時(shí)間早于雌馬酚。這可能是由于二氯甲烷的溶劑強(qiáng)度較乙腈、甲醇強(qiáng)，加入二氯甲烷，降低了整個(gè)流動(dòng)相的極性，使染料木苷元和雌馬酚的保留時(shí)間和洗脫順序都發(fā)生了變化。

根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，加入THF或DCM后，雌馬酚和染料木苷元分離效果均沒(méi)有明顯改善。因此，嘗試通過(guò)改變流動(dòng)相優(yōu)化雌馬酚的檢測(cè)方法是比較困難的，所以探索其他實(shí)現(xiàn)雌馬酚和染料木苷元有效分離的方法是極其必要的，經(jīng)過(guò)研究，本文嘗試使用TLC分離雌馬酚并取得了理想的分離效果。

表4 流動(dòng)相B組成對(duì)雌馬酚和染料木苷元的保留時(shí)間和分離度的影響Table.4 Effect of mobile phase composition on the retention time and resolution of equol and genistein

2.2 薄層色譜法展開(kāi)劑的確定

經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)，展開(kāi)劑比例和層析效果如表5和圖1所示。

表5 不同展開(kāi)劑的層析效果Table.5 Chromatographic separation of different developing solvents

當(dāng)分離度＞1.5時(shí)相鄰兩斑點(diǎn)可達(dá)到基線分離[17]。所以只有當(dāng)用展開(kāi)劑Ⅲ時(shí)，展開(kāi)后雌馬酚和染料木苷元的分離度＞1.5，實(shí)現(xiàn)了基線分離，并且斑點(diǎn)顯色效果好，說(shuō)明將氯仿∶甲醇（24∶1，v/v）作為T(mén)LC展開(kāi)劑最為理想（圖1）。

圖1 薄層板色譜圖Fig.1 Thin-layer chromatogram of standards

2.3 雌馬酚的分離純化效果

尿液樣品薄層色譜圖如圖2所示，從圖2可以看出，雖然由于標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品與樣品濃度相差較大而出現(xiàn)輕微的“邊緣效應(yīng)[17]”，但是根據(jù)薄層板右端標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品的Rf值，初步推斷尿液樣品薄層色譜圖中a對(duì)應(yīng)色譜帶為雌馬酚，b對(duì)應(yīng)色譜帶可能為染料木苷元，將a、b對(duì)應(yīng)的色譜帶進(jìn)行洗脫和濃縮后進(jìn)行HPLC檢測(cè)驗(yàn)證。

圖2 尿液樣品薄層板色譜圖Fig.2 Thin-layer chromatogram of urine sample

2.4 HPLC分析

利用PDA檢測(cè)器對(duì)待測(cè)物進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到待測(cè)物的紫外光譜圖，可以輔助HPLC檢測(cè)結(jié)果對(duì)物質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定性。因此為了更準(zhǔn)確地判斷TLC分離效果，在本實(shí)驗(yàn)中除了用保留時(shí)間對(duì)待測(cè)物進(jìn)行歸屬，還用PDA檢測(cè)器采集待測(cè)物的紫外光譜圖，與標(biāo)準(zhǔn)品的光譜圖進(jìn)行對(duì)照定性。

圖3（A1）和圖4（A2）分別為雌馬酚和染料木苷元混標(biāo)的HPLC檢測(cè)色譜圖和PDA檢測(cè)光譜圖，其中雌馬酚的保留時(shí)間為40.112min，具有224nm和281nm兩個(gè)特征吸收波長(zhǎng)；染料木苷元的保留時(shí)間為40.853min，特征吸收波長(zhǎng)為259nm。

當(dāng)未使用TLC處理尿樣時(shí)，尿液樣品的HPLC檢測(cè)圖如圖3（B1）所示，在40.362min時(shí)出現(xiàn)嚴(yán)重的拖尾峰，說(shuō)明流動(dòng)相洗脫效果不佳；使用PDA檢測(cè)器采集待測(cè)物的紫外光譜圖并與標(biāo)準(zhǔn)品的光譜圖（A2）進(jìn)行對(duì)照發(fā)現(xiàn)沒(méi)有與雌馬酚或染料木苷元最大吸收波長(zhǎng)和峰型一致的特征吸收峰，說(shuō)明尿液樣品中的雌馬酚和染料木苷元未實(shí)現(xiàn)有效分離。

