HPLC法測定舒心糖漿中阿魏酸的含量

張美娟

摘 要：目的：采用高效液相色譜法測定舒心糖漿中阿魏酸的含量。方法：采用美國Waters公司C18 色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動相；檢測波長為321nm。結(jié)果：阿魏酸在40～320μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為99.3%。結(jié)論：所建立的方法分離效果好，靈敏、準(zhǔn)確、簡便，適宜舒心糖漿中阿魏酸的測定。

關(guān)鍵詞：舒心糖漿；阿魏酸；高效液相色譜法

舒心糖漿方劑出自《傷寒論》，由黨參、黃芪、紅花、當(dāng)歸、川芎、三棱、蒲黃組成。舒心糖漿具有補益心氣、活血化瘀、改善心功能的功效。舒心糖漿常用于冠心病、心絞痛、胸痛胸悶、氣短、乏力等。當(dāng)歸別名為干歸、馬尾當(dāng)歸、秦哪、馬尾歸、當(dāng)歸身、涵歸尾、土當(dāng)歸等。當(dāng)歸具有補血、活血、調(diào)經(jīng)止痛、潤燥滑腸等功效。當(dāng)歸常用于癥瘕結(jié)聚、崩漏、虛寒腹痛、肌膚麻木、腸燥便難等癥。川芎具有活血行氣，祛風(fēng)止痛的功效，常用于月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后瘀滯腥痛、胸脅疼痛、頭痛眩暈、跌打損傷等。阿魏酸為川芎和當(dāng)歸的主要成分。阿魏酸化學(xué)名稱為4-羥基-3-甲氧基肉桂酸，異名咖啡酸-3-甲基醚，3-O-甲基咖啡酸。阿魏酸主要檢測法有薄層洗脫比色法、薄層顯色掃描法、直接掃描法及高效液相法[1-8]。本文用高效液相法對舒心糖漿中的阿魏酸進(jìn)行了含量測定。

1 儀器與試劑

SCQ-1000B數(shù)控加熱超聲波清洗機(jī)（上海聲彥超聲儀器有限公司）； WP-UP-Ⅲ-20精密型實驗室專用超純水機(jī)（四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司 ）；CC-100分析型色譜柱溫箱（成都納杰科技有限公司）； LC-810液相色譜儀；（北京北分興宇儀器有限公司）；320 XT 電子分析天平（ 上海精科天美貿(mào)易有限公司）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 液相色譜條件

依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果，確定色譜條件如下：色譜柱為美國Waters公司C18色譜柱（3.9mm×150mm，5μm）；甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動相；檢測波長為321nm；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃。理論板數(shù)按阿魏酸峰計算應(yīng)不得低于2000。

2.2 提取方法確定

將藥液通過大孔樹脂，分別采用30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脫，結(jié)果表明采用70%乙醇洗脫效果最好，所以選擇70%乙醇洗脫。

2.3 供試品溶液的制備

將藥液通過大孔樹脂，采用10倍柱體積70%乙醇洗脫，減壓回收乙醇，殘渣用甲醇溶解并稀釋至25毫升，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.4 對照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對照品約1mg，置50mL容量瓶中，用流動相超聲波振蕩溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含阿魏酸20μg）。

2.5 陰性干擾試驗

取蒲黃以布袋包好，同黨參、黃芪、三梭加水煎煮二次，第一次 2小時，第二次煎煮 1.5小時后，再加入紅花煎煮30分鐘，合并濾液，濾過，濾液濃縮至適量，加入蔗糖650g和防腐劑適量，煮沸使溶解，濾過，加水至1000ml，攪勻，即得陰性制劑。將陰性制劑通過大孔樹脂采用10倍柱體積70%乙醇洗脫，減壓回收乙醇，殘渣用甲醇溶解并稀釋至25毫升，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，按色譜條件測定。結(jié)果表明：在選定條件下測得的陰性液吸收曲線在與阿魏酸相同保留時間處不存在吸收峰，說明此方法具有較強(qiáng)的專屬性。

2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為40、80、160、200、240、280、320μg·mL-1的對照品溶液，分別精密吸取10μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算回歸方程。試驗表明，阿魏酸對照品在40～320μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.7 精密度試驗

精密吸取阿魏酸對照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.81%。結(jié)果表明，本實驗精密度良好。

2.8 重現(xiàn)性試驗

分別取同批次舒心糖漿樣品6份，分別制備成供試品溶液，按色譜條件測定含量，并計算樣品的RSD值。結(jié)果RSD值為0.52%，表明此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.9 穩(wěn)定性試驗

取供試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10h精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)性測定，阿魏酸峰面積積分值的RSD為0.66%。結(jié)果表明供試品溶液中阿魏酸至少在10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.10 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分別精密添加一定量的阿魏酸對照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為99.3%，RSD為0.62%。

2.11 耐用性試驗

用依利特hypersil BDS C18 色譜柱（4.6*250*5u ）、奧泰公司C18色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）測定同一樣品，峰形及柱效均良好。表明不同的色譜柱測定時，色譜行為無顯著性差異。

2.12 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定舒心糖漿三批樣品中阿魏酸的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為25μg·mL-1、23μg·mL-1、26μg·mL-1。

3 結(jié)束語

分別考察0.02 mol/L醋酸銨-0.1%酸酸水溶液-乙腈（20∶60：20），甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70），甲醇-水-三乙胺（75：25：0.1）不同比例的流動相，結(jié)果以甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動相，供試品各峰分離效果最好，故選用甲醇-冰醋酸-水（30：0.01：70）為流動相。本方法是一種簡便、準(zhǔn)確、安全的測定舒心糖漿含量的方法。舒心糖漿中阿魏酸的含量不少于20 μg·mL-1。

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