口腔念珠菌病患者口內(nèi)菌株檢出分布及藥敏實(shí)驗(yàn)臨床研究

陳水堂

（黃梅縣人民醫(yī)院 口腔科，湖北 黃岡 435500）

口腔念珠菌病俗稱(chēng)“鵝口瘡”，為口腔黏膜發(fā)生的真菌感染，在免疫功能低下人群中高發(fā)，近年隨廣譜抗生素、免疫抑制劑及皮質(zhì)激素類(lèi)藥物的廣泛應(yīng)用，真菌感染率不斷上升，口腔念珠菌病感染真菌菌株種類(lèi)臨床報(bào)導(dǎo)也不斷增多，耐藥率出現(xiàn)上升［1］，提升了相關(guān)治療的困難性，本研究采取回顧性分析，研討了96例口腔念珠菌病CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)及藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果，旨在更好的指導(dǎo)臨床的合理用藥。

1 研究對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

96例臨床確診口腔念珠病患者均來(lái)自我院2011年1月至2013年1月口腔科門(mén)診病人，鏡檢及培養(yǎng)均支持真菌感染，其中男34例，女性62例，年齡2－60歲，中位數(shù)年齡30歲，臨床癥狀體征主要表現(xiàn)為：口腔黏膜下白色假膜、基底呈現(xiàn)紅色潰瘍、糜爛，研究對(duì)象于餐后2h無(wú)菌PBS緩沖液（p H7.2）漱口1分鐘，含漱液收集于無(wú)菌容器內(nèi)，分別鏡檢及培養(yǎng)。

1.2 培養(yǎng)、鑒定

含漱液標(biāo)本離心50μl接種于CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基培養(yǎng)（由成都培洋生物提供），37℃培養(yǎng)48 h，根據(jù)CHROMagar培養(yǎng)基菌落形態(tài)及顏色進(jìn)行鑒定，翠綠色菌落為白色念珠菌（直徑2 mm左右），粉紅色、邊緣呈現(xiàn)毛刺狀為克柔念珠菌（直徑4－5 mm左右），紫紅色為光滑念珠菌（直徑2 mm左右），藍(lán)灰色為熱帶念珠菌（直徑1.5 mm左右）。

1.3 藥敏試驗(yàn)

藥敏試驗(yàn)采用紙片擴(kuò)散法（kindy－Bauer，KB），接種環(huán)取鑒定后菌株轉(zhuǎn)種于沙堡弱培養(yǎng)基（由杭州天和生物提供），取純菌落（＞1 mm）5個(gè)溶于5 ml無(wú)菌生理鹽水混勻，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板調(diào)整菌懸液濃度至（1－5）×106cfu／ml，無(wú)菌棉拭子涂布RPMI－I640培養(yǎng)基（美國(guó)Hycolone公司提供），干燥后放置伊曲康唑（ICZ）、氟康唑（FCZ）藥敏紙片各一，均為杭州民生藥業(yè)提供，伊曲康唑劑量8μg，氟康唑劑量15μg，35℃培養(yǎng)72 h，根據(jù)藥敏紙片說(shuō)明判讀藥敏結(jié)果：抑菌圈：伊曲康唑19 mm以上敏感（相應(yīng) MIC≤0.125值），15－18劑量依賴(lài)性敏感（相應(yīng) MIC值0.25－0.5），14 mm以下耐藥（相應(yīng) MIC值≥1）；氟康唑19 mm以上敏感（相應(yīng) MIC值≤8），15－18劑量依賴(lài)性敏感（相應(yīng) MIC值16－32），14 mm以下耐藥（相應(yīng)MIC值≥64），以24 h結(jié)果為該藥物判定時(shí)間，質(zhì)控菌株ATCC22019（標(biāo)準(zhǔn)菌種購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚病研究所）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，構(gòu)成比、率比較采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 菌群分布

96例念珠病共分離114株念珠菌，其中78例患者分離單一菌株（75例分離白色念珠菌，3例分離非白色念珠菌）；18例患者分離出兩種不同菌種菌株，念珠菌菌種分布詳見(jiàn)表1，其中以白色念珠菌分離71株占62.3%，與其他菌種比較經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），熱帶念珠菌分離15株占13.2%，光滑念珠菌分離12株占10.5%，克柔念珠菌分離9株占7.9%，其他念珠菌分離7株占6.1%。

表1 念珠菌分離株菌群分布（n，%）

2.2 真菌藥敏試驗(yàn)

伊曲康唑?qū)Π咨钪榫拿舾新?9.3%，氟康唑?qū)Π咨钪榫拿舾新?4.6%，經(jīng)卡方檢驗(yàn)分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2＝57.58，P＜0.05），兩藥物對(duì)其他菌種的敏感率詳見(jiàn)表2。

表2 真菌藥敏試驗(yàn)（n，%）

3 討論

念珠菌為口腔的正常菌群屬于條件致病菌，其對(duì)口腔黏膜上皮有較強(qiáng)的粘附性，中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞等均對(duì)念珠菌有殺滅作用，念珠菌對(duì)機(jī)體的毒性取決于代謝產(chǎn)物［2］，口腔念珠菌多屬內(nèi)源性感染，機(jī)體抵抗力下降、口腔菌群失衡均可引起急性、亞急性及慢性感染，易復(fù)發(fā)，部分患者可發(fā)生敗血癥，尤其對(duì)于免疫功能缺陷患者常為致死的重要病因。臨床廣譜抗生素、免疫抑制劑及激素類(lèi)藥物的不合理使用被認(rèn)為是感染發(fā)生的重要因素之一［3］。

