評(píng)價(jià)8種血清標(biāo)志物在原發(fā)性肝癌診斷中的臨床價(jià)值

趙運(yùn)勝，王 猛，崔辰瑩，李洪臣，廖 飛

（1.河北省秦皇島市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科 066000；2.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院 400016）

原發(fā)性肝癌（primary hepatic cancer，PHC）是目前世界上致死率最高的惡性腫瘤之一［1］。血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是目前檢測(cè)PHC最常用的腫瘤標(biāo)志物，但其靈敏度和特異性都不夠滿意［2］。血清高爾基體蛋白73（serum Golgi glycoprotein 73，GP73）、甲胎蛋白異質(zhì)體3（Lectin-reactiveaipha-fetoprotein，AFP-L3）、異常凝血酶原（des-γ-carboxyprothrombin，DCP）、磷脂?；嫉鞍拙厶?3（glypican-3，GPC-3）有望成為診斷 PHC及預(yù)后的新標(biāo)志物［3－4］。為探討這些血清標(biāo)志物對(duì)我國(guó)肝癌的診斷價(jià)值，作者同時(shí)檢測(cè)了50例PHC患者血清中 GP73、AFP-L3、DCP、GPC-3、AFP、CA199、癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）和鐵蛋白（ferritin，F(xiàn)ER）水平，并分析評(píng)價(jià)8種標(biāo)志物的聯(lián)合檢測(cè)效能，以提高診斷和早期PHC預(yù)警的臨床應(yīng)用價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取河北省秦皇島市第一醫(yī)院2011年4～9月的住院、門診和體檢人員共計(jì)130例，其中經(jīng)過(guò)病理檢驗(yàn)明確的早期PHC患者50例（男38例，女12例），年齡32～81歲，平均57歲；慢性肝炎患者20例（男11例，女9例），年齡36～57歲，平均48歲；肝硬化患者20例（男15例，女5例），年齡41～81歲，平均55歲；其他消化系統(tǒng)惡性腫瘤患者20例（男14例，女6例），年齡47～78歲，平均69歲，未見肝轉(zhuǎn)移；健康對(duì)照者20例（男10例，女10例），年齡21～45歲，平均34歲。

1.2 方法

1.2.1 試劑與儀器 GP73、DCP、GPC-3測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海瑞奇科技有限公司，AFP-L3分離純化試劑盒購(gòu)自北京熱景生物技術(shù)有限公司，AFP、CA199、CEA、FER測(cè)定試劑盒購(gòu)自上海羅氏診斷產(chǎn)品有限公司，CODA全自動(dòng)酶標(biāo)儀和羅氏2010電化學(xué)發(fā)光儀。

1.2.2 標(biāo)本采集 受檢者均采集空腹靜脈血3mL，用促凝管采血后將分離的血清儲(chǔ)存于－80℃冰箱待測(cè)。

1.2.3 檢測(cè)方法 GP73、DCP、GPC-3測(cè)定采用酶聯(lián)免疫定量方法檢測(cè)，按說(shuō)明書操作。AFP-L3分離采用微量離心柱法，按說(shuō)明書操作。采用羅氏電化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清CA199、CEA、總AFP和分離洗脫液中AFP-L3濃度，并計(jì)算AFP-L3占總AFP的比例。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。檢測(cè)數(shù)據(jù)均為偏態(tài)分布，采用中位數(shù)（四分位數(shù)）表示，多組間比較采用 Kruskal-Wallis檢驗(yàn)，兩組間比較采用 Mann－WhitneyU非參數(shù)檢驗(yàn)。ROC曲線評(píng)價(jià)各指標(biāo)對(duì)PHC診斷的敏感度、特異性、準(zhǔn)確率，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

