血小板膜外周型苯二氮卓受體在初發(fā)腦梗死后抑郁中的作用*

陳 嫄， 陳春富， 李聰聰， 肖 蕭

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東濟(jì)南 250021)

血小板膜外周型苯二氮卓受體在初發(fā)腦梗死后抑郁中的作用*

陳 嫄， 陳春富△， 李聰聰， 肖 蕭

(山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東濟(jì)南 250021)

目的：觀察卒中后抑郁(PSD)患者血小板膜外周型苯二氮卓受體(PBRs)的變化，探討PBRs在PSD中的作用。方法：卒中后抑郁組為初發(fā)腦梗死后PSD患者43例、腦梗死組為初發(fā)腦梗死患者59例、對照組為健康獻(xiàn)血者46名。采用Hamilton抑郁量表(HAMD)評定患者抑郁程度。提取外周血血小板膜，應(yīng)用放射性配基［3H］PK11195結(jié)合實(shí)驗(yàn)測定PBRs特異結(jié)合活性。結(jié)果：［3H］PK11195結(jié)合活性3組之間有顯著差異(P＜0.01)。與對照組［(298.2±25.1)pmol/(g protein)］比較，腦梗死組［3H］PK11195結(jié)合活性［(1 410.8±41.4) pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.01)。與腦梗死組比較，PSD組［3H］PK11195結(jié)合活性［(361.7±30.6)pmol/g protein］顯著降低(P＜0.01)。PSD組男性、女性患者之間比較，［3H］PK11195結(jié)合活性差異不顯著。PSD組［3H］PK11195結(jié)合活性與患者病程無顯著相關(guān)性(r=0.27，P＞0.05)，與HAMD評分呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.44，P＜0.01)。結(jié)論：PSD患者血小板膜PBRs結(jié)合活性下降，PBRs影響抑郁程度。

卒中后抑郁;腦梗死;外周型苯二氮卓受體;血小板

迄今，關(guān)于卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)的發(fā)病機(jī)制尚不清楚。中樞神經(jīng)系統(tǒng)以外也存在苯二氮卓結(jié)合位點(diǎn)，被稱為外周型苯二氮卓受體(peripheral-type benzodiazepine receptors，PBRs)，其結(jié)構(gòu)、性質(zhì)、功能與中樞型苯二氮卓受體均不相同，PBRs參與細(xì)胞呼吸，調(diào)節(jié)細(xì)胞增生，促進(jìn)類固醇合成［1］。近幾年來已經(jīng)證實(shí)，PBRs變化與焦慮癥、恐懼癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)等多種神經(jīng)癥患者的臨床癥狀有關(guān)，但對抑郁癥與PBRs相關(guān)性研究報(bào)道較少，并且存在爭議。卒中后神經(jīng)癥患者PBRs是否發(fā)生變化作者未見文獻(xiàn)報(bào)道。本文觀察首次發(fā)病的腔隙性梗死患者和PSD患者外周血血小板膜PBRs的變化，探討PBRs在PSD中的作用。

材料和方法

1 研究對象

2005年12月至2008年3月住院的首次發(fā)病的腔隙性梗死患者102例，診斷依據(jù)1995年全國第四屆腦血管病會(huì)議制定的腦血管病診斷標(biāo)準(zhǔn)，均經(jīng)顱腦CT或MRI檢查證實(shí)梗死灶大小約5～15 mm。排除診斷包括:①既往有腦卒中病史;②既往有抑郁發(fā)作史及其它精神障礙;③意識障礙;④癡呆或明顯智能障礙;⑤失語;⑥存在腦葉皮質(zhì)梗死;⑦存在靜息性腦梗死;⑧合并代謝紊亂、中毒、感染以及嚴(yán)重心、肺、肝、腎和免疫功能異?；蚱渌鼑?yán)重的急性期軀體疾病;⑨合并變性疾病、惡性病變、先天性代謝異常疾病、外傷、腫瘤、炎癥或脫髓鞘等其它腦器質(zhì)性疾病;⑩有企圖自殺史者。進(jìn)入本研究的病例中，PSD組43例，男29例，女14例，平均年齡(66.4±7.8)歲，病程3～72 h，平均(43.8±23.5)h。診斷依據(jù)《中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)第3版》(CCMD-3)。腦梗死組59例，其中男39例，女20例，平均(65.9 ±8.1)歲，病程3～72 h，平均(45.5±22.9)h。對照組46人來自健康獻(xiàn)血者，其中男31例，女15例，平均(35.2±7.4)歲。3組間年齡差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。PSD組與腦梗死組間病程差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2 主要藥品和儀器

