腫瘤凋亡抑制因子survivin在腮腺腫瘤中的表達(dá)及臨床意義

汪 鵬 沈顯軍 張菊紅 鄭海紅 施更生

腮腺腫瘤是口腔頜面部較常見的腫瘤之一，約占涎腺腫瘤的80%，其良惡性的比例為(4～6)∶1［1］。腮腺腫瘤組織類型繁雜，不同類型的腫瘤生物學(xué)行為相差較大，影響著患者的愈后及生存質(zhì)量。腮腺腫瘤的主要治療手段以手術(shù)為主，對于一些惡性程度較高的腫瘤可加以適當(dāng)?shù)姆呕煟?］。但是手術(shù)治療對患者顏面部影響仍較大，也影響患者的心理健康，手術(shù)還常并發(fā)局部瘢痕、面癱、耳顳神經(jīng)綜合征等，因此如何更有效地對該類腫瘤進(jìn)行診療，值得我們進(jìn)一步研究。survivin又名生存素，屬于凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein，IAP)家族成員，是迄今發(fā)現(xiàn)相對分子質(zhì)量最小、作用最強的凋亡抑制因子之一，隨后的研究表明其在多種腫瘤組織中過表達(dá)，影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后。本實驗采用免疫組化的方法研究survivin在腮腺良惡性腫瘤的表達(dá)，報道如下。

材料與方法

1．一般材料:收集筆者醫(yī)院病理科2004年11月～2012年11月間手術(shù)切除的腮腺腫瘤標(biāo)本共計182例作為實驗組(男性65例，女性117例;患者年齡17～89歲，平均年齡45．7歲)，其中腮腺多形性腺瘤44例，腮腺其他良性腫瘤20例，腮腺惡性腫瘤118例。另取40例腫瘤邊界外1～2cm的正常腮腺組織作為對照組。所有病例術(shù)前均未接受過放、化療等治療。TNM分期及組織學(xué)分級均來自病歷原始記載，TNM分期采用UICC(2002)標(biāo)準(zhǔn)，組織病理學(xué)分類參照WHO 2005年標(biāo)準(zhǔn)。

2．方法:所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，切片厚4μm。免疫組化采用Envision法，按試劑說明書進(jìn)行操作，抗原修復(fù)采用高壓鍋高溫修復(fù)，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固。一抗為 survivin兔抗人單克隆抗體(YJ061908CS)，購于Abcam公司，Envision免疫組化檢測試劑盒(GK500705)購自基因科技上海有限公司。用PBS代替一抗作為空白對照。

3．結(jié)果判定:survivin陽性信號為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。染色的評分方法:按陽性細(xì)胞數(shù)所占比例并參考著色的強度分為:陽性細(xì)胞數(shù)為0(-)，陽性細(xì)胞數(shù)＜25%為弱陽性(+)，陽性細(xì)胞數(shù)25% ～50%為中度陽性(++)，陽性細(xì)胞數(shù)＞50%為強陽性(+++)。

4．統(tǒng)計學(xué)方法:應(yīng)用SPSS 18．0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗及Fisher確切概率法分析，以P＜0．05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1．survivin在腮腺正常腺體組織及腫瘤中表達(dá)情況:survivin在腮腺正常組織中未見表達(dá)，在腮腺腫瘤中主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中，部分表達(dá)于腫瘤細(xì)胞核中，不同腮腺腫瘤中survivin呈現(xiàn)差異性表達(dá)(表1，圖1)。

表1 survivin總體表達(dá)情況

圖1 腮腺正常腺體組織及腫瘤組織中survivin表達(dá)(Envision二步法染色，×200)

2．survivin在腮腺良性腫瘤及腮腺惡性腫瘤中表達(dá)的比較:64例腮腺良性腫瘤有15例陽性表達(dá)，陽性率為23．44%。118例腮腺惡性腫瘤中有76例呈現(xiàn)陽性表達(dá)，陽性率為64．41%，兩者具有統(tǒng)計學(xué)差異(表2)。

表2 腮腺良性腫瘤及腮腺惡性腫瘤中survivin的表達(dá)

3．腮腺惡性腫瘤中survivin陽性表達(dá)與臨床生物學(xué)特性的關(guān)系:χ2檢驗顯示118例腮腺惡性腫瘤中，survivin的陽性表達(dá)腫瘤的生物學(xué)行為、臨床分期及腫瘤直徑有關(guān):其中生物學(xué)行為高度惡性組腫瘤的survivin陽性表達(dá)率為77．2%(34/44)，低度惡性組腫瘤的survivin的陽性表達(dá)率為56．7%(42/74)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;臨床分期Ⅰ、Ⅱ期腫瘤survivin陽性率為53．8%(42/78)，Ⅲ、Ⅳ期腫瘤 survivin陽性率為75%(30/40)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．05);腫瘤直徑≤2cm組陽性率為59．52%(28/52)，腫瘤直徑＞2．0cm組陽性率為72．73%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。但survivin在腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、患者年齡、性別等之間的陽性率作比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0．05，表3)。

