血小板黏附受體GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路研究進(jìn)展

胡 萍綜述 謝如鋒，王志成審校

血小板黏附受體GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路研究進(jìn)展

胡 萍1，2綜述 謝如鋒2，王志成3審校

血小板在生理性止血和病理性血栓形成中起關(guān)鍵作用。血小板黏附受體GPIb-IX-V復(fù)合物能與血管性血友病因子（VWF）、P-選擇素、凝血酶等結(jié)合，在血小板血栓形成的起始階段和凝血過(guò)程中起重要作用。磷脂酶C（PLC）、磷脂酶A2（PLA2）、14-3-3ζ蛋白、細(xì)胞骨架等參與GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路，現(xiàn)就GPIb-IX-V復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)通路作一綜述。

血小板；糖蛋白；信號(hào)通路；血栓；止血

當(dāng)血管內(nèi)皮細(xì)胞受到損傷（如：動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂），或在病理性血流高剪切力作用下，血小板通過(guò)其表面糖蛋白（glycoprotein，GP）Ib-IX-V復(fù)合物中的GPIbα的膜外功能區(qū)，與血管內(nèi)皮表面或血管性血友病因子（von Willebrand factor，VWF）結(jié)合，這種結(jié)合使得血小板以滾動(dòng)方式黏附在損傷血管表面［1］；同時(shí)，GPIbα與VWF結(jié)合啟動(dòng)血小板信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，血小板內(nèi)發(fā)生Ca2＋濃度升高、蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）等蛋白激酶活化、二磷酸腺苷（adenosine diphosphate，ADP）釋放等一系列反應(yīng)，導(dǎo)致血小板表面另一受體整合素αIIb/β3的活化，活化的αIIb/β3與血漿中纖維蛋白原和VWF結(jié)合，最終導(dǎo)致血小板相互聚集成團(tuán)，形成血小板血栓［1－2］。因此，GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路在血小板血栓形成過(guò)程中起關(guān)鍵作用。

1 GPIb-IX-V結(jié)構(gòu)

GPIb-IX-V復(fù)合物由4個(gè)跨膜亞單位組成：GPIbα通過(guò)二硫鍵與GPIbβ按1∶1比例形成GPIb，GPIb與GPIX以1∶1的比例通過(guò)非共價(jià)鍵組成GPIb-IX復(fù)合物。GPIb-IX復(fù)合物對(duì)于配體結(jié)合和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是有效的。糖蛋白V（glycoprotein V，GPV）以1∶2的比例與GPIb-IX通過(guò)松散的方式構(gòu)成GPIb-IX-V復(fù)合物［3］，見(jiàn)圖1。

1.1 GPIbαGPIbα是GPIb-IX-V復(fù)合物中最大、也是最重要的1個(gè)亞基，由610個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為135 ku［3］。GPIbα基因定位在17號(hào)染色體短臂。GPIbα含有多個(gè)結(jié)構(gòu)域，從N端開(kāi)始：1－282，含有多個(gè)GPIb-IX-V配體的結(jié)合位點(diǎn)；283－302，由富含帶負(fù)電荷氨基酸殘基組成，包括天冬氨酸、谷氨酸以及3個(gè)硫酸化的酪氨酸殘基；303－485，由高度糖基化、黏蛋白樣的聚糖多肽構(gòu)成；486－514為跨膜域；515－610為胞質(zhì)尾［3］。GPIbα胞質(zhì)尾含有細(xì)胞內(nèi)蛋白或信號(hào)分子（例如：14-3-3ζ）結(jié)合位點(diǎn)。其中GPIbα 559、587/590、609位氨基酸殘基為絲氨酸，磷酸化后能與信號(hào)蛋白14-3-3蛋白結(jié)合［4－5］。550－570位氨基酸殘基含有肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白（actin binding protein，ABP）的結(jié)合位點(diǎn)，通過(guò)ABP將GPIb-IX-V復(fù)合物錨定在細(xì)胞膜骨架上，這種結(jié)合對(duì)于調(diào)節(jié)VWF誘導(dǎo)的血小板黏附和活化非常重要［6］。