［3H］PK11195購自PerkinElmer Life Science，純度97%，比活性83.5 Ci/mmol(3.09 TBq/mmol)。非標(biāo)記PK11195和考馬斯亮藍(lán)均為Sigma產(chǎn)品。牛血清白蛋白為北京中山試劑公司產(chǎn)品，4℃保存。AvantiTMJ-3低溫高速冷凍離心機(jī)和Rotor J-30.50、Rotor J-21轉(zhuǎn)子均購自Beckman。

3 方法

3.1 神經(jīng)功能缺損評定 用改良的愛丁堡-斯堪的那維亞神經(jīng)功能缺損評分量表(the modified Edinburgh-Scandinavian stroke scale，MESSS)，最高分為45分，1～15分為輕型，16～30分為中型，31～45分為重型。

3.2 抑郁程度評定 采用 Hamilton抑郁量表(Hamilton depression rating scale，HAMD;17項(xiàng)版本)測量，HAMD總分＜8分為正常，≥8分為輕度抑郁，≥18分為中度抑郁，≥24分為重度抑郁。

3.3 血小板膜制備 上午8～9時(shí)取肘靜脈血20 mL，用3.8%枸櫞酸鈉5 mL抗凝，離心(180×g，4℃)15 min，吸取上清液富含血小板血漿，離心(1 500×g，4℃)15 min，棄上清，在沉淀中加入20 mL Tris-HCl(10 mmol·L-1，pH 7.4)低滲緩沖液，4℃，1～2 h完成溶血，離心(12 000×g，4℃)20 min得沉淀，用等滲磷酸鹽緩沖液(PBS，0.01 mol/L，pH 7.4)重復(fù)洗滌2次，制得白色絮狀物血小板膜，-80℃保存。

3.4 放射性配基結(jié)合實(shí)驗(yàn)［2］取血小板膜標(biāo)本在室溫下解凍，加入冰冷的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.4)，混勻，每管調(diào)整蛋白質(zhì)濃度約為1.0～2.0 g/L。取100 μL膜懸液，加入冰冷的0.05 mol/L Tris-HCl緩沖液(pH 7.4)200 μL，非特異結(jié)合管中加入非標(biāo)記PK11195，終濃度為1 μmol/L，孵育10 min，然后每管加入［3H］PK11195 10 μL，終濃度5 nmol/L，每個(gè)樣品均為雙復(fù)管，在4℃孵育60 min，迅速真空抽濾到玻璃纖維素濾膜上，用20 mL冰冷的Tris-HCl緩沖液重復(fù)洗滌濾膜終止反應(yīng)。濾膜移至5 mL閃爍液(PPO 5 g/L，POPOP 0.1 g/L，溶媒甲苯∶曲拉通100=2∶1加至1 000 mL)內(nèi)。暗適應(yīng)至少8 h以減少化學(xué)發(fā)光，于L9800液體閃爍計(jì)數(shù)儀(Beckman)上計(jì)數(shù)，每個(gè)標(biāo)本計(jì)數(shù)1 min。受體特異結(jié)合計(jì)算公式:［總計(jì)數(shù)(min-1)-非特異性結(jié)合計(jì)數(shù)(min-1)］÷總計(jì)數(shù)(min-1)×［H3］PK11195物質(zhì)的量(pmol)÷樣品蛋白質(zhì)量(g)。蛋白含量測定采用考馬斯亮藍(lán)法。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。采用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件分析。其中，性別差異用Χ2檢驗(yàn)。計(jì)量資料多組比較以年齡為協(xié)變量，采用協(xié)方差分析，組間比較采用LSD法;兩組病程及MESSS評分差異采用t檢驗(yàn)。指標(biāo)間相關(guān)性采用雙變量偏相關(guān)分析方法。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1 神經(jīng)功能缺損及抑郁程度評分

PSD患者M(jìn)ESSS評分8～19分，平均(14.6± 3.4)分。HAMD總分17～27分，平均(21.8±4.5)分。腦梗死組MESSS評分8～21分，平均(12.8± 5.9)分。HAMD總分0～7分，平均(2.6±0.9)分。兩組SSS評分比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2 血小板膜PBRs結(jié)合活性的變化

外周血血小板膜PBRs結(jié)合活性3組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與對照組［(298.2± 25.1)pmol/(g protein)］比較，腦梗死組［3H］PK11195結(jié)合活性［(1410.8±41.4)pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.01)，PSD組［(361.7±30.6) pmol/(g protein)］顯著升高(P＜0.05)。與腦梗死組比較，PSD組［3H］PK11195結(jié)合活性顯著降低(P＜0.01)。

