B細胞血液腫瘤患者外周血CD40、CD154的表達及意義

謝治軍 薛重重 楊麗萍 黃繼賢 韋 湘 廖建軍

粵北人民醫(yī)院血液內科，廣東韶關 512026

B細胞血液腫瘤患者外周血CD40、CD154的表達及意義

謝治軍 薛重重 楊麗萍 黃繼賢 韋 湘 廖建軍

粵北人民醫(yī)院血液內科，廣東韶關 512026

目的分析B細胞血液腫瘤外周血淋巴細胞CD40、CD154表達率的特點。方法28例B細胞血液腫瘤患者分為多發(fā)性骨髓瘤（Multiple Myeloma，MM）17例，B細胞性非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）11例；選取30例健康體檢人員作為對照組。應用流式細胞術檢測B細胞血液腫瘤患者外周血淋巴細胞（Peripheral Blood Lymphocytes，PBL）CD40、CD154的表達率。結果①MM組：CD40表達率為（17.50±8.32）%，CD154表達率為（1.00±3.26）%；B-NHL組：CD40表達率為（29.84±15.61）%，CD154表達率為（2.01±0.59）%；對照組：CD40表達率為（6.48±3.34）%，CD154表達率為（3.25±1.04）%。②化療后B-NHL患者外周血淋巴細胞CD40表達低于化療前,P＜0.05。③MM患者III期組PBLCD40表達率高于I～II期組,P＜0.05。B-NHL患者PBL CD154表達率III～IV期低于I～II期組,P＜0.05。結論①MM患者、B-NHL患者均存在PBL CD40高表達，B-NHL患者同時存在PBL CD154低表達；CD40高表達提示MM預后差，CD154低表達與B-NHL預后有關。②化療降低了B-NHL患者PBL CD40表達率。為臨床上進行B細胞血液腫瘤診斷與治療提供一定的依據(jù)。

B細胞；血液腫瘤；CD40；CD154

大部分的 B淋巴細胞血液腫瘤表達 CD40分子，CD40、 CD154與腫瘤細胞生物學意義非常復雜，國內外有關其與實體腫瘤和B細胞血液腫瘤的表達的研究眾多，但結果不盡相同[1-2]。

鑒于上述情況該課題將就這一問題進行探討，初步了解CD40、CD154與B細胞血液腫瘤發(fā)生、發(fā)展的關系，為臨床B細胞血液腫瘤患者治療時機、方法及預后評估依據(jù)，以2011年7月—2013年3月的28例B淋巴血液腫瘤患者為研究對象，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

粵北人民醫(yī)院血液內科收治的28例B淋巴細胞血液腫瘤患者，男18例，女10例，年齡39～81歲。28例B淋巴細胞血液腫瘤患者張之南主編《血液病診斷和療效標準》[3]分兩組：MM組17例，其中男11例，女6例，按照Durie和Salmon分期標準分為I～II期8例，III期9例；B-NHL組11例，其中男7例，女4例，按照Ann/Arbor制定的分期標準，分為 I～II期4例，III～IV期 7例。 對照組為該院門診體檢健康人員，男19例，女11例，年齡25～67歲。

1.2 方法

1.2.1 主要儀器、試劑 FACS-Calibuer流式細胞儀、紅細胞裂解液（美國Becton-Dickinson(BD)公司）；ROCHE 7600全自動生化分析儀（美國羅氏公司）；流式細胞熒光標記抗體CD45-Per-CP、CD40-PE、CD145-PE，流式細胞熒光標記抗體陰性對照為IgG1-PE和IgG1-FITC（美國Beckman公司）。

1.2.2 CD40、CD145檢測 空腹8 h后外周靜脈采血 2 mL入EDTA抗凝管 （安徽赫爾生物醫(yī)學檢驗科技有限公司），混勻，EPICS-XL型流式細胞儀 （Beckman-Coulter公司）進行CD40、CD154熒光抗體標記檢測。檢測鼠Ig G1陰性對照，并以陰性對照為對照標準檢測CD40、CD154的百分比，分析數(shù)據(jù)并打印出二維散點圖，以熒光抗體染色陽性的細胞百分數(shù)記錄結果。

1.3 統(tǒng)計方法

使用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計與分析，計量資料用均數(shù)±標準差()表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，計數(shù)資料比較采用配對t檢驗。

2 結果

2.1 B細胞血液腫瘤患者PBL CD40、CD154表達情況

MM組PBL CD40表達水平明顯高于對照組 （t=3.018,P＜0.01），但其CD145表達水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（t= 0.803,P＞0.05）；B-NHL組PBL CD40表達水平明顯高于對照組（t=7.882,P＜0.01），其CD145表達水平低于對照組 （t=2.401,P＜0.05）。見表1。