1.2 GPIbβGPIbβ由181個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為25 ku。GPIbβ基因定位在22號(hào)染色體長(zhǎng)臂。GPIbβ通過(guò)位于膜外附近的二硫鍵與GPIbα連接，通過(guò)15－32位氨基酸殘基與GPIX非共價(jià)鍵相連［7］。胞質(zhì)尾由34個(gè)氨基酸殘基組成，含有鈣調(diào)蛋白結(jié)合位點(diǎn)（149－167），其中166位是絲氨酸殘基，能被蛋白激酶A（protein kinase A，PKA）磷酸化，磷酸化絲氨酸能與14-3-3蛋白結(jié)合［1］。Maurer et al［8］使用抗GPIbβ胞外域的單克隆抗體RAM.1減少血小板黏附、GPIb介導(dǎo)的信號(hào)、凝血酶產(chǎn)生和動(dòng)脈血栓形成，表明GPIbβ在GPIb介導(dǎo)的信號(hào)通路中起重要作用。

1.3 GPIXGPIX由160個(gè)氨基酸殘基組成，分子量22 ku。GPIX基因定位在3號(hào)染色體長(zhǎng)臂。胞質(zhì)尾非常短，只有5個(gè)氨基酸殘基組成，在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)附近含有1個(gè)被十六烷?；陌腚装彼釟埢轷；揎椏赡転殄^定GPIb-IX-V到細(xì)胞膜提供另外一個(gè)機(jī)制［9］。

1.4 GPVGPV由544個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為82 ku。GPV基因定位在3號(hào)染色體長(zhǎng)臂。GPV通過(guò)直接與GPIbα相互作用，連接2個(gè)GPIb-IX復(fù)合物。胞質(zhì)尾由16個(gè)氨基酸殘基組成，含有14-3-3蛋白和鈣調(diào)蛋白結(jié)合位點(diǎn)［3］。在高剪切力條件下，GPV對(duì)于加強(qiáng)GPIb-IX-V復(fù)合物與VWF結(jié)合起關(guān)鍵作用［10］，見(jiàn)圖1。

2 GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路

VWF結(jié)合GPIb-IX-V能啟動(dòng)血小板內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，引起脫顆粒、胞內(nèi)Ca2＋濃度增加、細(xì)胞骨架重排和“從內(nèi)向外”活化整合素αIIb/β3，活化的αIIb/β3與VWF或纖維蛋白原結(jié)合，引起血小板聚集成團(tuán)，形成血小板血栓［3］。GPIb-IX-V復(fù)合物介導(dǎo)的信號(hào)通路主要涉及以下幾條通路，見(jiàn)圖2。

圖1 GPIb-IX-V結(jié)構(gòu)示意圖

圖2 GPIb-IX-V介導(dǎo)的主要信號(hào)通路示意圖

2.1 活化免疫受體酪氨酸基礎(chǔ)的活化模序（immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITAM）含有的受體在理解VWF與GPIb-IX-V結(jié)合誘導(dǎo)的跨膜信號(hào)研究中，重大發(fā)現(xiàn)之一是發(fā)現(xiàn)兩個(gè)ITAM含有的受體FcγRIIA和FcR-γ鏈酪氨酸殘基的磷酸化。FcγRIIA是IgG低親和力受體，分子量為40 ku的跨膜蛋白，其細(xì)胞外域含有兩個(gè)IgG樣結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞內(nèi)域含有一個(gè)ITAM模序。聚集的免疫球蛋白能誘導(dǎo)FcγRIIA成簇并活化FcγRIIA，涉及肝素關(guān)聯(lián)的血小板減少癥［11］。FcR-γ鏈?zhǔn)荈c受體（如：FcεRI、FcγRI和FcγRIII）必需的1個(gè)亞基，也含有ITAM模序。在血小板中，F(xiàn)cR-γ鏈主要與GPVI連接構(gòu)成膠原受體［12］。通常，當(dāng)受體與配體結(jié)合后，ITAM模序內(nèi)的2個(gè)酪氨酸殘基發(fā)生磷酸化，通過(guò)與SH2域結(jié)合招募并活化Syk酪氨酸激酶，啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶基礎(chǔ)的信號(hào)通路［13］。在完整的血小板中，VWF與GPIb-IX-V結(jié)合誘導(dǎo)快速的FcγRIIA酪氨酸磷酸化［13］。這個(gè)事件不是由血小板產(chǎn)生的血栓素A2（thromboxane A2，TxA2）介導(dǎo)，而是由Src激酶介導(dǎo)，因?yàn)镾rc激酶特異性抑制劑PP1能阻止這個(gè)過(guò)程［13］。使用熒光能量轉(zhuǎn)移和酵母雙雜交實(shí)驗(yàn)都證實(shí)GPIb-IX-V與FcγRIIA是相互結(jié)合在一起的［3］。GPIb-IX-V與FcγRIIA的結(jié)合發(fā)生在特異的脂筏區(qū)域［9］。VWF與GPIb-IX-V結(jié)合也能誘導(dǎo)Syk激酶介導(dǎo)的FcR-γ鏈酪氨酸磷酸化。VWF刺激誘導(dǎo)的FcR-γ鏈酪氨酸磷酸化是快速的、短暫的，最大在15～60 s，5 min內(nèi)減少。PP1抑制劑能阻止FcR-γ鏈酪氨酸磷酸化以及與Syk的連接，表明這些事件是關(guān)聯(lián)的，同時(shí)也證實(shí)Src家族在這個(gè)事件中起重要作用［14］。