以年齡為協(xié)變量，PSD組男性［(355.4±33.2) pmol/(g protein)］、女性［(365.1±30.9)pmol/(g protein)］之間比較，［3H］PK11195結(jié)合活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。腦梗死組男性［(1 423.2± 53.2)pmol/(g protein)］、女性［(1 405.4±42.3) pmol/(g protein)］之間［3H］PK11195結(jié)合活性比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 相關(guān)性分析

以年齡為協(xié)變量，PSD組［3H］PK11195結(jié)合活性與患者病程無顯著相關(guān)性(r=0.27，P＞0.05)，與患者HAMD總分顯著相關(guān)(r=-0.44，P＜0.01);與HAMD因子抑郁情緒(r=-0.63，P＜0.01)、自殺(r=-0.67，P＜0.01)、入睡困難(r=-0.39，P＜0.01)、激越(r=-0.46，P＜0.01)、精神焦慮(r= -0.34，P＜0.05)、胃腸道癥狀(r=-0.31，P＜0.05)、全身癥狀(r=-0.32，P＜0.05)評分顯著相關(guān)，與其它因子評分無顯著相關(guān)性(P＞0.05)。

討論

近幾年來有關(guān)PBRs變化在焦慮癥、恐懼癥、創(chuàng)傷后應(yīng)激反應(yīng)中作用的報(bào)道有逐年增加趨勢。1999年Soreni等［3］通過病例對照研究發(fā)現(xiàn)，與年齡、性別匹配的對照組比較，9例住院的自殺3次以上年輕患者血小板PBRs密度(Bmax)下降了35%，與其他學(xué)者對廣泛性焦慮癥(generalized anxiety disorder，GAD)和創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)患者測得的結(jié)果類似，認(rèn)為PBRs在人類自殺慢性應(yīng)激反應(yīng)中起著一定的作用。2005年Marazziti等［4］也發(fā)現(xiàn)自殺人群血小板［3H］PK11195結(jié)合密度顯著低于健康對照組。由于PBRs受應(yīng)激和激素的調(diào)節(jié)，所以作者認(rèn)為自殺人群血小板PBRs密度下降可能是應(yīng)激狀態(tài)的非特異表現(xiàn)，另外可能源于與自殺傾向密切相關(guān)的甾體物質(zhì)代謝異常。Johnson等［5］檢查了53例廣義社交恐怖癥(generalized social phobia，GSP)患者血小板PBRs常數(shù)即Bmax和解離常數(shù)(Kd)，發(fā)現(xiàn)患者組PBRs Bmax顯著低于對照組，提示PBRs與GSP有關(guān)。Gavish等［6］通過病例對照研究發(fā)現(xiàn)，與年齡、性別匹配的對照組比較，18例海灣戰(zhàn)爭PTSD患者血小板PBRs Bmax下降了62%，與其他學(xué)者對GAD患者測得的結(jié)果類似，認(rèn)為PBRs下調(diào)是適應(yīng)性反應(yīng)，旨在防止在高度覺醒狀態(tài)下糖皮質(zhì)激素的慢性過度產(chǎn)生。Micale等［7］用高膽固醇飼料喂養(yǎng)Wistar大鼠2個(gè)月，連續(xù)14 d給各組大鼠腹腔注射異喹啉PK11195(1 mg/kg，qd)，發(fā)現(xiàn)飼以標(biāo)準(zhǔn)飼料的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)積分下降，高膽固醇飼料及標(biāo)準(zhǔn)飼料組動(dòng)物均出現(xiàn)了焦慮癥狀。1991年Rocca等［8］發(fā)現(xiàn)強(qiáng)迫癥(obsessive-compulsive disorder，OCD)患者血小板PBRs下降，但1993年Weizman等研究未發(fā)現(xiàn) OCD患者血小板PBRs異常。Rocca等［9］認(rèn)為上述結(jié)果上的差異與所選病例患者病程不同有關(guān)，他們再次利用受體結(jié)合方法和PCR技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，與10例健康對照比較，8例慢性O(shè)CD患者淋巴細(xì)胞PBRs Bmax以及PBRs mRNA明顯減少，7例發(fā)作性O(shè)CD患者PBRs Bmax以及PBRs mRNA無顯著變化。如果將慢性O(shè)CD患者和發(fā)作性O(shè)CD患者數(shù)據(jù)合并統(tǒng)計(jì)，與10例健康對照比較PBRs Bmax差異不顯著。