口腔念珠菌感染菌株以白色念珠菌為主，在我們研究中白色念珠菌62.3%，與國(guó)內(nèi)一些臨床研究數(shù)據(jù)接近［4－6］，白色念珠菌可分泌磷脂酶、蛋白酶，對(duì)口腔粘膜上皮的蛋白、膠原具有較強(qiáng)的水解作用，可導(dǎo)致上皮細(xì)胞破壞、溶解，粘膜充血、糜爛。目前研究人員發(fā)現(xiàn)［7］，白色念珠菌產(chǎn)生的N－亞甲基苯甲基甲胺具強(qiáng)烈的致癌作用。熱帶念珠菌、光滑念珠菌及克柔念珠菌均有檢出，3種念珠菌種感染構(gòu)成比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均低于白色念珠菌。非白色念珠菌感染在臨床研究報(bào)道逐漸增多，本研究中非白色念珠菌多以白色念珠菌混合感染居多，僅3例非白色念珠菌發(fā)生單獨(dú)感染，其中臨床報(bào)道［8］，非白色念珠菌中以熱帶念珠菌毒力最強(qiáng)，臨床應(yīng)重視熱帶念珠菌引起的感染。CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基對(duì)多菌種的混合感染的鑒別有一定的技術(shù)優(yōu)勢(shì)，相對(duì)于沙保羅瓊脂培養(yǎng)基對(duì)雜菌的抑制作用較強(qiáng)，目前廣泛的應(yīng)用于臨床念珠菌的鑒別［9］。

念珠菌的耐藥現(xiàn)象逐漸引起臨床的關(guān)注，伊曲康唑與氟康唑?yàn)榕R床常見(jiàn)的三唑類(lèi)抗真菌藥物，伊曲康唑作用機(jī)制為高選擇性地抑制真菌細(xì)胞的細(xì)胞色素酶，氟康唑作用機(jī)制為抑制真菌細(xì)胞膜必要成分麥角甾醇合成酶，使麥角甾醇合成受阻，破壞真菌細(xì)胞壁的完整性，本研究中氟康唑?qū)Π咨钪榫拿舾行詢(xún)?yōu)于伊曲康唑，可能與臨床伊曲康唑應(yīng)用較多有關(guān)，長(zhǎng)期用藥過(guò)程中產(chǎn)生的劑量依賴(lài)性敏感現(xiàn)象增多，長(zhǎng)期大劑量的伊曲康唑治療可引起肝損［10］，臨床應(yīng)慎重用藥，并注意治療過(guò)程的肝功能監(jiān)測(cè)，安全用藥。光滑念珠菌與克柔念珠菌對(duì)伊曲康唑耐藥較為嚴(yán)重，因研究標(biāo)本較少，仍需繼續(xù)跟蹤觀察，臨床報(bào)道［11］：克柔念珠菌對(duì)氟康唑天然耐藥，本研究符合上述觀點(diǎn)，未發(fā)現(xiàn)對(duì)氟康唑敏感克柔念珠菌株。

［1］劉 瑩，張曉冬.口腔念珠菌病菌群分布及藥敏試驗(yàn)和臨床療效分析［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2013，27（4）：364.

［2］劉小平，李建武，樊尚榮，等.臨床常見(jiàn)念珠菌對(duì)5種抗真菌藥物的敏感性［J］.中國(guó)醫(yī)院感染學(xué)雜志，2005，15（6）：671.

［3］吳 穎，劉 偉，萬(wàn) 哲，等.氟康唑耐藥的白念珠菌對(duì)唑類(lèi)藥物交叉耐藥實(shí)驗(yàn)［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志，2009，23（3）：148.

［4］陳方淳，林 梅.口腔念珠菌病患者口內(nèi)菌株的檢出和藥敏性觀察［J］.華西口腔醫(yī)學(xué)雜志，2007，25（1）：37.

［5］周曾同，趙 民，朱彩蓮，等.68株臨床分離口腔念珠菌對(duì)4種抗真菌藥的體外藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析［J］.臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志，2006，22（3）：178.

［6］張 程，郝 飛，鐘白玉，等.118株口腔致病念珠菌病原學(xué)特征及藥敏結(jié)果分析［J］.中國(guó)真菌學(xué)雜志，2009，4（2）：87.

［7］李景媛，孫紅英，章強(qiáng)強(qiáng).萎縮糜爛型口腔扁平苔蘚患者不同基因型白色念珠菌的藥敏研究［J］.上?？谇会t(yī)學(xué)，2011，20（3）：300.

［8］陳臘梅，徐永豪，于秀娟，等.臨床分離161株念珠菌菌種鑒定及氟康唑藥敏試驗(yàn)分析［J］.中國(guó)真菌學(xué)雜志，2008，3（3）：138.

［9］黃曉燕，劉海英，王露霞，等.干擾CHROMagar假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基結(jié)果的細(xì)菌分析［J］.臨床檢驗(yàn)雜志，2006，24（2）：145.

［10］張 波.氟康唑與伊曲康唑治療口腔白色念珠菌病療效比較［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，6（1）：83.

［11］陳晉蓉.口腔念珠菌病的臨床用藥［J］.中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2013，7（5）：61.