將尿液樣品經(jīng)過(guò)TLC分離后得到的色譜帶a收集物進(jìn)行HPLC和PDA檢測(cè)，采集到色譜圖（C1）和紫外吸收光譜圖（C2），將結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)比后得到色譜圖保留時(shí)間基本一致，且具有與雌馬酚標(biāo)準(zhǔn)品相同的特征吸收峰和峰型，因此可以證實(shí)分離純化得到的色譜帶a收集物即為雌馬酚。同理將色譜帶b收集物進(jìn)行檢測(cè)，得到色譜圖（D1）和紫外吸收?qǐng)D譜（D2），與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行比對(duì)發(fā)現(xiàn)色譜帶b收集物與染料木苷元標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間基本一致，且特征吸收峰和峰型相同，因此可以證實(shí)分離純化得到的色譜帶b收集物即為染料木苷元。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)品、尿液樣品和TLC分離色譜帶的色譜圖Fig.3 High performance liquid chromatograms of standard，urine sample and chromatographic band

圖4 標(biāo)準(zhǔn)品和TLC分離色譜帶紫外光譜圖Fig.4 Ultraviolet spectrum of standard，urine sample and chromatographic band

3 結(jié)論與討論

利用氯仿∶甲醇（24∶1，v/v）作為T(mén)LC展開(kāi)劑，雌馬酚和染料木苷元的分離度（R）為2.4，達(dá)到基線分離；后將色譜帶a和色譜帶b收集物分別進(jìn)行HPLC和PDA檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，兩者分別與雌馬酚和染料木苷元的保留時(shí)間基本一致，且具有相同的峰型和最大吸收波長(zhǎng)，說(shuō)明通過(guò)TLC可以將尿樣中雌馬酚和染料木苷元基線分離，消除染料木苷元的干擾，實(shí)現(xiàn)了雌馬酚的有效定性檢測(cè)，解決了在雌馬酚檢測(cè)過(guò)程中由于雜質(zhì)干擾造成的定性困難的問(wèn)題，這對(duì)準(zhǔn)確判定雌馬酚生產(chǎn)者有重要意義。

TLC是用于異黃酮分離純化處理的常用方法，權(quán)靜等[13]利用氯仿∶甲醇∶乙酸（93∶7∶0.5，v/v/v）作為T(mén)LC展開(kāi)劑成功分離大豆苷元與染料木苷元，說(shuō)明以氯仿和甲醇為主要成分的展開(kāi)劑對(duì)于大豆異黃酮及其分解產(chǎn)物有較好的分離作用。而Shin-ichiro Yokoyama等[19]利用甲苯∶丙酮（2∶1，v/v）作為T(mén)LC展開(kāi)劑對(duì)尿樣中的雌馬酚進(jìn)行分離濃縮后進(jìn)行HPLC檢測(cè)，并根據(jù)檢測(cè)結(jié)果判斷受試者是否為雌馬酚生產(chǎn)者。而本文在TLC與HPLC相結(jié)合的基礎(chǔ)上還利用PDA檢測(cè)器進(jìn)行輔助定性，使判定結(jié)果更加準(zhǔn)確可靠。本方法不僅可以用于檢測(cè)尿液中的雌馬酚，還可以用于對(duì)菌種發(fā)酵液中的雌馬酚進(jìn)行定性檢測(cè)。

本方法雖然可以對(duì)雌馬酚進(jìn)行定性檢測(cè)，但是還無(wú)法實(shí)現(xiàn)對(duì)雌馬酚的準(zhǔn)確定量，這主要是由于在色譜帶收集過(guò)程中存在損失，所以如何利用此方法實(shí)現(xiàn)尿液中雌馬酚的精確定量檢測(cè)還有待于在今后實(shí)驗(yàn)中繼續(xù)探索。

[1]Franke A A，Lai J F，Halm B M，et al.Equol production changes over time in postmenopausal women[J].J Nutr Biochem，2012，23（6）：573-579.

[2]Hwang J，Wang J，Morazxzoni P，et al.The phytoestrogen equol increases nitricoxide availability by inhibiting superoxide production：an antioxidant mechanism for cell-mediated LDL modification[J].Free Radic Bio Med，2003，34（10）：1271-1282.

