連翹種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙艷，李安平，孫斌，王進(jìn)明，王玉龍，王棟，肖淑賢

（山西振東道地藥材開(kāi)發(fā)有限公司，山西長(zhǎng)治047100）

連翹[Forsythiasu spensa（Thunb.）Vahl]是山西省野生的優(yōu)勢(shì)藥材樹(shù)種，也是該省道地藥材品種之一。其果入藥，具有清熱解毒，消腫散結(jié)的功效。用于風(fēng)熱感冒，瘟病初起，溫?zé)崛霠I(yíng)，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋尿閉[1]。目前連翹種子沒(méi)有檢驗(yàn)和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，無(wú)法對(duì)市場(chǎng)上連翹種子的質(zhì)量進(jìn)行有效檢驗(yàn)，使得連翹種子檢驗(yàn)工作沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)，種子的質(zhì)量控制受到較大制約，因此，開(kāi)展連翹種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究是中藥材規(guī)范化生產(chǎn)亟需解決的問(wèn)題。

1 材料與方法

1.1 材料

光照恒溫培養(yǎng)箱，干燥箱，水浴鍋，電子分析天平（萬(wàn)分之一）。試驗(yàn)用連翹種子采自山西安澤、陵川、聞喜等16個(gè)產(chǎn)地，來(lái)源見(jiàn)表1，室溫儲(chǔ)藏備用。

1.2 方法

1.2.1 凈度分析。采用徒手減半法分取樣品，將種子鋪在光滑潔凈的平板上，充分混合均勻。以四分法選取種子樣品，選取10 g種子，稱重后，分選，將純凈種子、其他種子、果梗枝梗和雜質(zhì)分開(kāi)[2]，分別稱重，凈度分析后各成分之和與原始重量之差不能超過(guò)5%，超過(guò)該誤差，須重新進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2 千粒重測(cè)定。凈度分析后的凈種，隨機(jī)挑選100粒10份，500粒4份，1 000粒3份，用萬(wàn)分之一電子天平稱重，分別計(jì)算各處理標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)，每重復(fù)的變異系數(shù)應(yīng)小于4.0%，選取變異系數(shù)最小的作為連翹干重測(cè)定方法[3]。

表1 連翹種子來(lái)源

1.2.3 含水量測(cè)定。為確定種子含水率最佳測(cè)定方法，分別采用整粒105℃、整粒130℃、磨碎105℃、磨碎130℃4種方法測(cè)定種子含水率，每隔1 h稱重一次[4]，比較4種方法測(cè)定結(jié)果與烘干時(shí)間的關(guān)系，從而確定種子含水量的最佳測(cè)定方法。每種方法3次重復(fù)，每份2 g樣品。

1.2.4 種子吸水曲線測(cè)定。為確定種子吸水飽和期，取100粒凈種，稱重，置燒杯中40℃水沖洗3次，燒杯內(nèi)加3～4倍于種子體積水，置于25℃水浴鍋中，每隔2 h，濾紙吸取種子表面水，稱重，記錄，直至種子重量開(kāi)始減少時(shí)為止[5]。

1.2.5 發(fā)芽率及發(fā)芽勢(shì)檢測(cè)。取凈種，清洗后加水置于25℃水浴鍋中浸泡24 h，于恒溫培養(yǎng)箱中（溫度25℃、濕度65%、全光照60%），分別用濾紙、脫脂棉、紗布、砂子、海綿為材料進(jìn)行發(fā)芽床預(yù)試驗(yàn)，確定連翹種子最適發(fā)芽床[6]。凈種25℃水浴24 h，棄上面漂浮種子，每皿100粒，每份種子3次重復(fù)，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察，計(jì)數(shù)，注意補(bǔ)水，保持濾紙濕潤(rùn)。

1.2.6 生活力測(cè)定。采用TTC檢測(cè)法，采用4因素4水平正交試驗(yàn)，浸種時(shí)間設(shè)置 20、24、28、32 h4個(gè)水平；染色溫度設(shè)置 25、30、35、40 ℃4 個(gè)水平；染色時(shí)間設(shè)置 12、16、20、24 h 4 個(gè)水平；TTC 濃度設(shè)置0.1%、0.2%、0.3%、0.5%4個(gè)水平。種子浸泡后沿種胚橫切，留50%種胚置于染色液中，觀察種胚染色情況并記錄，重復(fù)3次，每次50粒[7]。種胚完全著色或大部分著色者為有生活力種子，大部分不著色或完全不著色者為無(wú)生活力種子。

1.2.7 種子形態(tài)鑒定。隨機(jī)從凈種樣品中選取種子，借助放大鏡、游標(biāo)卡尺逐粒記錄種子形態(tài)特征（包括種子大小、長(zhǎng)、寬、形狀、顏色、光澤及表面斑點(diǎn)）。每次3重復(fù)，每次100粒[8]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同產(chǎn)地連翹種子的凈度

連翹種子的凈度大多在74%～98%，雜質(zhì)中以花芽居多，不同產(chǎn)地種子顯著性差異不大，其中沁源種子凈度最低，凈度僅為74.20%，雜質(zhì)中花芽、果梗較多，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 不同產(chǎn)地連翹種子重量

