透明質(zhì)酸對(duì)大鼠顆粒脂肪移植物存活影響的初步研究

陳嘯,章宏偉,李平松

(1.南京醫(yī)科大學(xué)江蘇南京210000;2.江蘇省蘇北人民醫(yī)院,揚(yáng)州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇揚(yáng)州225000)

.基礎(chǔ)研究.

透明質(zhì)酸對(duì)大鼠顆粒脂肪移植物存活影響的初步研究

陳嘯1,2,章宏偉1,李平松2

(1.南京醫(yī)科大學(xué)江蘇南京210000;2.江蘇省蘇北人民醫(yī)院,揚(yáng)州大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院,揚(yáng)州大學(xué)附屬醫(yī)院江蘇揚(yáng)州225000)

目的:觀察透明質(zhì)酸(hyaluronic acid,HA)對(duì)大鼠自體顆粒脂肪移植物存活的影響.方法:18只Wistar大鼠(雄雌不限,體重220±5g)背部皮下分別注射自體顆粒脂肪0.3ml、透明質(zhì)酸0.3ml和自體顆粒脂肪與透明質(zhì)酸混合物0.3ml(顆粒脂肪0.15ml+透明質(zhì)酸0.15ml),并記為Fat組、HA組、Fat+HA組,分別于第30天、第60天、第90天,檢測(cè)移植物的體積并計(jì)算成活率;HE染色分析脂肪細(xì)胞的形態(tài)和移植物的炎癥反應(yīng);免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)CD31表達(dá),計(jì)數(shù)血管情況.結(jié)果:①注射Fat、HA、Fat+HA(1:1)0.3ml后,大鼠背部形成三個(gè)長(zhǎng)條形的局部隆起,注射第15天HA組局部隆起消失,注射后第30天,第60天,第90天Fat+HA組移植物的成活率比Fat組高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05);②局部取材切片(HE染色)可觀察到炎癥反應(yīng)程度逐漸減輕,Fat+HA組誘發(fā)組織炎癥反應(yīng)較Fat組為輕;③注射后第30天,第60天,第90天時(shí)CD31標(biāo)記組織內(nèi)血管計(jì)數(shù)Fat-HA組多于Fat組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(<0.05).結(jié)論:透明質(zhì)酸混合自體顆粒脂肪注射可以提高顆粒脂肪的成活率、促進(jìn)移植物的再血管化、維持脂肪移植物的體積.

自體顆粒脂肪移植;透明質(zhì)酸;軟組織充填

自體顆粒脂肪是一種良好的自體組織移植物,無(wú)排異反應(yīng),被整形美容外科運(yùn)用于軟組織充填,然而脂肪移植物的低存活性及其體積存留的不可預(yù)知性限制了其在臨床的使用[1-4].因此為了維持自體脂肪移植后的療效,學(xué)者們對(duì)顆粒脂肪的獲取、純化、注射、儲(chǔ)存、受區(qū)的處理及生長(zhǎng)因子的使用等方面[5-9]進(jìn)行了大量研究,但仍未獲得滿(mǎn)意結(jié)果,而透明質(zhì)酸具有抗炎性、親水性、促進(jìn)組織重建等特點(diǎn),各種修飾和未修飾的透明質(zhì)酸已被廣泛運(yùn)用于組織工程學(xué)、注射充填、治療關(guān)節(jié)炎等醫(yī)療方面[10-11].有研究表明透明質(zhì)酸可以促進(jìn)組織血管再生[12],那么透明質(zhì)酸與自體顆粒脂肪混合移植能否促進(jìn)自體顆粒脂肪移植物血管再生、能否改善顆粒脂肪的充填效果,目前關(guān)于這方面的研究還甚少.因此本實(shí)驗(yàn)擬觀察透明質(zhì)酸對(duì)大鼠皮下移植顆粒脂肪存活及移植物再血管化的影響,為臨床選擇合適的混合填充物提供有價(jià)值的科學(xué)依據(jù).

1 材料和方法

1.1 主要材料與試劑

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:健康Wistar大鼠(由揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物試驗(yàn)比較中心提供),雌雄不限,體重(220±5)g.

