Raptor和Rictor在慢性前列腺炎和前列腺癌的表達及意義

陳先國，潘騰飛，劉 祎，蘇 陽，梁朝朝

Raptor和Rictor在慢性前列腺炎和前列腺癌的表達及意義

陳先國，潘騰飛，劉 祎，蘇 陽，梁朝朝

免疫組化檢測Raptor和Rictor在慢性前列腺炎（CP）及前列腺癌（PCa）中的表達。Raptor和Rictor在CP和PCa組織中均有不同程度的表達；與CP組織比較，PCa中Raptor和Rictor的表達均明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Raptor和Rictor在CP惡變?yōu)镻Ca過程中具有重要的作用，為PCa的預防和分子靶向治療提供理論依據。

慢性前列腺炎；前列腺癌；Raptor；Rictor

慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）是男性常見病和多發(fā)病，CP由于發(fā)病機制尚不明確，在某些不確定因素的存在下，前列腺處于長期或過度反應時，炎癥反應無法轉變成內環(huán)境穩(wěn)定狀態(tài)［1］，會引起機體的嚴重后果。前列腺癌（prostate cancer，PCa）是西方國家男性最常見的惡性腫瘤，在美國其發(fā)病率居男性腫瘤的第一位［2］。目前，PCa的病因仍然不清，可能與遺傳、年齡、生活方式、環(huán)境因素等有關。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）有2種不同的復合體mTORC1和mTORC2，mTORC1主要由mTOR和mTOR調節(jié)相關蛋白（Raptor）組成［3］，mTORC2主要由mTOR和雷帕霉素不敏感性mTOR（Rictor）［4］組成。mTOR在調節(jié)機體的代謝、生長、增殖和細胞周期等過程中起關鍵作用。目前發(fā)現約20%的癌癥由慢性感染或炎癥所引發(fā)，其中包括肝癌、結腸癌、胃癌以及膀胱癌等［1］。最近研究［5］顯示CP在PCa發(fā)生發(fā)展中起重要作用。該文就mTOR復合體在CP和PCa的表達做一研究，為PCa的預防和治療提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料及主要試劑CP 42例和PCa 38例標本均來自安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院病理科存檔蠟塊，所有病理結果均由我院病理科2位資深醫(yī)師進行診斷。Raptor及Rictor兔抗人抗體購自美國Cell Signaling公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化 采用SP法，染色步驟按說明書進行：組織切片脫蠟、水化；PBS洗3次，每次5 min；微波爐抗原修復；H2O2去除內源性過氧化物酶活性，PBS洗3次，每次5 min；滴加兔抗人Raptor及Rictor抗體（1∶500），37℃恒溫孵育1h；PBS沖洗3次，每次5 min；加生物素標記二抗，37℃恒溫孵育1h；PBS沖洗3次，每次5 min；DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片、鏡檢。

1.2.2 結果判斷 在高倍鏡下，對每張切片隨機選擇10個視野，凡細胞膜及細胞質出現棕黃色顆粒的細胞計為陽性細胞。將陽性細胞所占百分比進行評分，0分：0%；1分：＜10%；2分：10%～50%；3分：＞50%；將細胞染色強弱進行評分，0分：細胞質/細胞膜上無棕黃色顆粒；1分：細胞質/細胞膜上有淡棕黃色顆粒；2分：細胞質/細胞膜上有染色較清晰的棕黃色顆粒，染色介于強弱之間；3分：細胞質/細胞膜上有大量深棕黃色顆粒。綜合上述結果，將染色強度定為4級：0分為陰性；2分為弱陽性；3～4分為陽性；5～6分為強陽性。

1.3 統(tǒng)計學處理采用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行分析，等級資料采用秩和檢驗。

2 結果

2.1 Raptor在CP和PCa組織中的表達免疫組化顯示Raptor在CP或PCa中的細胞質/細胞膜表達為棕黃色顆粒。Raptor在CP組織中陰性表達9例、弱陽性表達24例、陽性表達7例、強陽性表達2例；在PCa組織中陰性表達0例、弱陽性表達6例、陽性表達11例、強陽性表達21例，Raptor在CP和PCa組織中表達的陽性率分別為78.6%和100.0%；與CP組織比較，Raptor在PCa中的表達明顯升高（P＜0.05）。見圖1。