圖1 8種血清標(biāo)志物鑒別診斷PHC的ROC曲線分析

2.1 各組8種血清標(biāo)志物濃度檢測(cè)結(jié)果比較 肝癌組GP73、AFP-L3（%）、AFP 和 CA199 濃 度 明 顯 高 于 其 他 組 （P＜0.05）。肝癌組DCP和GPC-3濃度明顯高于除肝硬化組外的其他組（P＜0.05）。肝癌組CEA和FRE濃度僅明顯高于對(duì)照組（P＜0.05），見表1。2.2 ROC曲線分析8種血清標(biāo)志物對(duì)PHC的鑒別診斷效果 8種 標(biāo) 志 物 ［GP73、AFP-L3（%）、AFP、DCP、GPC-3、CA199、CEA和FER］ROC曲線下面積分別為0.824、0.745、0.668、0.640、0.635、0.732、0.642、0.621，95%可信區(qū)間分別為0.735～0.912、0.650～0.841、0.564～0.773、0.533～0.746、0.527～0.743、0.641～0.824、0.543～0.741、0.516～0.725，P＜0.05。通過(guò) ROC曲線分析將 GP73、AFP-L3（%）、AFP、DCP、GPC-3、CA199、CEA和FER鑒別診斷肝癌的臨界值分別設(shè)定為72.70μg／L、15.0%、108.00μg／L、37.5μg／L、20.7μg／L、67.7U／mL、2.78μg／L、253.00μg／L，見圖1。

表1 各組8種血清標(biāo)志物濃度檢測(cè)結(jié)果比較

表2 8種血清標(biāo)志物單項(xiàng)及聯(lián)檢對(duì)PHC的診斷價(jià)值比較

2.3 8種血清標(biāo)志物單項(xiàng)及其聯(lián)合檢測(cè)對(duì)PHC的診斷價(jià)值單項(xiàng)檢測(cè)中，GP73的靈敏度和準(zhǔn)確率最高，GPC-3的特異性最高。系列實(shí)驗(yàn)中GP73與其他一項(xiàng)或幾項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合的特異性均可達(dá)100%，平行實(shí)驗(yàn)中8種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度最高（98.0%），見表2。

3 討 論

GP73、AFP-L3（%）、DCP和 GPC-3等是新近發(fā)現(xiàn)的PHC血清標(biāo)志物［5－6］。本文結(jié)果顯示肝癌患者GP73濃度明顯高于非肝癌患者，肝硬化和其他消化系統(tǒng)腫瘤患者血清中GP73濃度與對(duì)照組和肝炎組相比也有所升高。之前也曾有過(guò)文獻(xiàn)報(bào)道隨著肝臟疾病的發(fā)展，GP73升高［7］，肝硬化和肝癌患者中GP73水平明顯高于肝炎患者和健康人［8］。ROC曲線下面積分析GP73最大，單項(xiàng)檢測(cè)中其靈敏度為72.0%，明顯優(yōu)于AFP，特異性為95.0%，這與以往的大部分研究結(jié)果一致［9－10］。因此，本文結(jié)果支持血清GP73濃度對(duì)檢測(cè)肝癌的臨床意義。

本文數(shù)據(jù)表明肝癌組血清中AFP-L3（%）和AFP明顯高于其他組。文獻(xiàn)曾報(bào)道AFP在肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、膽道腫瘤和睪丸腫瘤等多種臨床疾病的患者血清中升高［11］，說(shuō)明AFP診斷 PHC的特異性不夠。AFP-L3（%）靈敏度為60.0%，優(yōu)于AFP，可作為低濃度AFP的PHC的互補(bǔ)診斷指標(biāo)［12－13］。另外，結(jié)果表明肝癌患者DCP和 GPC-3濃度明顯高于除肝硬化外的其他組，說(shuō)明DCP和GPC-3對(duì)于肝癌的鑒別診斷也有相當(dāng)?shù)呐R床價(jià)值。但其靈敏度分別為44.0%和42.0%，與AFP相比并未體現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)。CA199的檢測(cè)靈敏度和AFP相當(dāng)，它常作為診斷消化系統(tǒng)惡性腫瘤通用標(biāo)志物之一。CEA和FER單獨(dú)測(cè)定僅可作為一種廣譜腫瘤標(biāo)志物。相應(yīng)地，其與GP73等其他指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可提高肝癌檢出靈敏度。