表1 CD40、CD154在B細胞血液腫瘤組和正常對照組的表達水平[(),%]

表1 CD40、CD154在B細胞血液腫瘤組和正常對照組的表達水平[(),%]

組別CD40CD145 MM組（n=17）B-NHL組（n=11）對照組（n=30）17.50±8.31 29.84±15.60 6.48±3.34 3.00±1.00 2.41±0.58 3.25±1.04

2.2 B細胞血液腫瘤患者化療前后PBL CD40、CD154表達水平的變化

MM組有7例患者，B-NHL組有5例患者進行化療，化療前后僅有B-NHL患者PBL CD40表達差異有統(tǒng)計學意義（t=2.997, P＜0.05），化療后表達水平低于化療前，其余表達水平化療前后無明顯變化。見表2。

表2 化療前后外周血淋巴細胞CD40、CD154表達水平()

表2 化療前后外周血淋巴細胞CD40、CD154表達水平()

項目CD40 CD154 MM組 化療前（n=7）化療后（n=7）B-NHL組化療前（n=5）化療后（n=5）18.42±10.54 13.65±5.90 37.35±11.72 19.74±5.94 2.72±1.90 2.62±2.01 1.21±2.05 2.33±2.01

2.3 MM和B-NHL患者PBL CD40、CD154表達水平在不同疾病分期的比較

MM患者PBL CD40表達率在I～II期組和III期組間差異有統(tǒng)計學意義，見表3。B-NHL患者PBL CD154表達率在I～II期組、III～IV期組比較差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，見表4。

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表達水平()

表3 MM患者各分期PBLCD40、CD154表達水平()

注：△表示兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。

組別（MM）CD40CD154 I～II期組（n=8）III期組（n=9）tP 16.15±5.26 28.45±10.10 2.612 0.045△2.97±2.91 1.67±2.06 1.952 0.163

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表達水平()

表4 B-NHL各分期PBL CD40、CD154表達水平()

注：△表示兩組間比較差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05。

組別（B-NHL）CD40CD154 I～II期組（n=4）III～IV期組（n=7）tP 21.77±7.23 34.46±17.64 1.671 0.131 2.54±1.68 1.21±0.17 2.563 0.044△

3 討論

國內外關于CD40及CD154在惡性腫瘤患者的臨床研究已有報道，有文獻[4-7]報告在卵巢癌、小細胞肺癌、胃癌和乳腺癌等多種腫瘤患者的外周血和腫瘤局部CD40表達率增加。該研究中B淋巴細胞血液腫瘤患者PBL CD40表達率高于健康人群，這與國內外研究數(shù)據(jù)基本一致[8-10]，另外，該研究還提示B-NHL患者同時存在PBL CD154低表達。

該研究中化療后B-NHL患者PBL CD40表達率低于化療后，B-NHL患者經(jīng)化療后PBL淋巴細胞亞群中B淋巴細胞百分比下降，B-NHL組的PBL CD40表達率與B細胞百分比存在正相關性，故其化療后PBLCD40表達率下降，但MM患者PBL CD40化療后表達率偏低，但與化療前差異無統(tǒng)計學意義，這可能與MM患者所采用的化療強度較低，而化療后PBL淋巴細胞亞群中B淋巴細胞百分比下降不明顯有關。

該研究提示MM預后與臨床分期密切相關，晚期的MM患者腫瘤負荷較高，外周血所含的骨髓瘤細胞較高，故CD40表達較高。B-NHL分期與CD154低表達有關，CD40-CD154結合可激活體內特異性免疫反應系統(tǒng)，參與機體的體液免疫和細胞免疫反應，而在 CD154與 CD40結合后，CD154的表達率升高，CD154聯(lián)合IL-4、CpG可以高效促BCP-ALL細胞表面免疫分子的表達，從而有效提高機體T淋巴細胞細胞毒性效應從而產(chǎn)生抗腫瘤效應[11-12]。如上所述，CD154的低表達反應了CD154與CD40結合率較低，CD154與CD40結合率較低，導致機體的免疫缺陷，該研究中III～IV期組的B-ALL患者CD154表達率明顯低于I～II期組。

綜上所述，CD40高表達與MM預后有關，CD154低表達與B-NHL預后有關，CD40、CD154表達水平可以作為MM、B-NHL這兩種B細胞血液腫瘤預后評估的有效指標之一。增加膜CD154效應的相關抗體有望在B細胞血液腫瘤治療中取得成效，這為臨床B細胞血液腫瘤患者臨床綜合治療提供了參考。

[1]張維紅，于津浦，曹水，等.CD40/CD40L交聯(lián)在CD4+T細胞誘導腫瘤細胞凋亡中的機制研究[J].中國免疫學雜志，2007，23(10):890-894.