迄今對于抑郁癥與PBRs的相關(guān)性研究報(bào)道較少，尚缺乏PSD患者PBRs變化的文獻(xiàn)資料。2001年Kurumaji等［10］檢查了情感障礙患者PBRs基因2種錯(cuò)義突變情況，發(fā)現(xiàn)2種錯(cuò)義突變等位基因頻率、基因型計(jì)數(shù)、單體型分布與雙相性情感障礙(躁抑癥)、抑郁癥沒有顯著關(guān)系，認(rèn)為PBRs未參與遺傳性情感障礙易感性的發(fā)病機(jī)制。Nakamura等［11］利用PCR技術(shù)檢查了對91例恐懼癥(phobic disorder，PD)患者和178例對照者PBRs基因多態(tài)性，分析發(fā)現(xiàn)PD患者與對照間485G＞A(CGT→CAT)基因型(P＜0.05)和等位基因(P＜0.05)差異顯著，提示PBRs基因變異影響PD易感性。Weizman等［12］觀察了14例未經(jīng)治療的抑郁患者和13例健康人血小板PBRs的變化，發(fā)現(xiàn)2組間血小板PBRs Bmax和Kd無顯著差異，Bmax與患者抑郁程度(HAMD積分、Beck抑郁量表積分)無顯著相關(guān)性，與患者焦慮程度(Hamilton焦慮量表積分)也無顯著相關(guān)性，由此認(rèn)為嚴(yán)重抑郁有別于應(yīng)激及某種焦慮癥，與PBRs的變化無關(guān)。2008年Chelli等［13］觀察了40例門診抑郁患者血小板膜PBRs的亞單位——異喹啉結(jié)合位點(diǎn)(18 kD translocator protein，TSPO;PBRs的代名詞)特異配基［3H］PK11195結(jié)合，發(fā)現(xiàn)與20例健康人比較，伴發(fā)分離性焦慮的抑郁患者TSPO密度顯著下降，但無分離性焦慮的抑郁患者TSPO密度無顯著變化。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，TSPO密度與分離焦慮癥狀臨床量表評分及分離焦慮癥狀自評量表積分顯著相關(guān)，而與HAMD總分及HAMD分測驗(yàn)焦慮/軀體癥狀因子分無顯著關(guān)系，表明TSPO過度表達(dá)有望成為分離性焦慮的生物學(xué)指標(biāo)。近期利用大鼠、小鼠進(jìn)行的一系列實(shí)驗(yàn)結(jié)果均證實(shí)，PBRs新型配基YL-IPA08具有抗抑郁和抗焦慮作用［14］。本研究3組間年齡比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，為此多組間PBRs比較以年齡為協(xié)變量采用了協(xié)方差分析，以便排除年齡這一混雜因素的影響。研究發(fā)現(xiàn)，PSD組［3H］PK11195結(jié)合活性顯著低于病例對照腦梗死組，與HAMD總分顯著相關(guān)，與患者病程無顯著相關(guān)性，提示PBRs的變化參與了 PSD發(fā)病機(jī)制。相關(guān)分析結(jié)果顯示［3H］PK11195結(jié)合活性主要影響自殺、抑郁情緒等靶癥狀，其次是激越、入睡困難，也影響精神焦慮、胃腸道癥狀及全身癥狀。一般認(rèn)為，急性應(yīng)激PBRs表達(dá)上調(diào)，慢性應(yīng)激PBRs表達(dá)下降。鑒于此，推測PSD的應(yīng)激反應(yīng)可能系慢性應(yīng)激類，除了腦部變化外，可能涉及其它臟器PBRs的變化，有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，PSD患者血小板膜［3H］PK11195結(jié)合活性降低，與患者抑郁程度顯著相關(guān)，提示PBRs有望成為PSD的生物學(xué)指標(biāo)及藥物干預(yù)的新靶點(diǎn)。由于所選病例基線資料參差不齊，未分析受體學(xué)參數(shù)的變化以及不同病變部位對［3H］PK11195結(jié)合活性的影響。同時(shí)因入組的新診斷病例數(shù)偏少，所以本研究結(jié)果尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證。

［1］ 程 超，陳春富.外周型苯二氮卓受體與腦缺血［J］.國際腦血管病雜志，2009，17(4):305-308.

［2］陳春富，郎森陽，左萍萍，等.血小板膜與腦細(xì)胞線粒體和突觸體外周型苯二氮卓受體的相關(guān)性及生物學(xué)意義［J］.吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2006，32(4):582-585.

［3］Soreni N，Apter A，Weizman A，et al.Decreased platelet peripheral-type benzodiazepine receptors in adolescent inpatients with repeated suicide attempts［J］.Biol Psychiatry，1999，46(4):484-488.