2.2 Src家族酪氨酸激酶與GPIb-IX-V信號(hào)通路

通過(guò)研究鈣離子動(dòng)員和磷脂酶Cγ2（phospholipase Cγ2，PLCγ2）研究發(fā)現(xiàn)，酪氨酸磷酸化信號(hào)事件涉及GPIb-IX-V介導(dǎo)的血小板活化。早在1994年，研究GPIb-IX-V介導(dǎo)的血小板活化時(shí)發(fā)現(xiàn)Src與細(xì)胞骨架連接，同時(shí)有多個(gè)蛋白酪氨酸磷酸化［15］。隨后的研究［8］顯示，VWF與GPIb-IX-V結(jié)合，能誘導(dǎo)酪氨酸激酶Syk和接頭蛋白shc的酪氨酸殘基磷酸化。Wu et al［14］使用VWF和botrocetin一起處理血小板，發(fā)現(xiàn)GPIb-IX-V介導(dǎo)的血小板活化能誘導(dǎo)FcR-γ鏈，Syk，LAT和PLCγ2的酪氨酸磷酸化。Src激酶抑制劑能顯著地抑制上述蛋白的酪氨酸磷酸化事件，同時(shí)，VWF與GPIb-IX-V相互作用能誘導(dǎo)Src、Lyn、FcR-γ鏈和Syk形成復(fù)合物，表明Src激酶在這個(gè)過(guò)程中的重要作用［16］。VWF和瑞斯托霉素誘導(dǎo)的血小板活化，F(xiàn)cRIIA在Syk和PLCγ2活化之后也發(fā)生酪氨酸磷酸化，Src激酶抑制劑PP1能顯著抑制這些事件［16］。在GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路，Src是其最鄰近的下游信號(hào)分子之一［16］。磷酸肌醇3激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI-3K）激酶p85調(diào)節(jié)亞單位組成性與GPIb-IX-V結(jié)合，PI-3K抑制劑不影響該結(jié)合［3］。在VWF結(jié)合GPIb-IX-V誘導(dǎo)的血小板活化，Src通過(guò)其SH3域與連接在GPIb上的PI-3K的p85亞單位結(jié)合［16］。已證實(shí)Src激酶和它的下游信號(hào)分子PLCγ2參與許多血小板反應(yīng)，包括在VWF包被的表面血小板Ca2＋動(dòng)員和鋪展［2］。最近Delaney et al［17］使用血小板Rac1-/-小鼠和Rac1抑制劑，發(fā)現(xiàn)Lyn-Vav-Rac1-PI3K-Akt信號(hào)通路在介導(dǎo)VWF/GPIb-IX引起的整合素αIIb/β3活化中起重要作用。

