新疆石河子地區(qū)對(duì)豬圓環(huán)病毒2型抗體水平的檢測(cè)與分析

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（1．石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子　832003；2．新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子總場(chǎng)北泉鎮(zhèn)獸醫(yī)站，新疆石河子　832012）

新疆石河子地區(qū)對(duì)豬圓環(huán)病毒2型抗體水平的檢測(cè)與分析

王禮偉1，賈義平1，屈勇剛1，王葦1，梁晏2，楊蓓1

（1．石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，新疆石河子832003；2．新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第八師石河子總場(chǎng)北泉鎮(zhèn)獸醫(yī)站，新疆石河子832012）

為了解新疆石河子周邊豬場(chǎng)豬圓環(huán)病毒2型（PCV）免疫抗體整體水平，并制定合理有效的免疫程序，采集石河子周邊13個(gè)養(yǎng)殖場(chǎng)共726份豬的血清，采用間接ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）試劑盒進(jìn)行分析。檢測(cè)結(jié)果表明，整體豬群陽性率整體水平為98.08%，豬場(chǎng)的抗體水平均在80%以上，抗體水平為100%的豬場(chǎng)占豬場(chǎng)總數(shù)的61.54%。同時(shí)，種公豬、母豬、育肥豬、種公豬的抗體的整體水平均達(dá)到95%以上，而育肥豬抗體水平最低，為95.15%。該結(jié)果能夠進(jìn)一步了解石河子周邊地區(qū)豬場(chǎng)圓環(huán)病毒抗體的免疫整體水平，為制定合理的治療措施和免疫程序提供參考。

圓環(huán)病毒2型；ELISA；抗體水平；陽性率

豬圓環(huán)病毒感染是由圓環(huán)病毒2型（PCV-2）所引起一種傳染病。PCV2感染豬后可引發(fā)仔豬斷奶后多系統(tǒng)衰弱綜合癥、皮炎和腎病綜合癥、增生性壞死間質(zhì)肺炎和繁殖障礙等疾病[1]。1997年加拿大和新西蘭學(xué)者初次發(fā)現(xiàn)這種疾病，目前已經(jīng)遍布世界養(yǎng)豬國(guó)家和地區(qū)，并造成了巨大經(jīng)濟(jì)損失，引起了國(guó)際獸醫(yī)界的高度重視。我國(guó)于2001年首次分離到這種病毒，現(xiàn)已在我國(guó)豬群中廣泛流行。由于該病除了自身帶來的嚴(yán)重危害外，還導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制，造成繼發(fā)或并發(fā)性的臨床問題，給養(yǎng)殖戶帶來了嚴(yán)重困擾和巨大經(jīng)濟(jì)損失[2]。

近年來，隨著我國(guó)的養(yǎng)殖業(yè)朝著規(guī)?；姆较虬l(fā)展，新疆石河子地區(qū)的養(yǎng)豬行業(yè)水平也有了極大提升。但是，在常見的傳染病防治上，仍然有很多問題，嚴(yán)重制約著當(dāng)?shù)仞B(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展。為進(jìn)一步了解石河子地區(qū)圓環(huán)病毒的感染情況，為該病流行病學(xué)調(diào)查、監(jiān)控提供初步的數(shù)據(jù)以及為養(yǎng)殖戶提供合理的免疫程序，本試驗(yàn)采用間接ELISA的檢測(cè)方法，對(duì)采集的血清進(jìn)行抗體檢測(cè)、分析，希望對(duì)該病的防制提供一定的參考與幫助。

1　材料和方法

1.1材料

1.1.1樣品來源。2013年10月至2014年1月期間，采集石河子轄區(qū)內(nèi)13個(gè)已經(jīng)免疫過PCV2型疫苗的豬場(chǎng)（母豬存欄量在400頭及以上的2個(gè)、100頭～400頭的豬場(chǎng)7個(gè)、100頭以下的4個(gè)）不同類別的豬群血清共726份。其中，種公豬血清110份、母豬血清254份、保育豬血清227份、仔豬血清135份。通過前腔或耳源靜脈進(jìn)行采血，血液靜置一段時(shí)間后收集析出的血清，將盛有血清的EP管放置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2主要試劑和儀器。豬圓環(huán)病毒ELISA抗體檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自武漢科前生物制品有限責(zé)任公司，批號(hào)：130906）、5ml獸用一次性采血盛血器，自動(dòng)酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、平板震蕩儀等。