1.1.2 主要試劑:透明質(zhì)酸,商品名:施沛特;規(guī)格: 2ml:20mg.

1.2 主要實(shí)驗(yàn)方法和步驟

1.2.1 自體脂肪的切取:1%的戊巴比妥鈉(0.4ml/ 100g)大鼠腹腔內(nèi)注射麻醉后,常規(guī)電動(dòng)脫毛器備皮,5%碘伏消毒皮膚,在Wistar大鼠腹股溝內(nèi)側(cè)設(shè)計(jì)皮膚切口長(zhǎng)度2cm,皮下切取自體脂肪組織體積約2ml.

1.2.2 自體顆粒脂肪的純化:將獲取的自體脂肪樣本剪碎成1mm3的小組織塊,生理鹽水洗滌,去除血細(xì)胞、細(xì)胞碎片,將脂肪組織放置去針頭后的5ml空注射器中,注入生理鹽水后靜置,見(jiàn)分層現(xiàn)象出現(xiàn)后,上層為油脂、中間層為顆粒脂肪、最下層為沖洗液,從注射器中排出下部液體,反復(fù)沖洗3~4次,最后紗布濾過(guò)油脂和沖洗液可獲得純化的脂肪顆粒.

1.2.3 移植物在wistar大鼠背部皮下的注射:三種充填移植物為0.3ml自體顆粒脂肪(Fat)、0.3ml透明質(zhì)酸(HA)、0.3ml混合移植物(Fat-HA)(0.15ml透明質(zhì)酸+0.15自體顆粒脂肪)(見(jiàn)圖1),選擇lml注射器和15G針頭在大鼠背部皮下分別注射形成三個(gè)類(lèi)長(zhǎng)條形的隆起:大鼠頭側(cè)長(zhǎng)條形為自體脂肪移植物、中間為透明質(zhì)酸移植物、尾側(cè)為混合移植物(如圖2),分別記為Fat組、HA組和Fat+HA組.

圖1 三種充填物(Fat、HA、Fat-HA);圖2三種充填物皮下注射后即刻表現(xiàn)

1.2.4 移植物的大體觀察:移植物注射后第30天,第60天,第90天時(shí)分別隨機(jī)選取6只大鼠,觀察移植物局部皮膚的紅斑反應(yīng)(0為無(wú)紅斑:1為輕度紅斑:2為中度紅斑:3為重度紅斑),背部做切口,剝離取出移植物,大體觀察移植物的顏色、形狀,使用注射器堆積法[13]測(cè)量體積,推算移植物成活率.

1.2.5 移植物的HE染色組織學(xué)觀察:10%甲醛固定標(biāo)本24h,石蠟包埋切法進(jìn)行HE染色,于光鏡觀察組織和脂肪細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu),每張切片沿縱向正中線(xiàn)等間距取5個(gè)視野,于200倍視野下計(jì)數(shù)完整脂肪細(xì)胞.完整脂肪細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn):未見(jiàn)明顯擠壓、變形,細(xì)胞壁完整清楚,細(xì)胞核清晰可見(jiàn).

1.2.6 免疫組織化學(xué)法觀察移植物血管再生:血管內(nèi)皮細(xì)胞染色方法CD31單克隆抗體作為第1抗體,按照免疫組化SP法操作步驟進(jìn)行,DAB顯色,蘇木素復(fù)染.血管計(jì)數(shù)方法為每個(gè)切片沿縱向正中線(xiàn)等距取5個(gè)視野,于200倍視野下計(jì)數(shù)毛細(xì)血管數(shù)量,每個(gè)HP下微血管的個(gè)數(shù)即血管密度,然后求其均值,凡是染成棕色單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞族均作為1個(gè)血管計(jì)數(shù).

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,相同時(shí)間點(diǎn)不同移植物組成活率比較采用配對(duì)檢驗(yàn);不同時(shí)間點(diǎn),同一移植物組成活率組間比較采用方差分析;周邊區(qū)血管計(jì)數(shù)進(jìn)行成組設(shè)計(jì)的檢驗(yàn),<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.