本文結(jié)果表明，多種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷PHC的靈敏度和特異性，GP73與其他一項(xiàng)或幾項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合的特異性均可達(dá)100%，可作為確診PHC的較好標(biāo)志物組合。平行實(shí)驗(yàn)中以8種腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度最高（98.0%），可作為排除肝癌的較好的判斷方法。GP73／AFP準(zhǔn)確率最高，診斷效果最好。因此，在平時(shí)臨床工作中，可根據(jù)不同的診斷目的選擇不同的項(xiàng)目組合?？傮w而言，本文結(jié)果表明血清GP73和AFP-L3單獨(dú)診斷PHC的靈敏度和特異性都優(yōu)于單用AFP；其聯(lián)合其他標(biāo)志物檢測(cè)可提高對(duì)PHC診斷的可靠性。

［1］ Gomaa AI，Khan SA，Leen EL，et al.Diagnosis of hepatocellular carcinoma［J］.World J Gastroenterol，2009，15（11）：1301-1314.

［2］ 徐海峰，楊華瑜，張宏冰，等.改變肝癌早期診斷和治療現(xiàn)狀的新肝癌血清標(biāo)志物［J］.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床，2008，28（1）：104-108.

［3］ 趙睿，王啟之.肝癌診斷的腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展［J］.國(guó)際消化病雜志，2013，33（1）：29-31，49.

［4］ 趙秀英，李寧，丁惠國(guó)，等.血清高爾基體糖蛋白73在肝細(xì)胞癌診斷中的作用［J］.中華腫瘤雜志，2010，32（12）：943-946.

［5］ Hu JS，Wu DW，Liang S，et al.GP73，a resident Golgi glycoprotein，is sensibility and specificity for hepatocellular carcinoma of diagnosis in a hepatitis B-endemic Asian population［J］.Med Oncol，2010，27（2）：339-345.

［6］ 趙運(yùn)勝，王猛，李軍良，等.血清高爾基體蛋白73、異常凝血酶原、磷脂?；嫉鞍拙厶?3和甲胎蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的早期診斷價(jià)值研究［J］.中國(guó)全科醫(yī)學(xué)，2012，15（11B）：3730-3733.

［7］ Liu X，Wan X，Li Z，et al.Golgi protein 73（GP73），a useful serum marker in liver diseases［J］.Clin Chem Lab Med，2011，49（8）：1311-1316.

［8］ Morota K，Nakagawa M，Sekiya R，et al.A comparative evaluation of Golgi protein-73，fucosylated hemopexin，αfetoprotein，and PIVKA-Ⅱin the serum of patients with chronic hepatitis，cirrhosis，and hepatocellular carcinoma［J］.Clin Chem Lab Med，2011，49（4）：711-718.

［9］ 孔穎，藺淑梅，王維娟，等.血清高爾基體蛋白73診斷原發(fā)性肝癌價(jià)值探討［J］.實(shí)用肝臟病雜志，2013，16（4）：341-343.

［10］羅文明，陳琳，曹亞麗，等.血清GP73及AFP-L3檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的意義［J］.臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，12（13）：1005-1006，1009.

［11］徐萬(wàn)菊，趙莉，馬萬(wàn)山.甲胎蛋白異質(zhì)體與高爾基體蛋白73在肝細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用進(jìn)展及展望［J］.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床，2010，21（1）：70-71，75.

［12］戴亞新，張時(shí)良，裴豪.肝癌和肝病患者血清甲胎蛋白異質(zhì)體的檢測(cè)及臨床意義［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2013，17（2）：296-298.

［13］徐萬(wàn)菊，韓玉剛，張芊，等.甲胎蛋白異質(zhì)體與高爾基體蛋白73在甲胎蛋白低濃度肝細(xì)胞癌診斷中的意義［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（2）：174-176.