1.2方法

1.2.1樣品檢測(cè)。根據(jù)試劑盒上的操作步驟，先對(duì)待檢血清進(jìn)行一定比例的稀釋，再將抗原包被板進(jìn)行洗滌。將剛才稀釋好的血清樣品按照對(duì)應(yīng)的順序加入到洗滌好的抗原包被板中，同時(shí)按照要求設(shè)定陰陽對(duì)照組各2孔，在震蕩儀上震蕩均勻后，置于37℃的溫箱中溫浴30min。然后，棄去抗原包被板中的混合液，對(duì)抗原包被板進(jìn)行再次的洗滌數(shù)次，并在吸水紙上用力拍干后，每孔再次加入羊抗豬酶標(biāo)二抗，同樣進(jìn)行37℃溫浴30min后，隨后棄掉混合液，再次對(duì)抗原包被板進(jìn)行洗滌拍干。將洗滌拍干好的抗原包被板中每孔加入底物A、底物B后震蕩混勻后，室溫避光顯色10min，最后，每孔加入終止液。在10min內(nèi)，用酶標(biāo)儀在630nm的波長(zhǎng)下對(duì)樣品的OD值進(jìn)行測(cè)定，根據(jù)所測(cè)OD值的大小，進(jìn)行樣品抗體水平的判斷。

1.2.2結(jié)果判定。試驗(yàn)成立的前提條件是陽性對(duì)照孔平均OD630的值≥0.7，陰性對(duì)照孔平均OD630的值＜0.3。根據(jù)酶標(biāo)儀測(cè)定OD值的大小，若樣品OD630值>0.42，判定為抗體陽性；樣品OD630值介于0.38到0.42之間，判定為可疑；樣品OD630值<0.38，判定為抗體陰性。

1.2.3統(tǒng)計(jì)分析。利用offce辦公軟件對(duì)試驗(yàn)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)并分析。

2　結(jié)果

2.1豬場(chǎng)圓環(huán)病毒免疫抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

表1　13個(gè)已免疫豬場(chǎng)圓環(huán)病毒免疫抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

由表1可知，A～M這13個(gè)豬場(chǎng)之間的抗體水平整體水平較好，但是也存在一定的差異，抗體陽性率最高的可達(dá)到100%，抗體水平最低的豬場(chǎng)陽性率為80.00%，抗體水平達(dá)到100%以上的有8個(gè)，占13個(gè)豬場(chǎng)的61.54%，說明當(dāng)?shù)刎i場(chǎng)對(duì)該病的重視，整體效果良好。經(jīng)過初步統(tǒng)計(jì)，石河子周邊地區(qū)抗體陽性率水平為98.08%，抗體的均值為3.49。同時(shí)，通過變異系數(shù)的情況，各個(gè)豬場(chǎng)抗體水平的離散程度也有一定的區(qū)別，其中，H豬場(chǎng)的變異系數(shù)最小，僅為0.15，數(shù)據(jù)的整體水平比較平穩(wěn)，而G豬場(chǎng)的變異系數(shù)較大，為0.62，抗體水平也低為80.00%，需要引起重視。

表2　4種豬群圓環(huán)病毒免疫抗體ELISA檢測(cè)結(jié)果

2.2不同豬群的抗體水平

通過表2的數(shù)據(jù)分析可知，不同豬群之間的抗體整體水平良好，均值為98.08%，其中，種公豬和母豬的抗體水平最高，均為100.00%，其次仔豬的97.78%和育肥豬的95.15%，試驗(yàn)說明仔豬和育肥豬的抗體水平相對(duì)偏低，需要及時(shí)的補(bǔ)免，加強(qiáng)斷奶后抗體的水平。

3　討論

3.1整體豬群抗體陽性率結(jié)果分析

通過對(duì)石河子13個(gè)豬場(chǎng)血清中圓環(huán)病毒抗體的檢測(cè)，試驗(yàn)結(jié)果表明，該地區(qū)養(yǎng)殖戶對(duì)豬圓環(huán)病毒的防控比較重視，抗體整體水平較高，一般以上的豬場(chǎng)的抗體水平高達(dá)100.00%，即使最低的豬場(chǎng)水平也達(dá)到了80.00%，相對(duì)于河南、湖南等多個(gè)地區(qū)免疫抗體的平均水平而言，石河子豬場(chǎng)圓環(huán)病毒抗體水平總體水平較高，免疫程序取得了良好的結(jié)果[3-4]。但是，個(gè)別豬場(chǎng)的仍然不容樂觀，應(yīng)當(dāng)引起我們從業(yè)人員的高度重視，鑒于該病嚴(yán)重的危害性，我們應(yīng)該加強(qiáng)控制力度，及時(shí)的做好預(yù)防措施及對(duì)不合理的免疫程序進(jìn)行調(diào)整[5]。