2 結(jié)果

2.1 移植物大體觀察和體積測(cè)量:注射部位在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)紅斑的程度不同:Fat組、Fat-HA組局部皮膚第1天時(shí)均為中度,隨后紅斑逐漸減輕,至第3天時(shí)均為輕度紅斑,第7天時(shí),紅斑完全消失;HA組局部皮膚無(wú)紅斑反應(yīng).

移植物注射后第15天發(fā)現(xiàn)HA組局部隆起消失,第30天,第60天,第90天時(shí)宰殺6只Wistar大鼠,發(fā)現(xiàn)HA完全吸收消失,另兩種皮下充填物(Fat、Fat-HA)在皮下有明顯的占位,整體性好(見(jiàn)圖3),兩者在皮下組織中被吸收和隆起程度不同:注射第30天,試管堆積法測(cè)量存留物體積(見(jiàn)圖4) Fat組、Fat+HA組移植物的成活率分別為(73± 8)%、(90±7)%,比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0.05);注射第60天、第90天,Fat+HA組移植物成活率與Fat組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0.05)(見(jiàn)圖5).

圖4 試管堆積法測(cè)量存留物體積

圖3 三種充填物第90天時(shí)大體的表現(xiàn);

圖5 移植物成活率比較(a,Fat-HA組與Fat組比較,<0.05; b,不同時(shí)間點(diǎn)Fat組比較,<0.05;c,不同時(shí)間點(diǎn)Fat-HA組比較,<0.05)

2.2 HE染色組織學(xué)觀察

Fat組:第30天,脂肪細(xì)胞呈團(tuán)狀分布,包膜不完整,炎性細(xì)胞散在其間,細(xì)胞變性及膠原纖維增生較嚴(yán)重;第60天,脂肪細(xì)胞變性及膠原纖維增生明顯增多,殘余正常細(xì)胞分散孤立,未見(jiàn)正常脂肪小葉結(jié)構(gòu);第90天,完整脂肪小葉結(jié)構(gòu),見(jiàn)增生的膠原纖維及其間散在的脂肪細(xì)胞和破壞細(xì)胞融合后的大泡,炎性反應(yīng)與第60天相似,但較同時(shí)間點(diǎn)Fat-HA組嚴(yán)重,Fat-HA組正常完整脂肪細(xì)胞計(jì)數(shù)均明顯多于Fat組(見(jiàn)圖6).

Fat-HA組:第30天,組織邊緣炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增多,但中心區(qū)炎性反應(yīng)輕;第60天,脂肪炎性反應(yīng)和細(xì)胞變性較第30天時(shí)減輕,仍以組織邊緣為主,可見(jiàn)正常脂肪小葉結(jié)構(gòu);第90天炎性反應(yīng)與第60天相似,脂肪小葉結(jié)構(gòu)正?？梢?jiàn),部分視野中組織結(jié)構(gòu)好于第60天(見(jiàn)圖7).

圖6 第90天Fat組:脂肪細(xì)胞壞死再吸收顯著,炎癥反應(yīng)明顯(X200)

;圖7第90天Fat-HA組:脂肪細(xì)胞形態(tài)良好,血管分布均勻(X200)

HA組:注射物第30天后無(wú)存留. 2.3免疫組織化學(xué)染色觀察:毛細(xì)血管的形態(tài)觀察結(jié)果:免疫組化染色后血管呈棕黃色,微血管形態(tài)不規(guī)則,管腔由染成棕黃色的內(nèi)皮細(xì)胞圍成,腔內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞;部分血管無(wú)明顯管腔,呈條索狀;有的只見(jiàn)到單個(gè)或成團(tuán)的內(nèi)皮細(xì)胞.

Fat組:第30天,炎性反應(yīng)及血管形成增多,但仍以邊緣為主;第60天、90天,組織中央細(xì)胞破壞融合,膠原增生較實(shí)驗(yàn)組明顯增多,血管主要分布于邊緣,內(nèi)部少見(jiàn)(見(jiàn)圖8).