隨機(jī)選取3份凈重，在百粒重、五百粒重、千粒重這3種方法中，發(fā)現(xiàn)3份材料采用五百粒法稱取干重的變異系數(shù)都小于4%；而采用千粒重法，雖然公司材料的變異系數(shù)很小，但東寺頭材料卻接近4%。五百粒重差異最小，因此，選五百粒重作為連翹種子重量的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，種子五百粒重多為1.7 g左右，其中長(zhǎng)治縣種子大而飽滿，五百粒重高達(dá)2.14 g，沁水種子五百粒重最小，為1.230 4 g（表3）。

2.3 不同產(chǎn)地連翹種子的含水率

經(jīng)試驗(yàn)，采用高溫整粒法測(cè)定含水率，連翹種子含水率多在6%左右，其中沁水種子含水率最高，為7.71%；而左權(quán)和壺關(guān)種子含水率最低，為6.01%（表4）。

2.4 種子吸水曲線

由圖1可知。種子浸種吸漲立即啟動(dòng)，種子重量急劇增加，浸種4～12 h是吸水最快期，而后緩慢吸水，至24 h后，吸水停止。在后期的種子活力檢測(cè)中種子要預(yù)先浸泡24 h，使種子充分吸漲后再進(jìn)行TTC染色。

表2 不同產(chǎn)地連翹種子凈度分析結(jié)果

表3 連翹種子重量分析預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

圖1 連翹種子吸漲曲線

2.5 不同產(chǎn)地種子活力檢測(cè)

采用TTC檢測(cè)法，采用4因素4水平正交試驗(yàn)，浸種時(shí)間 20、24、28、32 h；染色溫度 25、30、35、40℃；染色時(shí)間 12、16、20、24 h；TTC 濃度 0.1%、0.2%、0.3%、0.5%，結(jié)果見(jiàn)表5。

由表5可知，用TTC法染色，浸種時(shí)間24 h，TTC濃度為0.1%，染色時(shí)間為16 h，染色溫度35℃。不同產(chǎn)地連翹種子生活力在66%～96%，壺關(guān)種子活力較高，屯留種子活力較低。

2.6 不同產(chǎn)地種子發(fā)芽率檢測(cè)

不同產(chǎn)地連翹種子發(fā)芽率差異明顯。其中發(fā)芽最快的是東寺頭種子，發(fā)芽率最高的是陵川種子，為91%。圖2為長(zhǎng)治縣連翹種子發(fā)芽情況。其中發(fā)芽率最差的為聞喜種子，沒(méi)有發(fā)芽。在發(fā)芽率相同時(shí)，發(fā)芽勢(shì)高的種子，說(shuō)明種子生命力強(qiáng)，在場(chǎng)地的播種發(fā)芽率較高，播種后幼苗出土正常（表4）。

表4 不同產(chǎn)地連翹種子凈度、干重及含水率

表5 長(zhǎng)治縣連翹種子活力檢測(cè)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果

2.7 連翹種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的制定

以連翹種子凈度、五百粒重、含水率、生活力、發(fā)芽率5項(xiàng)指標(biāo)，去除發(fā)芽率低于50%的不合格的4份種子[9]，用SPSS軟件進(jìn)行K聚類分析，最終類中心值見(jiàn)表6。

以連翹種子凈度、五百粒重、含水率、生活力、發(fā)芽率5項(xiàng)指標(biāo)作為連翹種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)的參考值，并在此基礎(chǔ)上制定了連翹種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（表7）。除去發(fā)芽率低于50%的不合格種子，12份試樣中Ⅰ級(jí)有3個(gè)，Ⅱ級(jí)有5個(gè)，Ⅲ級(jí)有4個(gè)。該標(biāo)準(zhǔn)可為連翹種子品質(zhì)檢驗(yàn)提供一定參考。

3 結(jié)論與討論

圖2 連翹種子發(fā)芽情況

（1）連翹種子分級(jí)的5項(xiàng)指標(biāo)中，發(fā)芽率和五百粒重2項(xiàng)指標(biāo)作為主要分級(jí)依據(jù)。其中發(fā)芽率為重中之重，因?yàn)榘l(fā)芽率的高低決定了種子的實(shí)際利用價(jià)值，依據(jù)發(fā)芽率可以計(jì)算出田間實(shí)際種子播種量，參考價(jià)值很高。種子活力是種子發(fā)芽和出苗率、幼苗生長(zhǎng)潛勢(shì)、植株抗逆能力和生產(chǎn)潛力的總和，是種子品質(zhì)的重要指標(biāo)。而種子重量可以反映種子的成熟度和飽滿度。含水量、凈度、種子活力3個(gè)指標(biāo)作為次要分類依據(jù)，種子凈度反映清潔度與純度，含水率反映種子對(duì)儲(chǔ)藏條件的要求，凈度和含水率也可以通過(guò)再加工來(lái)提高質(zhì)量[10]。

表6 K類中心聚類分析結(jié)果

表7 連翹種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

（2）種子優(yōu)劣是決定藥材種植、生產(chǎn)、加工后能否獲得后期藥材高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、穩(wěn)定的關(guān)鍵，特別是無(wú)害的中藥材，種子質(zhì)量監(jiān)控更是不可或缺。筆者提供的連翹種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)是在基礎(chǔ)試驗(yàn)研究上提出的，是連翹生產(chǎn)質(zhì)量管理的重要組成部分，能為野生撫育基地選擇連翹種子提供一定的參考。

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