中成藥及保健食品中違法添加諾氟沙星快速篩查方法的研究

丘淦才， 潘 宇， 郭智聰

(佛山市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 佛山528000)

前列腺增生和前列腺炎是男性前列腺的常見疾病。前列腺疾病需要長期治療、難以治愈、容易反復(fù)。治療前列腺疾病的有抗菌藥，也有中成藥，其中抗菌藥起效迅速，但長期服用有較嚴(yán)重的副作用［1］。另外市場上還有一些聲稱有助于前列腺疾病治療的保健食品。為了迎合部分前列腺疾病患者既想快速起效，又想副作用小的心理，一些不良廠商在中成藥或保健食品中擅自添加諾氟沙星等喹諾酮類抗菌藥，患者往往在不知情的情況下，服用所謂的保健食品，同時又服用抗菌藥，對患者產(chǎn)生危害，特別是肝、腎功能不全的患者，其危害性很大［2］。

洪美華等［3］采用薄層色譜法建立了中成藥和保健食品中違法添加氟喹諾酮類抗菌藥的快速篩查方法。目前尚沒有中成藥及保健食品中添加喹諾酮類抗菌藥的理化快速方法的報(bào)道。

1 快速篩查方法的研究

1.1 快速篩查方法 取本品1 ～2 粒(片)，置試管中，加三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)1 mL，強(qiáng)力振搖10 s，過濾，加1 mL 0.01 mol/L 鹽酸溶液至濾液中，振搖10 s，靜置分層，吸取上層液體置另一試管中，滴2 ～3 滴硫酸鐵銨溶液，振搖，陽性樣品立即顯橙黃色，陰性樣品不變色，檢測結(jié)果見圖1。圖1 中左側(cè)為陰性樣品，右側(cè)為陽性樣品。

1.2 提取試劑的選擇 諾氟沙星在水中極微溶解，在乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等能用于萃取的溶劑中幾乎不溶，在鹽酸溶液中易溶。大部分中成藥、保健食品中含水溶性色素，如果用水或0.01 mol/L 鹽酸溶液提取，則水溶性色素容易對顯色反應(yīng)造成嚴(yán)重干擾。用乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等作為提取溶劑則可避免水溶性色素對顯色反應(yīng)的干擾。但諾氟沙星在乙酸乙酯、乙醚、三氯甲烷等有機(jī)溶劑中極微溶解，其溶解的諾氟沙星只能與顯色劑起微弱的顏色變化，也容易受到干擾。為了避免水溶性色素對顯色反應(yīng)的干擾和完全的溶解樣品中的諾氟沙星，本法采用三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)為提取試劑［4］。經(jīng)試驗(yàn)，10 mg 的諾氟沙星能在1mL 的三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)中完全溶解，并且三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)能和萃取試劑完全的分層，提取液也很容易過濾。

圖1 樣品檢測結(jié)果

1.3 萃取試劑的選擇 因諾氟沙星易溶于0.01 mol/L 鹽酸溶液，用0.01 mol/L 鹽酸溶液作萃取劑，能基本將溶解在三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)的諾氟沙星萃取至水層(上層液體)，且上層液體幾乎無色，避免了萃取液本底顏色對顯色反應(yīng)的干擾。

1.4 硫酸鐵銨顯色液的配制方法 稱取硫酸鐵銨(AR)2.000 0 g 溶于2.5 mL 濃HNO3中，用水溶液稀釋到250 mL［5］。

2 HPLC-DAD 確證方法

2.1 波長的選擇 取諾氟沙星對照品，用0.01 mol/L 鹽酸溶液制成含約15 μg/mL 的溶液，在波長210 ～350 nm 處進(jìn)行掃描，結(jié)果λmax=278.2 nm。因而取278 nm 作為本方法的檢測波長［6］。

2.2 色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性 參考有關(guān)文獻(xiàn)，填充劑為十八烷基硅烷鍵合硅膠，檢測器為DAD，以0.01 mol/L 四丁基溴化銨溶液(準(zhǔn)確稱取3.22 g 四丁基溴化銨，溶解于1 000 mL水中，用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0 ± 0.1)-乙腈(94 ∶6)為流動相，體積流量1 mL/min，檢測波長為278 nm，進(jìn)樣量為20 μL。理論板數(shù)以諾氟沙星計(jì)不低于3 000，諾氟沙星峰與其他色譜峰的分離度大于1.5［7-8］。