Fat-HA組:第30天,炎性細(xì)胞及增生膠原主要均勻分布,血管分布于組織邊緣及內(nèi)部,形態(tài)較好,未見(jiàn)明顯擴(kuò)張;第60天,血管分布較30天時(shí)增多,結(jié)構(gòu)及形態(tài)接近正常;第90天,血管分布仍保持均勻,脂肪細(xì)胞及血管形態(tài)良好(見(jiàn)圖9).

HA組:無(wú)血管生成.

移植后第30天、第60天、第90天,Fat-HA組血管計(jì)數(shù)較Fat組多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(< 0.05);Fat組血管計(jì)數(shù)第90天較第30天多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(<0.05);Fat-HA組血管計(jì)數(shù)第90天,第60天均較第30天多,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(< 0.05)(見(jiàn)表1).

圖8 第30天Fat組CD31標(biāo)記毛細(xì)血管(X200);

圖9 第30天Fat-HA組CD31標(biāo)記毛細(xì)血管(X200)

表1 兩組移植物不同時(shí)間毛細(xì)血管計(jì)數(shù)

3 討論

自體顆粒脂肪理論上是最理想的的軟組織填充材料.自Neuber于1893年率先用自體脂肪移植治療軟組織缺損至今已有一百多年歷史,脂肪移植開(kāi)始在外科領(lǐng)域逐漸開(kāi)展.隨著20世紀(jì)80年代脂肪抽吸技術(shù)的盛行,出現(xiàn)了以脂肪顆粒形式獲取脂肪移植物的簡(jiǎn)便方法.此后,臨床醫(yī)生報(bào)道了脂肪顆粒注射進(jìn)行脂肪移植的較多病例,如今脂肪自體移植已被臨床廣泛應(yīng)用于整形美容外科.

許多學(xué)者對(duì)脂肪移植后的組織形態(tài)變化方面進(jìn)行了相關(guān)研究.關(guān)于移植脂肪組織最終的轉(zhuǎn)歸,存在兩種理論:一種是"宿主取代理論",另一種是"細(xì)胞存活理論",Neuhof[14]在1923年提出"宿主取代理論",宿主的組織細(xì)胞(可能是巨噬細(xì)胞)浸潤(rùn),吞噬壞死脂肪細(xì)胞釋放出的脂質(zhì),以纖維組織形式最終取代移植脂肪中的脂肪細(xì)胞.Hausberger[15]和Gurney[16]提出"細(xì)胞存活理論"指的是脂肪移植后,移植脂肪組織中部分存活的細(xì)胞,而且起初的移植脂肪細(xì)胞去分化成一種前體細(xì)胞,稱(chēng)之為脂肪前體細(xì)胞,并認(rèn)為這類(lèi)脂肪前體細(xì)胞能夠分化成為成熟的脂肪細(xì)胞."細(xì)胞存活理論"被廣泛接受,單純顆粒脂肪組織注射移植后,脂肪組織只能靠周?chē)M織液的浸潤(rùn)和滲透來(lái)維持營(yíng)養(yǎng)供應(yīng),超過(guò)該距離就需要生成新的血管來(lái)提供營(yíng)分.越來(lái)越多的研究逐漸達(dá)成了共識(shí),在自體顆粒脂肪移植后的轉(zhuǎn)歸過(guò)程中,移植早期建立充分和及時(shí)的血供,移植物及時(shí)地再血管化是影響其成活的關(guān)鍵.