3.2不同類別豬群抗體陽性率結(jié)果分析

通過對(duì)種公豬、母豬、保育豬及仔豬的抗體水平的檢測(cè)，我們發(fā)現(xiàn)各類豬群整體的水平較高，抗體水平的均值高達(dá)98.08%。其中，種公豬和母豬的免疫抗體水平都為100.00%，這可能是和這兩種豬群的免疫系統(tǒng)發(fā)育完善，免疫能力較強(qiáng)或多次免疫的結(jié)果有關(guān)，能夠抵抗圓環(huán)病毒的感染。而仔豬和育肥豬的抗體分別為97.78%、95.15%，其中仔豬和育肥豬的抗體相對(duì)較低，可能的是母源抗體的不足，機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)育不足等因素有關(guān)，這種情況的出現(xiàn)和宋永奇等對(duì)河南地區(qū)的部分豬場(chǎng)檢測(cè)結(jié)果相一致[6]。針對(duì)母源抗體不足的情況，我們可以通過ELISA對(duì)不同日齡的仔豬進(jìn)行細(xì)化檢測(cè)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)仔豬抗體水平不足時(shí)候，及時(shí)地對(duì)仔豬進(jìn)行首免，或者二免，維持抗體在一定合理的范圍。當(dāng)然，由于本次試驗(yàn)采集的樣本數(shù)目的限制，仍然有很多不確定影響因素待于進(jìn)一步研究[7]。

根據(jù)本次對(duì)石河子周邊地區(qū)13個(gè)已經(jīng)免疫的豬場(chǎng)抗體檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，我們初步得到豬圓環(huán)病毒抗體水平的概況。通過分析，可以看出該地區(qū)整體抗體水平相對(duì)良好。但是，鑒于我國(guó)各地豬群普遍存在PCV2的感染情況，建議相關(guān)從業(yè)人員對(duì)該病的流行引起高度的重視，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理水平，提高衛(wèi)生消毒意識(shí)，提高豬群機(jī)體自身免疫抗體水平，做到防患于未然[8]。

[1]陳溥言.獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2006：231-233．

[2]DupoutK，NielsensO，BaekboP，etal．Genomic analysisofPCV2isolatesfromDanisharchivesandacurrentPMWScase-controlsupportsashiftingenotypeswith time[J]．VetMicrbiol，2008，128（1/2）：56-64．

[3]胡慧，王亞賓，陳麗穎，等．河南地區(qū)豬圓環(huán)病毒2型感染的血清流行病學(xué)調(diào)查[J]．畜牧與獸醫(yī)，2010，42（10）：71-73．

[4]盧寄軍，王祝榮，張進(jìn).湖南省豬圓環(huán)病毒2型流行病學(xué)調(diào)查[J]．中國(guó)動(dòng)物檢疫，2012，29（2）：42-43．

[5]孟紀(jì)萍，王建梅，武曉虎，等．豬圓環(huán)病毒2型和豬瘟病毒抗體檢測(cè)和分析[J]．中國(guó)動(dòng)物檢疫，2012，29（12）：39-40．

[6]宋永奇，李榮譽(yù)，申艷敏，等．豬場(chǎng)母豬和仔豬圓環(huán)病毒2型感染情況調(diào)查[J]．中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012．39（4）：200-203．

[7]王忠田，楊漢春，郭鑫．豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J]．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2004．40（3）：33-35．

[8]韓雪，蔡林，倪建強(qiáng)，等．2009年我國(guó)豬群圓環(huán)病毒2型感染情況調(diào)查[J]．中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，32（7）：941-944．

Surveillance of Porcine Circovirus-2 Antibody in Shihezi Area in Xinjiang

WangLiwei1，JiaYiping1，QuYonggang1，WangWei1，LiangYan2，YangBei1
（1.CollegeofAnimalScience&Technology，ShiheziUniversity，Shihezi，Xinjiang832003；2.BeiquanTownVeterinaryStation，EighthAgriculturalDivisionofXinjiangProductionandConstructionCorps，Shihezi，Xinjiang832003）

Inordertounderstandtheimmuneantibodylevelsofporcinecircovirus-2（PCV2）inpigfarmssurroundingShihezi，Xinjiangandmakereasonableandeffectiveimmunizationprograms，726serumsampleswerecollectedfrom13farmsandtestedforantibodyusingindirectELISA（enzyme-linkedimmunosorbentassay）kit.The resultsshowedthattheoverallpositiverateinpigswas98.08%andtheantibodylevelsofallthefarmsweremorethan 80%；thefarmswith100%antibodylevelaccountedfor61.54%ofallfarms.Theoverallantibodylevelsinboars，sows，fatteningpigs，pigletswereallover95%；thefatteningpigshadthelowestantibodylevelofonly95.15%.The resultswereusefultounderstandtheimmuneantibodylevelofporcinecircovirusinShiheziregionandtoprovidereferencesinworkingoutreasonablecontrolmeasuresandimmunizationprograms.

porcinecircovirus2（PCV2）；ELISA；antibodylevels；positiverate

S855.3

B< class="emphasis_bold">文章編號(hào)：文章編號(hào)：

文章編號(hào)：1005-944X（2014）08-0049-03

屈勇剛