野生馬齒莧脂肪酸化學(xué)成分的分離與鑒定

趙心童 趙仁宏 王立祥 賀圣文 趙風(fēng)源 侯蕾蕾

1.山東大學(xué)醫(yī)學(xué)院，山東濟(jì)南 250012；2.濰坊醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東濰坊 261053；3.濰坊醫(yī)學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，山東濰坊 261053

野生馬齒莧是民間“清熱、解毒、散血、消腫”的傳統(tǒng)中藥，具有藥食兩用的作用，國內(nèi)外對(duì)馬齒莧有效成份進(jìn)行的分析表明，野生馬齒莧含有大量對(duì)心臟病有防治效果的生物活性成份，具有調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、減少脂質(zhì)沉積，抗動(dòng)脈粥樣硬化（AS）形成的新藥理作用。 但目前對(duì)馬齒莧脂肪酸有效成分進(jìn)行提取分析，探討其有效成分影響AS 大鼠基因表達(dá)的分子機(jī)制未見報(bào)道。 為此，本課題擬對(duì)馬齒莧脂肪酸有效成分的種類和含量進(jìn)行鑒定解析，以期為馬齒莧有效成分防治AS 的分子機(jī)制提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，進(jìn)而為開發(fā)應(yīng)用打下良好基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 樣品

馬齒莧鮮品全草（莖、葉及種子），采集后涼至半干、烘干，粉碎成粉末（產(chǎn)地：濰坊），經(jīng)鑒定為馬齒莧科植物馬齒莧Portulace Oleracea L.。

1.2 儀器

Agilent 6890N-5973N 型氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）。條件：進(jìn)樣口溫度280℃，HP-INNOWax（60 m×250 μm×0.25 μm）毛細(xì)管柱，柱流速5.0 mL/min，溫度變化100℃-10℃-280℃（15 min）。

2 方法與結(jié)果

2.1 馬齒莧有效成分的提取

取馬齒莧全草粉末置濾紙筒內(nèi)，加石油醚索氏提取12 h，至無色，回收石油醚，將油轉(zhuǎn)移至干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，于105℃干燥3 h，后稱重，計(jì)算含油量。

2.2 馬齒莧有效成分的鑒定分析

馬齒莧脂肪油皂化-甲酯化處理：取30 mg 馬齒莧提取脂肪油于離心管中，加入0.51 mol/L KOH 甲醇液，于70℃水浴中回流10 min，放冷，加入15%三氟化錋甲醇液2 mL，70℃水浴回流5 min，取出放冷，加入飽和氯化鈉2 mL，加入正乙烷5 mL，猛烈振搖，離心10 min，取上清液。離心機(jī)轉(zhuǎn)速為2000 r/min。應(yīng)用氣質(zhì)譜分析法鑒定分析馬齒莧脂肪酸的種類和含量。

2.3 馬齒莧脂肪酸氣質(zhì)譜解析結(jié)果

2.3.1 馬齒莧脂肪酸各相關(guān)主要成分離子流圖如下：依次分別為亞油酸、14-十八烯酸、α-亞麻酸、 油酸，見圖1～4。

2.3.2 馬齒莧脂肪酸氣質(zhì)譜解析結(jié)果見表1。結(jié)果顯示：馬齒莧全草含脂肪油4.04%，油中含亞油酸（22.57%）、ω-3 脂肪酸（ω-3FA）—α-亞麻酸（1.35%）、油酸（1.27%）、14-十八烯酸（24.37%）等不飽和脂肪酸共計(jì)49.57%。