[2]劉占云,王艷煜,俞嬌,等.可溶性CD40在部分B細胞淋巴血液腫瘤患者中的表達及臨床意義[J].診斷學理論與實踐,2011,11(6):620-622.

[3]張之南,沈悌.血液病診斷及療效標準[M].3版.北京:北京科學出版社,2007:106-134.

[4]蔣國勤，吳斌，劉燕.CD40配基化對乳腺癌細胞株和血管內皮細胞的作用[J].中國癌癥雜志，2005，15(5):435-437.

[5]范開席，申洪明，孫小鈞，等.CD40在胃癌中的表達及其臨床意義[J].腫瘤學雜志，2007，13(6):471-473.

[6]盧旭東，朱曉蘭，陳成，等.CD40信號通過TNFRⅠ途徑抑制肺癌細胞增殖的研究[J].癌癥，2009，28(1):20-23.

[7]穆傳勇，陳成，龐雪芹.非小細胞肺癌組織和患者外周血中CD40的表達及其臨床意義[J].蘇州大學學報:醫(yī)學版,2012,32(6):841-844.

[8]Law CL,Grewal IS.Therapeutic interventions targetingCD40L(CD154) and CD40:the opportunities and challenges[J].Adv Exp Med Biol, 2009,647:8-36.

[9]孫宏治，宮建，王巍,等.乳腺癌患者外周血CD40、CD40L的表達及意義[J].山東醫(yī)藥，2011，51（37）：73-74.

[10]汪萍,張冬青.B淋巴細胞刺激因子與多發(fā)性骨髓瘤的關聯(lián)性分析[J].診斷學理論與實踐,2009,8(4):449-452.

[11]Messmer D,Kipps TJ.CD154 gene therapy for human Bcell malignancies[J].Ann N Y Acad Sci,2005,1062:51-60.

[12]沈維娜.D40、CD40L和sCD40在B細胞惡性血液腫瘤中的作用[J].上海交通大學學報,2010,30(10):1288-1290.

Expression and Significance of CD40,CD154 in Patients with B-cell Hematologic Malignancies

XIE Zhijun XUE Zhongzhong YANG Liping HUANG Jixian WEI Xiang LIAO Jianjun
Blood Internal Medicine,Yuebei People's Hospital,Shaoguan,Guangdong Province,512026,China

ObjectiveTo analyze the characteristics of expression rate of peripheral blood lymphocytes(PBL)CD40 and CD154 in patients with B-cell hematologic malignancies.Methods28 cases of patients with B-cell hematologic malignancies were divided into 17 cases with multiple myelom(MM)and 11 cases with B-cell non-Hodgkin's lymphoma(B-NHL);30 healthy people underwent healthy examination were selected as the control group.Flow cytometry was used to detect the expression rate of PBL CD40 and CD154 of patients with B-cell hematologic malignancies.Results1.MM group:the expression rate of CD40 was(17.50 ±8.32)%,and that of CD154 was(1.00±3.26)%;B-NHL group:the expression rate of CD40 was(29.84±15.61)%,and that of CD154 was (2.01±0.59)%;Control group:the expression rate of CD40 was (6.48±3.34)%,and that of CD154 was (3.25± 1.04)%.2.The expression rate of PBL CD40 of B-NHL patients after chemotherapy was lower than that before chemotherapy,P＜0.05.3.PBL CD40 expression rate of stage III subgroup in MM group was higher than that of stage I and stage II subgroups,P＜0.05.PBL CD154 expression rate of stage III and IV subgroups in B-NHL group was lower than that of stage I and II subgroup, P＜0.05.Conclusion1.Patients with MM and patients with B-NHL had high expression of PBL CD40,and B-NHL patients also had low expression of PBL CD154;high expression of CD40 was associated with poor prognosis in patients with MM;low expression of CD154 was associated with poor prognosis in patients with B-NHL.2.Chemotherapy reduced the expression rate of PBL CD40 in patients with B-NHL.It provides a basis for the diagnosis and treatment of B-cell hematologic malignancies.

B-cell;Hematologic malignancies;CD40;CD154

R732

A

1674-0742（2014）08（b）－0009-03

2014-05-06）

謝治軍（1981-），男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：血液病。