2.3 磷脂酶C（phospholipase C，PLC）與GPIb-IX-V信號(hào)通路許多研究已證實(shí)VWF結(jié)合GPIb-IX-V誘導(dǎo)PLC活化。Kroll et al［18］研究發(fā)現(xiàn)，用VWF和瑞斯托霉素處理血小板引起細(xì)胞內(nèi)Ca2＋濃度升高和PKC介導(dǎo)的pleckstrin磷酸化，這兩個(gè)事件都被PLC衍生的第二信使三磷酸肌醇（inositol triphosphate，IP3）和二酯酰甘油（diacylglycerol，DAG）所調(diào)節(jié)。同時(shí)有研究［13］顯示，這兩個(gè)事件能被環(huán)氧化酶抑制劑indomethacin阻止，表明在GPIb-IX-V信號(hào)通路PLC活化位于磷脂酶A2（phospholipase A2，PLA2）下游，需要TxA2的產(chǎn)生。TxA2結(jié)合血小板表面偶聯(lián)有Gq蛋白的7次跨膜受體，活化PLCβ亞家族，主要是PLCβ2［19］。然而，由GPIb-IX-V介導(dǎo)的信號(hào)通路主要涉及PLCγ2而不是PLCβ2。PLCγ2活化受到酪氨酸磷酸化和PI-3K的脂質(zhì)產(chǎn)物的調(diào)節(jié)［20］。已證實(shí)VWF與GPIb-IX-V結(jié)合能促進(jìn)PLCγ2酪氨酸磷酸化，這個(gè)事件受到ITAM含有受體FcγRIIA和FcR-γ鏈的調(diào)節(jié)［13］。另外，抑制PI-3K可顯著抑制GPIb-IX-V誘導(dǎo)的PLC活化［13］。

2.4 PLA2與GPIb-IX-V信號(hào)通路已有研究［13］證實(shí)，TxA2參與VWF誘導(dǎo)的血小板活化，特別是VWF誘導(dǎo)的PLC活化、Ca2＋動(dòng)員、pleckstrin磷酸化和顆粒分泌，需要PLA2活化和隨后TxA2的產(chǎn)生，所有這些事件能被阻止花生四烯酸轉(zhuǎn)化為TxA2的環(huán)氧化酶抑制劑所阻斷。但是，由VWF結(jié)合GPIb-IX-V復(fù)合物所引起的其他一些事件，如某些蛋白的酪氨酸磷酸化卻不依賴TxA2的產(chǎn)生［13］。這些研究表明VWF結(jié)合GPIb-IX-V引起血小板活化通過(guò)TxA2依賴的和TxA2非依賴的信號(hào)通路。在VWF刺激血小板產(chǎn)生TxA2依賴的PLA2活化，主要是85 ku的胞質(zhì)PLA2（cPLA2）［2］。胞質(zhì)內(nèi)Ca2＋濃度升高和絲氨酸殘基磷酸化都能活化cPLA2。在VWF與GPIb-IX-V結(jié)合誘導(dǎo)的cPLA2活化，可能主要是通過(guò)p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）介導(dǎo)的505位絲氨酸殘基磷酸化［8］。最近Estevez et al［21］使用LIMK-/-小鼠研究發(fā)現(xiàn)，LIMK-/-的血小板選擇性損傷VWF/GPIb-IX誘導(dǎo)的cPLA2的磷酸化和隨后的TxA2產(chǎn)生，提示LIMK1在GPIb-IX介導(dǎo)的TxA2合成和血栓形成中起重要作用。

2.5 14-3-3ζ與GPIb-IX-V信號(hào)通路14-3-3蛋白家族是細(xì)胞內(nèi)接頭蛋白，由異二聚體或同二聚體組成，含有兩個(gè)配體結(jié)合位點(diǎn)，廣泛參與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)［3］。人的血小板有5個(gè)14-3-3亞型，ε和η亞型弱表達(dá)，γ、ζ和β亞型高表達(dá)［22］。最初在純化GPIb-IX-V時(shí)首次發(fā)現(xiàn)14-3-3ζ與GPIb-IX-V結(jié)合，隨后的研究［23］發(fā)現(xiàn)GPIbα C端最后5個(gè)氨基酸殘基（605-610）SGHpSL610包含609磷酸化絲氨酸對(duì)于14-3-3ζ與GPIb-IX結(jié)合非常重要，刪除或封閉C端14-3-3ζ結(jié)合位點(diǎn)引起14-3-3ζ與GPIb-IX分離，同時(shí)抑制VWF與GPIb-IX的結(jié)合［23－24］。GPIb-IX第2個(gè)14-3-3ζ結(jié)合位點(diǎn)位于GPIbβ胞質(zhì)域，其中166絲氨酸殘基對(duì)于結(jié)合14-3-3ζ非常關(guān)鍵［3］。在靜息血小板609位絲氨酸殘基組成性磷酸化［23］，而166位絲氨酸殘基磷酸化受到PKA的動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)［25］。PKA通過(guò)磷酸化166位絲氨酸殘基負(fù)性調(diào)節(jié)VWF與GPIb-IX的結(jié)合［33］。另外，Mangin et al［5］研究發(fā)現(xiàn)在GPIbα 580-590位氨基酸序列也能結(jié)合14-3-3ζ，其中587和590位絲氨酸的磷酸化在與14-3-3ζ結(jié)合中非常關(guān)鍵，該結(jié)合位點(diǎn)在調(diào)節(jié)整合素依賴的血小板鋪展具有重要作用。Yuan et al［4］發(fā)現(xiàn)，在GPIbα 551－564位氨基酸序列也能結(jié)合14-3-3ζ，其中559位絲氨酸殘基磷酸化非常關(guān)鍵。