圖1 亞油酸離子流圖

圖2 14-十八烯酸離子流圖

圖3 α-亞麻酸離子流圖

圖4 油酸離子流圖

表1 馬齒莧脂肪酸氣質(zhì)譜解析結(jié)果

3 討論

野生馬齒莧兼有藥品和食品雙重價(jià)值，國內(nèi)外對(duì)馬齒莧的有效成分進(jìn)行的分析表明，野生馬齒莧含有大量對(duì)心臟病有防治效果的生物活性成分。本課題對(duì)馬齒莧鮮品全草（莖、葉及種子）脂肪油進(jìn)行了提取，經(jīng)皂化-甲酯化處理，應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜分析法鑒定分析馬齒莧脂肪酸有效成分的種類和含量[1-3]。結(jié)果顯示，馬齒莧脂肪油富含多不飽和脂肪酸，其有效成分亞油酸、ω-3 脂肪酸（ω-3FA）—α-亞麻酸（α-LNA）、油酸比較豐富，具有降血脂、抗動(dòng)脈粥樣硬化、防治心血管疾病的作用，研究結(jié)果為馬齒莧有效成分防治動(dòng)脈粥樣硬化的分子機(jī)制提供了理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，從而，為研制和開發(fā)新型抗動(dòng)脈粥樣硬化、防治心血管疾病藥物打下基礎(chǔ)。

亞油酸、α-LNA 作為人體必需脂肪酸，是體內(nèi)各組織生物膜的結(jié)構(gòu)材料，也是合成人體一系列前列腺素的前體，它必須由體外攝取。 正常人從食物中攝取α-LNA 后、經(jīng)△6-脫氫酶、碳鏈延長(zhǎng)酶等的作用，生成一系列代謝產(chǎn)物， 其中最重要的是二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。EPA 是體內(nèi)三烯前列腺素前體，DHA 是大腦、視網(wǎng)膜等神經(jīng)系統(tǒng)磷脂的主要成分。 α-LNA 具有降血脂、降血壓、抑制過敏反應(yīng)、抗血栓、抗癌等藥理作用[4-6]。

ω-3FA（α-LNA）只有在魚類脂肪中才有較高的含量，而在蔬菜類植物中不可能存在，但在馬齒莧中卻意外發(fā)現(xiàn)存在。曾有報(bào)道，馬齒莧富含亞麻酸，是不可多得的亞麻酸天然植物資源，并且也有相當(dāng)數(shù)量的二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA），本研究檢測(cè)到α-亞麻酸（1.35%），其含量較低可能與地域種類、檢測(cè)方法有關(guān)，有待進(jìn)一步全面研究[7-8]。近年來，以EPA 和DHA 為代表的ω-3FA 治療心血管病效果以被肯定，市場(chǎng)上出現(xiàn)了大量富含EPA、DHA 的魚油制品。自從國外發(fā)現(xiàn)馬齒莧等植物中含有α-LNA 后，又提倡由綠葉資源通過膳食攝取α-LNA。 目前美國和加拿大發(fā)現(xiàn)，每日從富含α-LNA 的植物油中攝取1.2～2.0 g α-LNA，對(duì)維持健康是足夠的。到目前為止，還未見到以馬齒莧為原料開發(fā)的有防治心血管病療效的制劑，表明在這方面尚有大量的工作要做。 而且富含亞麻酸的植物油與魚油相比，具有相對(duì)穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)，不含對(duì)人體有害的膽固醇以及過量服用可引起中毒的VA 和VD，可以用做烹飪油，在長(zhǎng)期持續(xù)的膳食補(bǔ)充計(jì)劃中比它魚油更為有利[9-10]。

馬齒莧在我國資源豐富，儲(chǔ)量大且無污染，即可自然生長(zhǎng)又可人工栽培，成本低廉，隨著對(duì)它不斷深入的藥理研究及在食品、醫(yī)藥方面的廣泛應(yīng)用，馬齒莧的藥理活性和生物利用價(jià)值將更加顯示出來[11-12]。特別是隨著人們生活水平的提高，對(duì)自身的保健更加重視，而馬齒莧作為一種新型的含有各種營(yíng)養(yǎng)成分的綠色食品，是人們的最佳選擇。 故它在藥品、食品、保健品、飼料、獸藥等方面具有廣闊的開發(fā)利用價(jià)值。

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