判斷脂肪移植成功的標(biāo)準(zhǔn)是移植后脂肪是否能長(zhǎng)期維持原來(lái)的體積不變,而體積的維持是由移植脂肪細(xì)胞在新的環(huán)境中存活而不被吸收來(lái)決定的.然而,至今沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)的可靠技術(shù).在整形美容外科醫(yī)生中,Coleman技術(shù)[17]在脂肪移植中被廣泛運(yùn)用.這一技術(shù)的關(guān)鍵步驟是將移植脂肪進(jìn)行無(wú)創(chuàng)傷的處理以保證脆弱的脂肪細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整,并且將脂肪顆粒分成小份將其注射在移植區(qū)的多個(gè)平面.這一方法將脂肪顆粒與移植受區(qū)充分接觸,使移植脂肪得到充分的營(yíng)養(yǎng)和氧氣.所以筆者選擇長(zhǎng)條形的注射方法,盡可能使脂肪顆粒與移植受區(qū)充分接觸.盡管小心翼翼地按照此方法注射,但移植脂肪還是有不同程度的吸收.即使是最熟練的醫(yī)生,移植脂肪的體積在移植后3個(gè)月都有所減少,據(jù)報(bào)道[18],移植脂肪的吸收率在人體達(dá)到25%~ 90%,動(dòng)物體內(nèi)達(dá)60%~70%.在對(duì)508位整形外科醫(yī)生的一項(xiàng)調(diào)查中,92%的醫(yī)生認(rèn)為在脂肪移植后6個(gè)月脂肪有吸收,其中52%的醫(yī)生認(rèn)為吸收率超過(guò)50%.因此脂肪的吸收阻礙了自體脂肪移植在臨床的應(yīng)用.

為了維持移植脂肪的體積,目前的研究主要集中在取脂肪的技術(shù),脂肪的處理及脂肪干細(xì)胞的移植,而我們的研究主要是利用透明質(zhì)酸改善脂肪移植區(qū)的微環(huán)境.透明質(zhì)酸(Hyaluronicacid,簡(jiǎn)稱(chēng)HA)也稱(chēng)為透明質(zhì)酸鈉、玻璃酸鈉,天然的HA是一種黏多糖,由葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖二聚體的重復(fù)序列組成的線(xiàn)性多聚體,是哺乳動(dòng)物組織細(xì)胞外基質(zhì)的一種成分,于細(xì)胞水平在許多生物過(guò)程起關(guān)鍵作用.聚合物交聯(lián)形成水凝膠,含有高度親水的成分,水凝膠已經(jīng)被組織工程學(xué)用作細(xì)胞外基質(zhì)模擬產(chǎn)生類(lèi)似生理性的細(xì)胞培養(yǎng)微環(huán)境.透明質(zhì)酸有許多重要的生物物理及生物化學(xué)特性,例如有對(duì)移植和細(xì)胞存活有利的生理性含水率,組織樣的彈性有力傳導(dǎo)作用,提供傳遞營(yíng)養(yǎng)和細(xì)胞因子擴(kuò)散的能力,通過(guò)與細(xì)胞的受體的相互作用提高細(xì)胞粘附的作用.作為水凝膠,透明質(zhì)酸因其可用性,很好的生物相容性及其生物化學(xué)特點(diǎn)被應(yīng)用于組織工程學(xué)[10].透明質(zhì)酸做的不同孔徑的支架有利于脂肪干細(xì)胞的分化和增殖.通過(guò)為干細(xì)胞提供適當(dāng)?shù)募?xì)胞粘附,與細(xì)胞受體相互作用,激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo),透明質(zhì)酸能夠?yàn)楦杉?xì)胞的生長(zhǎng)及分化提供一個(gè)很好的環(huán)境[19].