表3 survivin的表達(dá)與臨床生物學(xué)特性的關(guān)系

討 論

腮腺腫瘤是一種口腔頜面外科較常見的唾液腺腫瘤，腫瘤的病理類型、組織學(xué)形態(tài)復(fù)雜。腮腺良性腫瘤中除腮腺多形性腺瘤具有復(fù)發(fā)傾向及反復(fù)發(fā)作后易引起惡變外，其余良性腫瘤一般規(guī)范手術(shù)切除后，腫瘤復(fù)發(fā)情況較少，患者愈后佳［3］。惡性腫瘤的療效、近遠(yuǎn)期生存率因腫瘤的具體類型及生物學(xué)行為而差別較大。目前對于該腫瘤的基因或是生物學(xué)層面的了解還比較欠缺，對于惡性腫瘤的治療也局限于手術(shù)加以術(shù)后的放療、化療等輔助治療，病人的預(yù)后及遠(yuǎn)期生存率未有明顯改善［4］。在分子病理學(xué)時代，結(jié)合腫瘤的相關(guān)分子對腮腺腫瘤尤其是惡性腫瘤進(jìn)行臨床病理研究，研究其腫瘤分子學(xué)改變，有可能為腫瘤的預(yù)后判斷、開展分子靶向治療及個體化治療提供新思路。

survivin屬凋亡抑制蛋白家族成員，是迄今發(fā)現(xiàn)分子質(zhì)量最小、作用最強的凋亡抑制因子之一，從其被發(fā)現(xiàn)就引起了人們的廣泛關(guān)注。最早由Ambrosini等［5］于1997年應(yīng)用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1(EPR-1)44cDNA在人類基因庫的雜交篩選中分離得到的，它定位于染色體17q25上。研究表明，survivin不僅能直接通過抑制caspase-3和caspase-7的活性來達(dá)到抑制細(xì)胞凋亡，也能作用于細(xì)胞的有絲分裂周期，調(diào)控細(xì)胞分裂，促進(jìn)細(xì)胞增殖，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限制增殖［6～8］。survivin的組織分布有特異性，僅表達(dá)于胚胎和發(fā)育期的胎兒組織，終末分化的成人組織(胸腺、生殖腺除外)不表達(dá)，而在大多數(shù)腫瘤組織中均有表達(dá)［9］。近年來的研究顯示survivin在多種惡性腫瘤中呈現(xiàn)過表達(dá)，提示其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)，survivin過強的表達(dá)往往預(yù)示著腫瘤的不良預(yù)后［10～13］。

本研究通過對182例腮腺腫瘤及40例腫瘤周圍正常腺體組織作免疫組化發(fā)現(xiàn)，survivin在正常腮腺組織中不表達(dá)，良性腫瘤中多形性腺瘤的陽性率為31．82%，其他腮腺良性腫瘤的表達(dá)陽性率為5%，兩者表達(dá)率有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0．05)，筆者分析認(rèn)為這與多形性腺瘤具有侵襲性生長的生物學(xué)特性密切相關(guān)。118例腮腺惡性腫瘤中 survivin的表達(dá)率為64．41%與腮腺良性腫瘤中 survivin的陽性率23．44%有顯著差異(P＜0．05)。雖然 survivin在腮腺腫瘤中廣泛表達(dá)，但不同組織學(xué)類型、不同生物學(xué)行為的腫瘤之間仍存明顯差異，從正常腺體組織，到一般良性腫瘤到多形性腺瘤直至腮腺惡性腫瘤sur-vivin的表達(dá)依次增強，可以推測survivin與腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，對腫瘤的早期診斷具有潛在價值。由于survivin在腮腺正常組織中不表達(dá)，日后也可利用基因靶向治療腮腺惡性腫瘤。

本研究同時對腮腺惡性腫瘤的survivin表達(dá)作了分析，發(fā)現(xiàn)survivin的陽性表達(dá)率與患者的年齡、性別及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性，但與腫瘤的直徑、TNM分期及腫瘤的惡性程度等顯著相關(guān)。腫瘤的直徑越大，臨床分期越晚，腫瘤的惡性程度越高則survivin的表達(dá)陽性率越高，survivin的基因檢測有利于對腮腺惡性腫瘤早診斷、早治療。

綜上所述，survivin在腮腺腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用，進(jìn)一步明確其作用機制后可對腮腺腫瘤的診斷、基因靶向治療及腫瘤預(yù)后評估提供新的選擇。

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