2.6 GPIb-IX-V與細(xì)胞骨架血小板骨架組成收縮裝置調(diào)節(jié)血小板形狀改變和鋪展，而且，細(xì)胞骨架參與形成細(xì)胞內(nèi)信號(hào)網(wǎng)絡(luò)，能連接和組裝許多信號(hào)分子。許多研究已證實(shí)，配體與GPIb-IX-V結(jié)合能誘導(dǎo)細(xì)胞骨架重排，幾個(gè)信號(hào)蛋白重新分布到新形成的肌動(dòng)蛋白網(wǎng)絡(luò)［1］。而且，有證據(jù)［3］表明，細(xì)胞骨架參與調(diào)節(jié)配體與GPIb-IX-V的結(jié)合。在高剪切力作用下，GPIb與VWF相互作用刺激纖維狀肌動(dòng)蛋白組裝到GPIb-IX-V復(fù)合物［26］。VWF與GPIb-IX-V相互作用能誘導(dǎo)形成由細(xì)絲蛋白、肌動(dòng)蛋白和GPIb-IX-V構(gòu)成的復(fù)合物［8］。Feng et al［6］發(fā)現(xiàn)，ABP結(jié)合到GPIbα對(duì)于細(xì)胞骨架重排、血小板聚集和一些信號(hào)蛋白酪氨酸磷酸化是必需的。通過(guò)肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白將GPIbα結(jié)合到細(xì)胞膜骨架可能負(fù)性調(diào)節(jié)VWF與GPIbα的結(jié)合［27］。

2.7 PI-3K與GPIb-IX-V信號(hào)通路PI-3K的調(diào)節(jié)亞單位p85與GPIb-IX-V復(fù)合物結(jié)合，能介導(dǎo)Src結(jié)合到GPIb［16］。血小板黏附到固定的VWF能誘導(dǎo)PI-3K活化，或在瑞斯托霉素誘導(dǎo)下，可溶性VWF和GPIb-IX-V結(jié)合也能誘導(dǎo)PI-3K活化［3］。在高剪切力條件下，PI-3K與酪氨酸激酶Syk連接，而且，已證實(shí)在VWF刺激的血小板，PI-3K通過(guò)p85調(diào)節(jié)亞單位與GPIb-IX-V和Src形成復(fù)合物［16］。PI-3K活性狀態(tài)不影響PI-3K與Src結(jié)合形成復(fù)合物，因?yàn)樘禺愋訮I-3K抑制劑wortmammin不抑制復(fù)合物的形成［16］。有研究［28］顯示，GPIb-IX-V介導(dǎo)的Src和PLCγ2活化以及Ca2＋升高不受PI-3K活性的影響，但血小板聚集和鋪展在VWF表面則依賴PI-3K的活性。但是，PI-3K在通過(guò)GPIb-IX-V引起血小板活化中的具體作用目前還不是很清楚。

2.8 環(huán)鳥(niǎo)苷一磷酸（cyclic guanosine monophosphate，cGMP）依賴的蛋白激酶之前通常被接受的觀點(diǎn)是提高血小板胞質(zhì)內(nèi)cGMP濃度和cGMP依賴的蛋白激酶（protein kinase G，PKG）活性抑制血小板活化［29］。然而，最近的研究［30］表明，cGMPPKG信號(hào)通路在GPIb-IX-V介導(dǎo)的血小板活化中扮演重要的刺激作用。在細(xì)胞模型中，表達(dá)重組PKG提高VWF誘導(dǎo)的整合素αIIb/β3活化。