透明質(zhì)酸有很多特性:①抗炎性:在炎癥早期,受損部位的HA來(lái)自炎癥區(qū)域的胞外基質(zhì)細(xì)胞,或者來(lái)自供應(yīng)受損部位的血管[20];HA通過(guò)與纖維蛋白凝塊相互作用而形成一個(gè)結(jié)構(gòu)框架,從而調(diào)節(jié)宿主的炎癥反應(yīng)并使胞外基質(zhì)細(xì)胞遷移到受傷部位[21];HA還誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞、成牙骨質(zhì)細(xì)胞和成骨細(xì)胞產(chǎn)生一系列的多肽,即前炎癥因子,而促進(jìn)炎癥應(yīng)答和血管內(nèi)皮細(xì)胞合成HA[22];HA還影響中性多形核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞功能,包括它們的遷移、黏附、吞噬和殺傷入侵病原物質(zhì)的作用[23];HA可作為前列腺素及其他生物活性分子的清除劑,從而抑制炎癥發(fā)生發(fā)展[24];②促進(jìn)組織重建和創(chuàng)傷愈合:在組織修復(fù)過(guò)程中,H A與膠原蛋白、纖維蛋白及其他一些基質(zhì)分子共同形成一個(gè)支持細(xì)胞遷移和黏附的暫時(shí)性支架,從而調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、遷移和分化[25];Chen等[26]認(rèn)為HA是創(chuàng)傷愈合過(guò)程中的重要成分,它參與了創(chuàng)傷愈合的一系列高度調(diào)節(jié)而有序的過(guò)程,包括炎癥及肉芽組織形成、上皮修復(fù)和組織改建;③降解產(chǎn)物促血管生成:HA的相對(duì)分子質(zhì)量是其具有促血管生成活性的決定因素,West等[27]的研究結(jié)果表明,透明質(zhì)酸酶降解HA生成的o-HA可促進(jìn)組織內(nèi)新血管的生成.Sattar等[30]用o-HA處理小鼠背部皮膚,發(fā)現(xiàn)小鼠表皮下血管數(shù)量明顯增加.筆者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示透明質(zhì)酸可以促進(jìn)自體脂肪顆粒的再血管化.筆者選擇單純透明質(zhì)酸(商品名:施沛特,主要成分為玻璃酸鈉,分子量:80萬(wàn)~150萬(wàn))與自體脂肪混合移植;④親水性:HA具有較強(qiáng)的黏彈性和潤(rùn)滑性,涂于皮膚表面,可形成一層保濕透氣膜,保持皮膚滋潤(rùn)亮澤.低分子量的H A能滲透到真皮層,促進(jìn)血液微循環(huán),有利于皮膚對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收,起到美容抗皺的作用.

本研究采用動(dòng)物實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)單純脂肪移植與脂肪-透明質(zhì)酸混合移植,脂肪的壞死有區(qū)別,差異在移植后第30天最明顯,但在第60天及第90天后沒(méi)有了區(qū)別;發(fā)現(xiàn)第30天單純透明質(zhì)酸移植已基本完全被吸收;發(fā)現(xiàn)第30天單純脂肪移植組與脂肪-透明質(zhì)酸混合移植,存留體積的比較有明顯差異.這一發(fā)現(xiàn)可能是因?yàn)橐韵略?第一,當(dāng)脂肪細(xì)胞移植入一個(gè)新的環(huán)境,他們會(huì)經(jīng)歷一個(gè)缺血期,它們?cè)谘苌汕皟H僅利用氧和養(yǎng)分的擴(kuò)散來(lái)存活.這一階段大量的脂肪細(xì)胞死亡,而對(duì)缺血有更大的耐受力的前脂肪細(xì)胞存活下來(lái)并分化為新的脂肪細(xì)胞.透明質(zhì)酸富含水分,一注入體內(nèi),就與周?chē)h(huán)境平衡,作為氧和養(yǎng)分的"存儲(chǔ)器".這些都有利于氧和養(yǎng)分進(jìn)入脂肪細(xì)胞及代謝產(chǎn)物的排出.而且,當(dāng)脂肪與透明質(zhì)酸混合,有利于分離和分散注射的脂肪顆粒以防聚集,減少缺血,這與自體顆粒脂肪移植所要求的技術(shù)一致.單純脂肪移植物中心脂肪容易壞死,但是脂肪透明質(zhì)酸混合物就沒(méi)有那么明顯.另一可能的原因是透明質(zhì)酸成為脂肪組織的保護(hù)層防止炎癥細(xì)胞的侵入.