2.3 對照品溶液的制備 取諾氟沙星對照品約10 mg，用0.01 mol/L 鹽酸溶液制成約50 μg/mL 的溶液。

2.4 供試品溶液的制備 取本品1 粒或1 片(片劑先磨碎)，置20 mL 量瓶中，加0.01 mol/L 鹽酸溶液適量，超聲20 min 使溶解后，放冷，再用0.01 mol/L 鹽酸溶液稀釋至刻度。濾過。

2.5 測定法 取對照品溶液及供試品溶液各20 μL，注入HPLC-DAD，記錄色譜圖及光譜圖。

若供試品色譜圖中有與諾氟沙星對照品色譜圖保留時間一致的色譜峰，且該色譜峰的紫外光譜圖與諾氟沙星對照品的紫外光譜圖一致，則初步確證供試品中含有諾氟沙星。HPLC-DAD 圖譜見圖2 ～5。

圖2 諾氟沙星對照品HPLC 圖譜

圖3 陽性樣品HPLC 圖譜

圖4 諾氟沙星對照品DAD 圖譜

3 快速篩查方法總結(jié)

取從市場或網(wǎng)上購買的30 份樣品，用上述擬定的快速篩查方法進(jìn)行檢測，同時用上述HPLC-DAD 確證方法對快速篩查的結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果見表1。

從表1 可以看出，該快速篩查方法的假陽性率為0，假陰性率為0，準(zhǔn)確率為100%［9］。

圖5 陽性樣品DAD 圖譜

表1 樣品的快篩結(jié)果與確證結(jié)果

4 討論

4.1 本法采用采用三氯甲烷-甲醇(2 ∶1)為提取試劑，能完全提取諾氟沙星，亦能避免水溶性色素對反應(yīng)的干擾。

4.2 由于三氯化鐵、檸檬酸鐵等Fe (Ⅲ)試劑的水溶液顏色很深，滴入萃取液中容易對顯色反應(yīng)造成嚴(yán)重顏色干擾。因而采用硫酸鐵銨溶液作為顯色液，其顏色較淺，滴1 ～2 滴至經(jīng)萃取后的樣品溶液不會干擾顯色反應(yīng)。

4.3 本快速篩查方法快速，只需3 ～5 min，且操作簡單、專屬性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確度高，不需要專門的設(shè)備，適合于現(xiàn)場操作，能滿足基層單位現(xiàn)場監(jiān)督檢驗(yàn)需要。

［1］ 張敏健，鄧庶民，郭 軍，等. 慢性前列腺炎中西醫(yī)結(jié)合診療指南(試行版)［J］. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，27(11):1052-1054.

［2］ 黃玉蘭. 中成藥中非法添加化學(xué)藥成分的危害［EB/OL］.四川省食品藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站，2007-11-28 ［2010-03-12］. http://www. scfda. gov. cn/CL0206/9254. htmL

［3］ 洪美華，陳偉軍，蔡詩填，等. 中成藥、保健食品中非法添加氟喹諾酮類抗生素的研究概況與對策［J］. 中國醫(yī)藥指南，2010，30(8):214-215.

［4］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:2000 年版二部［S］. 北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2000.

［5］ 任乃林，李 紅. 分光光度法測定諾氟沙星膠囊中諾氟沙星含量研究［J］. 現(xiàn)代科學(xué)儀器，2006(5):112-113.

［6］ 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典:2010 年版二部［S］. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［7］ 福建省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局. DB35/T 898-2009 水產(chǎn)品中喹諾酮類藥物殘留量的測定(高效液相色譜法)［S］.

［8］ 路 偉，郭 華，曾繁濤. 高效液相色譜法同時測定復(fù)方氧氟沙星滴耳液中2 組分的含量［J］. 中國藥房，2005，16(10):778-779.

［9］ 池浩波，張夢虹，李國毅，等. 抗風(fēng)濕類中成藥和保健食品中非法添加雙氯芬酸鈉快速篩查方法研究［J］. 中成藥，2011，33(6):1084-1086.