［4］Marazziti D，Dell＇Osso B，Baroni S，et al.Decreased density of peripheral benzodiazepine receptors in psychiatric patients after a suicide attempt［J］.Life Sci，2005，77 (26):3268-3275.

［5］Johnson MR，Marazziti D，Brawman-Mintzer O，et al.Abnormal peripheral benzodiazepine receptor density associated with generalized social phobia［J］.Biol Psychiatry，1998，43(4):306-309.

［6］Gavish M，Laor N，Bidder M，et al.Altered platelet peripheral-type benzodiazepine receptorin posttraumatic stress disorder［J］.Neuropsychopharmacology，1996，14 (3):181-186.

［7］Micale V，Scapagnini G，Colombrita C，et al.Behavioral effects of dietary cholesterol in rats tested in experimental models of mild stress and cognition tasks［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2008，18(6):462-471.

［8］Rocca P，F(xiàn)errero P，Gualerzi A，et al.Peripheral-type benzodiazepine receptors in anxiety disorders［J］.Acta Psychiatr Scand，1991，84(6):537-544.

［9］Rocca P，Beoni AM，Eva C，et al.Lymphocyte peripheral benzodiazepine receptor mRNA decreases in obsessivecompulsive disorder［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2000，10(5):337-340.

［10］Kurumaji A，Nomoto H，Yamada K，et al.No association of two missense variations of the benzodiazepine receptor (peripheral)gene and mood disorders in a Japanese sample［J］.Am J Med Genet，2001，105(2):172-175.

［11］ Nakamura K，Yamada K，Iwayama Y，et al.Evidence that variation in the peripheral benzodiazepine receptor (PBR)gene influences susceptibility to panic disorder［J］.Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet，2006，141B(3):222-226.

［12］Weizman A，Burgin R，Harel Y，et al.Platelet peripheraltype benzodiazepine receptor in major depression［J］.J Affect Disord，1995，33(4):257-261.

［13］Chelli B，Pini S，Abelli M，et al.Platelet 18 kDa Translocator Protein density is reduced in depressed patients with adult separation anxiety［J］.Eur Neuropsychopharmacol，2008，18(4):249-254.

［14］Zhang LM，Zhao N，Guo WZ，et al.Antidepressant-like and anxiolytic-like effects of YL-IPA08，a potent ligand for the translocator protein(18 kDa)［J］.Neuropharmacology，2013，81C:116-125.

Effects of peripheral-type benzodiazepine receptors in platelet membrane on patients with depression after first attack of cerebral infarction

CHEN Yuan，CHEN Chun-fu，LI Cong-cong，XIAO Xiao
(Department of Neurology，Shandong Provincial Hospital Affiliated to Shandong University，Jinan 250021，China.E-mail: chencf301@163.com)

AIM:To evaluate the changes of peripheral-type benzodiazepine receptors(PBRs)in platelet membrane in post-stroke depression(PSD)patients and to investigate the effects of PBRs on PSD.METHODS:Fortythree patients with PSD，fifty-nine patients with first-ever cerebral infarction and fifty-six healthy volunteers participated in this study.Platelet membrane in venous blood was prepared.Binding assay of the radioactive PBRs antagonist［3H］PK11195 to platelet membrane was performed.RESULTS:A significant difference of［3H］PK11195 binding was found among the 3 groups(P＜0.01).Compared with the healthy volunteers［(298.2±25.1)pmol/(g protein)］，a highly significant increase in［3H］PK11195 binding was observed in platelet membrane in the patients with first attack of cerebral infarction［(1 410.8±41.4)pmol/(g protein)，P＜0.01］.Compared with the patients with first attack of cerebral infarction，a significant reduction in［3H］PK11195 binding was detected in platelet membrane in the patients with PSD［(361.7±30.6)pmol/(g protein)，P＜0.01］.In the patients with PSD，no significant difference of［3H］PK11195 binding was found between men and women(P＞0.05).［3H］PK11195 binding was related to the score of Hamilton depression rating scale(r=-0.44，P＜0.01)but not to the duration of cerebral infarction(r=0.27，P＞0.05).CONCLUSION:PBRs binding activity in platelet membrane decreases in the patients with PSD and affects the degree of depression.

Post-stroke depression;Cerebral infarction;Peripheral-type benzodiazepine receptors;Blood platelets

R743.3;R749.4

A

10.3969/j.issn.1000-4718.2014.03.028

1000-4718(2014)03-0543-04

2013-10-14

2014-01-07

山東省自然科學(xué)基金重點(diǎn)項(xiàng)目(No.Z2007C03)

△通訊作者Tel:0531-67886354;E-mail:chencf301@163.com