[3]Maubach J，Bracke M E，Heyerick A，et al.Quantitation of soyderived phytoestrogens in human breast tissue and biological fluids by high-performance liquid chromatography[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2003，784（1）：137-144.

[4]Setchell K D，Brown N M，Lydeking-Olsen E.The clinical importance of the metabolite equol-a-clue to the effectiveness of soy and its isoflavones[J].J Nutr，2002，132（12）：3577-3584.

[5]Atkinson C，Skor H E，Dawn Fitzgibbons E，et al.Urinary equol excretion in relation to 2-hydroxyestrone and 16alphahydroxyestrone concentrations：an observational study of young to middle-aged women[J].J Steroid Biochem，2003，86（1）：71-77.

[6]Duncan A M，Merz-Demlow B E，Xu X，et al.Premenopausal equol excretors show plasma hormone profiles associated with lowered risk of breast cancer[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2000，9（6）：581-586.

[7]江國(guó)虹，王卓，田穎.雌馬酚生理功能的研究進(jìn)展[J].中華疾病控制雜志，2010（4）：341-344.

[8]王巖，遲玉杰，許巖，等.高效液相色譜法檢測(cè)人體尿樣中的雌馬酚[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，34（5）：488-491.

[9]王靜，韓麗華，朱莉芳，等.人尿中異黃酮的高效液相色譜分析[J].分析化學(xué)研究簡(jiǎn)報(bào)，2006，34（4）：569-572.

[10]王路，盧衛(wèi)紅，程翠琳，等.同時(shí)檢測(cè)人尿中六種大豆異黃酮代謝產(chǎn)物的HPLC法[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2009，31（2）：181-184.

[11]阮洪生，葛文中，賈桂燕.大豆異黃酮純化方法研究進(jìn)展[J].糧食與油脂，2009（10）：8-10.

[12]潘廖明.大豆異黃酮提取分離技術(shù)及檢測(cè)方法研究[D].成都：四川大學(xué)，2003.

[13]Mauricio A Rostagno，Miguel Palma，Carmelo G Barroso. Solid phase extraction of soy isoflavones[J].Journalof Chromatography A，2005，1076（1）：110-117.

[14]權(quán)靜.由豆粕制備高純度大豆異黃酮的研究[D].南京：南京工業(yè)大學(xué)，2004.

[15]劉肖南.高效液相色譜法測(cè)定雌馬酚條件的優(yōu)化[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[16]張純潔.生物化學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：高等教育出版社，2007：9-10.

[17]何麗一.平面色譜方法及應(yīng)用[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2001：93-94.

[18]孫毓慶.現(xiàn)代色譜法及其在藥物分析中的應(yīng)用[M].北京：科學(xué)出版社，2005：232-235.

[19]Yokoyama S，Kuzuguchi T.Rapid and convenient detection of urinary equol by thin-layer chromatography[J].J Nutr Sci Vitaminol，2007，53：43-47.

Qualitative detection of urinary equol by thin-layer chromatography and high performance liquid chromatography

WANG An-yi，CHENG Yong-qiang*，OU Xiao-qun，LIU Xiao-nan，LI Ting，ZHOU Yun
（College of Food Science&Nutritional Engineering，China Agricultural University，Beijing 100083，China）

Equol was one of metabolites of daidzin and daidzein by intestinal bacteria decomposition.The disturbance from genistein to equol was reduced by using thin-layer chromatography（TLC）followed by high performance liquid chromatography（HPLC）.This method solved the problem that equol could hardly be separated effectively by HPLC.Developed in a TLC solvent system of chloroform∶methanol（24∶1），equol and genistein were observed on Rfvalue of 0.40 and 0.29，respectively.This new qualitative method for the analysis of urinary equol was more accurate and less disturbed than using only HPLC analysis.

thin-layer chromatography（TLC）；high performance liquid chromatography（HPLC）；equol；genistein

TS201.3

A

1002-0306（2014）04-0079-05

2013－07－17 *通訊聯(lián)系人

王安易（1992－），女，在讀大學(xué)本科，研究方向：食品科學(xué)。

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31171739）；“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAD34B03）；北京市大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練項(xiàng)目；教育部新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃（NETC-10-0776）項(xiàng)目；北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助計(jì)劃（2011D009007000001）。