3 結(jié)語(yǔ)

GPIb-IX-V是血小板表面含量多的膜蛋白之一，在血小板血栓形成的起始和凝血過(guò)程中起關(guān)鍵作用。雖然GPIb-IX-V相關(guān)聯(lián)的信號(hào)通路還沒(méi)有完全闡明，但是越來(lái)越多的證據(jù)表明Src家族激酶和PLCγ2相關(guān)聯(lián)的信號(hào)在GPIb-IX-V介導(dǎo)的血小板活化過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在高剪切力條件下，GPIb-IX-V與整合素αIIb/β3之間對(duì)話對(duì)于血小板血栓形成起重要作用，但該對(duì)話所涉及的機(jī)制還需要深入研究。

［1］ Clemetson K J.Platelets and primary haemostasis［J］.Thromb Res，2012，129（3）：220－4.

［2］ Barinov E F，Sulaeva O N.Molecular mechanisms of thrombogenesis［J］.Kardiologiia，2012，52（12）：45－56.

［3］ Canobbio I，Balduini C，Torti M.Signalling through the platelet glycoprotein Ib-V-IX complex［J］.Cell Signal，2004，16（12）：1329－44.

［4］ Yuan Y，Zhang W，Yan R，et al.Identification of a novel 14-3-3ζ binding site within the cytoplasmic domain platelet glycoprotein Ibα that plays a key role in regulating the von Willebrand factor binding function of glycoprotein Ib-IX［J］.Circ Res，2009，105（12）：1177－85.

［5］ Mangin P，David T，Lavaud V，et al.Identification of a novel 14-3-3ζ binding site within the cytoplasmic tail of platelet glycoprotein Ibα［J］.Blood，2004，104（2）：420－7.

［6］ Feng S，Reséndiz J C，Lu X，et al.Filamin A binding to the cytoplasmic tail of glycoprotein Ib alpha regulates von Willebrand factor-induced platelet activation［J］.Blood，2003，102（6）：2122－9.

［7］ Kenny D，Morateck P A，Montgomery R R.The cysteine knot of platelet glycoprotein Ib beta（GPIb beta）is critical for the interaction of GPIb beta with GPIX［J］.Blood，2002，99（12）：4428－33.

［8］ Maurer E，Tang C，Schaff M，et al.Targeting platelet GPIbβ reduces platelet adhesion，GPIb signaling，and thrombin generation and prevents arterial thrombosis［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2013，33（6）：1221－9.

［9］ Shrimpton C N，Borthakur G，Larrucea S，et al.Localization of the adhesion receptor glycoprotein Ib-IX-V complex to lipid rafts is required for platelet adhesion and activation［J］.J Exp Med，2002，196（8）：1057－66.

［10］Fredrickson B J，Dong J F，McIntire L V，et al.Shear-dependent rolling on von Willebrand factor of mammalian cells expressing the platelet glycoprotein Ib-IX-V complex［J］.Blood，1998，92（10）：3684－93.

［11］Brandt J T，Isenhart C E，Osborne J M，et al.On the role of platelet Fc gamma RIIa phenotype in heparin-induced thrombocytopenia［J］.Thromb Haemost，1995，74（6）：1564－72.

［12］Falet H，Pollitt A Y，Begonja A J，et al.A novel interaction between FlnA and Syk regulates platelet ITAM-mediated receptor signaling and function［J］.J Exp Med，2010，207（9）：1967－79.

［13］Canobbio I，Bertoni A，Lova P，et al.Platelet activation by von Willebrand factor requires coordinated signaling through thromboxane A2 and Fc gamma IIA receptor［J］.J Biol Chem，2001，276（28）：26022－9.

［14］Wu Y，Suzuki-Inoue K，Satoh K，et al.Role of Fc receptor gamma-chain in platelet glycoprotein Ib-mediated signaling［J］.Blood，2001，97（12）：3836－45.

［15］Jackson S P，Schoenwaelder S M，Yuan Y，et al.Adhesion receptor activation of phosphatidylinositol 3-kinase.von Willebrand factor stimulates the cytoskeletal association and activation of phosphatidylinositol 3-kinase and pp60c-src in human platelets［J］.J Biol Chem，1994，269（43）：27093－9.