在移植后期,脂肪細(xì)胞依賴(lài)血供來(lái)存活.值得一提的是單純脂肪移植的脂肪壞死明顯,但脂肪透明質(zhì)酸混合物沒(méi)有此現(xiàn)象.比較移植物的體積時(shí),單純脂肪移植物體積的減少比脂肪透明質(zhì)酸混合移植物體積減少的要小.當(dāng)混合移植物的脂肪與單純脂肪移植物比較,體積要維持的大些.筆者推測(cè)移植后30天移植物體積的維持是透明質(zhì)酸對(duì)早期脂肪壞死的抑制作用產(chǎn)生的.據(jù)我們所知,這是第一次將透明質(zhì)酸輔助脂肪移植并客觀地測(cè)量移植物體積的實(shí)驗(yàn)研究.單純脂肪移植用來(lái)觀察不同時(shí)間脂肪的成活率,單純透明質(zhì)酸移植用來(lái)觀察不同時(shí)間透明質(zhì)酸的存留率,到移植后30天,透明質(zhì)酸完全降解消失,將會(huì)鑒別出脂肪透明質(zhì)酸混合移植物中脂肪的成活率.

在體脂肪體積與離體是不一樣,脂肪移植后脂肪的體積有賴(lài)于可能的空間大小.換句話(huà)說(shuō),如果空間不夠,移植部位可能壓迫移植脂肪使其體積變小.所以我們選擇在大鼠背部皮膚比較松弛的部位作為注射點(diǎn).筆者將不同移植物注射于同一大鼠皮下,可以減少個(gè)體的差異.筆者在不同的時(shí)間比較不同的大鼠是實(shí)驗(yàn)的一個(gè)不足之處,以往的研究也表明不同的個(gè)體移植脂肪的體積存在差異,這點(diǎn)也得考慮到.

盡管以上提及的不足之處,實(shí)驗(yàn)表明在動(dòng)物體內(nèi)透明質(zhì)酸對(duì)于維持移植脂肪的體積具有明顯作用.將脂肪與透明質(zhì)酸混合充填是一個(gè)新的充填方法,我們不知道最佳的混合比例,所以選擇1:1混合,這樣可以使脂肪細(xì)胞與透明質(zhì)酸充分混合.以后會(huì)進(jìn)一步研究不同比例混合的注射效果,設(shè)想如果只添加少量的透明質(zhì)酸就能提高脂肪移植的成活率,會(huì)降低成本,為大量的脂肪移植提供一個(gè)可靠的方法.

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The preliminary study on the effect of hyaluronic acid on the survival of autologous fat graft in rats

CHEN Xiao1,2,ZHANG Hong-wei1,LI Ping-song2
(1.Nanjing Medical University,Nanjing 210000,Jiangsu,China;2.Northern Jiangsu People's Hospital, Clinical Medical School,Yangzhou University Affiliated Hospital to Yangzhou University,Yangzhou 22500,Jiangsu,China)

ObjectiveAutologousfattransplantationisacommontechniqueforsofttissue augmentation in aesthetic and reconstructive surgery;however,the degree of fat graft take can be unpredictable.Hyaluronic acidhas been shown to be a promising cell carrier in adipose tissue engineering.Objectives To investigate the effect of a hyaluronic acid on autologous fat graft survival, angiogenesis,and volume maintenance in rats.Methods Fat was harvested from the groins of 18 rats,processed,and injected beneath the animals'dorsums to form three grafts:one containing fat alone and one containing hyaluronic acid alone,one containing fat and hyaluronic acid in a 1:1 mix. The grafts were removed at 30th day,60th day,90th day,to measure fat graft volume and calculate the survival rate of the graft,as well as to observe the color,shape and volume of the grafts.. Histological studies were performed after sacrifice to evaluate fat necrosis and blood vessel density. Results All grafts were clinically viable.HA aft disappeared at 15th day after injection.The survival rate of Fat-HA graft of 30th day,60th day and 90th day were significantly higher than Fat graft(<0.05).At 30th day,60th day and 90th days after injection,blood vessel density in Fat-HA grafts was significantly greater than those in the grafts containing fat alone(<0.05).Conclusion When mixed with fat,hyaluronic acid can improve early fat graft survival and may enhance vascularity and prolong volume maintenance.

autologous fat graft;hyaluronic acid;soft tissue augmentation

R622 R332

A

1008-6455(2014)21-1793-06

2014-08-28

2014-10-23

編輯/張惠娟

章宏偉,男,教授,主任醫(yī)師.E-mail:zhanghw1966@aliyun.com