2.2 Rictor在CP和PCa組織中的表達免疫組化顯示Raptor在CP或PCa中的細胞質/細胞膜表達為棕黃色顆粒。Rictor在CP組織中陰性表達13例、弱陽性表達22例、陽性表達6例、強陽性表達1例；Rictor在PCa組織中陰性表達5例、弱陽性表達7例、陽性表達12例、強陽性表達14例，Rictor在CP和PCa組織中表達的陽性率分別為69.0%和86.8%；與CP組織比較，Rictor在PCa中的表達明顯升高（P＜0.05）。見圖1。

圖1 Raptor、Rictor在CP、PCa組織中的表達 ×400

3 討論

流行病學、組織病理學以及分子生物學研究［6］顯示，CP患者在各種損傷性因素刺激下，可能轉變?yōu)榍傲邢偕掀攘鲎儯╬rostatic intraepithelial neoplasia，PIN），并最終惡變?yōu)镻Ca。Daniels et al［7］發(fā)現CP和PCa的發(fā)生發(fā)展明顯呈正相關。CP患者患有PCa的風險明顯提高，慢性炎癥刺激時間越長，患PCa的風險可能性越高。MacLennan et al［8］發(fā)現約20%的CP患者5年內被確診為PCa，而非CP患者5年內患PCa的僅占6%。這些研究從流行病學上均提示CP促進PCa的發(fā)生發(fā)展。在組織學上，慢性炎癥刺激常常在外周帶前列腺上皮發(fā)生增生性萎縮（proliferative inflammatory atrophy，PIA）［9］，而外周帶也是PCa好發(fā)部位，這些PIA區(qū)域進而進展為PIN和PCa［6］。分子生物學上，有研究［5］表明，炎癥細胞刺激后釋放一些細胞因子，與前列腺上皮細胞DNA相互作用，引起基因變化，如基因重排、點突變和刪除等，最終導致PCa。PCa的發(fā)生可能與微生物感染及其形成的炎癥反應有關，有學者對小鼠進行多次盆底乳酸注射誘發(fā)前列腺炎癥，取組織標本進行HE染色，結果顯示，標本中除炎癥組織外，還觀察到了較為明顯的腺泡上皮增生，類似于人類的PIN。

mTOR是機體炎癥、營養(yǎng)、能量、生長因子等感受器，感受外界的刺激，促進mTOR活化，導致癌癥的發(fā)生。最近研究［10－12］顯示，mTOR復合體調控機體炎癥反應，當炎癥信號刺激機體后，通過mTORC1和mTORC2信號途徑調控下游靶蛋白從而對炎癥產生影響，此外使用mTORC1和mTORC2雙重抑制劑也能明顯減輕炎癥反應，這進一步證實了mTOR調控機體炎癥反應［13］。2013年JCI在線發(fā)表研究［14］成果：IL-6在炎癥轉變?yōu)槟[瘤過程中起關鍵作用，其機制是IL-6結合其亞基GP130而激活mTORC1信號途徑的，使用mTORC1抑制劑后發(fā)現減少了腫瘤的血管生成和細胞增殖。

本研究顯示Raptor和Rictor在CP和PCa組織中均有不同程度的表達。與CP相比，PCa中Raptor和Rictor的表達明顯升高，表明mTOR復合體在CP惡變?yōu)镻Ca過程中發(fā)揮重要作用，mTOR復合體的異?；罨赡苁荘Ca發(fā)生發(fā)展過程中一個早期的分子事件?；蛟S可以解釋Majumder et al［15］的發(fā)現：對mTOR高度活化的轉基因小鼠使用mTOR抑制劑，小鼠的PIN變完全消失。

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AbstarctThe expression of Raptor and Rictor in chronic prostatitis and prostate cancer was examed by immunohistochemical.Raptor and Rictor were differently expressed in chronic prostatitis and prostate cancer；the expression of Raptor and Rictor in prostate cancer was markedlyhigher than chronic prostatitis（P＜0.05）.Raptor and Rictor play important roles chronic prostatitis malignant to prostate cancer，and provide the theory base for the prevention and molecular targeted therapy of prostate cancer.

The expression and significance of mTOR complex in the chronic prostatitis and prostate cancer

Chen Xianguo，Pan Tengfei，Liu Yi，et al
（Dept of Urology，The First Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230022）

chronic prostatitis；prostate cancer；Raptor；Rictor

R 697＋.33

A

1000－1492（2014）04－0545－03

2013－12－20接收

國家自然科學基金（編號：81370856）；教育部博士點基金（編號：20113420110003）；安徽省自然科學基金（編號：1208085MH138）

安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院泌尿外科，合肥 230022

陳先國，男，博士，主治醫(yī)師；梁朝朝，男，教授，主任醫(yī)師，博士生導師，責任作者，E-mail：liang_chaozhao＠163.com