［16］Wu Y，Asazuma N，Satoh K，et al.Interaction between von Willebrand factor and glycoprotein Ib activates Src kinase in human platelets：role of phosphoinositide 3-kinase［J］.Blood，2003，101（9）：3469－76.

［17］Delaney M K，Liu J，Zheng Y，et al.The role of Rac1 in glycoprotein Ib-IX-mediated signal transduction and integrin activation［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2012，32（11）：2761－8.

［18］Kroll M H，Harris T S，Moake J L，et al.von Willebrand factor binding to platelet GPIb initiates signals for platelet activation［J］.J Clin Invest，1991，88（5）：1568－73.

［19］Yang Y M，Chen J Z，Wang X X，et al.Resveratrol attenuates thromboxane A2 receptor agonist-induced platelet activation by reducing phospholipase C activity［J］.Eur J Pharmacol，2008，583（1）：148－55.

［20］Ragab A，Séverin S，Gratacap M P，et al.Role of the C-terminal tyrosine residuces of LAT in GPVI－induced platelet activation：insights into the mechanism of PLC gamma 2 activation［J］.Blood，2007，110（7）：2466－74.

［21］Estevez B，Stojanovic-Terpo A，Delaney M K，et al.LIM kinase-1 selectively promotes glycoprotein Ib-IX-mediated TXA2 synthesis，platelet activation，and thrombosis［J］.Blood，2013，121（22）：4586－94.

［22］Mangin P H，Receveur N，Wurtz V，et al.Identification of five novel 14-3-3 isoforms interacting with the GPIb-IX complex in platelets［J］.J Thromb Haemost，2009，7（9）：1550－5.

［23］Bodnar R J，Gu M，Li Z，et al.The cytoplasmic domain of the platelet glycoprotein Ibalpha is phosphorylated at serine 609［J］.J Biol Chem，1999，274（47）：33474－9.

［24］Dai K，Bodnar R，Berndt M C，et al.A critical role for 14-3-3zeta protein in regulating the VWF binding function of platelet glycoprotein Ib-IX and its therapeutic implications［J］.Blood，2005，106（6）：1975－81.

［25］Bodnar R J，Xi X，Li Z，et al.Regulation of glycoprotein Ib-IX-von Willebrand factor interaction by cAMP-dependent protein kinase-mediated phosphorylation at Ser 166 of glycoprotein Ibbeta［J］.J Biol Chem，2002，277（49）：47080－7.

［26］Cranmer S L，Ashworth K J，Yao Y，et al.High shear-dependent loss of membrane integrity and defective platelet adhesion following disruption of the GPIbα-filamin interaction［J］.Blood，2011，117（9）：2718－27.

［27］Munday A D，Gaus K，Lopez J A.The platelet glycoprotein Ib-IX-V complex anchors lipid rafts to the membrane skeleton：implications for activation-dependent cytoskeletal translocation of signaling molecules［J］.J Thromb Haemost，2010，8（1）：163－72.

［28］Nesbitt W S，Kulkarni S，Giuliano S，et al.Distinct glycoprotein Ib/V/IX and integrinaIIbβ3-dependent calcium signals cooperatively regulate platelet adhesion under flow［J］.J Biol Chem，2002，277（4）：2965－72.

［29］Haslam R J，Dickinson N T，Jang E K.Cyclic nucleotides and phosphodiesterases in platelets［J］.Thromb Haemost，1999，82（2）：412－23.

［30］Li Z，Xi X，Gu M，et al.A stimulatory role for cGMP-dependent protein kinase in platelet activation［J］.Cell，2003，112（1）：77－86.

R 558；R 331.1＋43；R 34

A

1000－1492（2014）03－0419－05

2013－07－08接收

上海市教委科技創(chuàng)新項(xiàng)目（編號(hào)：12YZ068）；上海市自然科學(xué)基金（編號(hào)：12ZR1429900）

1華東師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，上海 200241

2上海市血液中心血液工程研究室，上海 200051

3上海市中醫(yī)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心，上海 200071

胡 萍，女，碩士研究生；謝如鋒，女，主任技師，責(zé)任作者，E-mail：rufeng33＠hotmail.com；王志成，男，助理研究員，責(zé)任作者，E-mail：ahwzc＠126.com