薏仁降濁湯對大鼠急性痛風性關(guān)節(jié)炎模型的影響

胡旭光， 溫 亞， 戴王強， 韓宗余， 劉德明， 韓 彬

(廣東藥學院，廣東 廣州510006)

痛風是關(guān)節(jié)炎的一種，其顯著特征為尿酸鈉結(jié)晶在關(guān)節(jié)及其周圍組織沉積，通常認為高尿酸血癥是發(fā)生痛風的前期狀態(tài)［1］。由于疼痛、運動障礙以及致殘等原因，痛風性關(guān)節(jié)炎患者的生活質(zhì)量受到嚴重影響［2］。隨著人們飲食習慣和生活方式的改變，痛風患病率有明顯上升的趨勢，因此越來越受到醫(yī)學界的重視。目前治療痛風性關(guān)節(jié)炎的常用藥物秋水仙堿、非甾體類消炎藥，雖然療效較好，但容易產(chǎn)生嚴重的毒副作用［3］，因此尋找防治痛風的藥物及保健品越來越引起了人們的重視。

中醫(yī)藥對痛風的認識和治療有著悠久的歷史，在臨床實踐中取得了良好的效果療效［4］。薏仁降濁湯由薏苡仁、百合和木瓜組成，該方源于清代黃云鵠所著的《粥譜》所收載的藥膳——薏米百合粥。方中以薏苡仁為君，佐以百合和木瓜，加入粳米共熬制為粥，對于痛風的防治具有顯著作用［5］。該方所含三味藥均為藥食同源的中藥，具有安全、毒副作用小的優(yōu)勢。本實驗研究薏仁降濁湯對大鼠痛風關(guān)節(jié)炎的治療作用，為開發(fā)防治痛風藥物或保健品提供實驗依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 動物 SD 大鼠48 只，SPF 級，雄性，體質(zhì)量(200 ±20)g，購于廣東省醫(yī)學實驗動物中心，許可證號:SCXK (粵)2008-0002。

1.2 藥品和試劑 秋水仙堿片(西雙版納藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為11807);薏仁降濁湯(百合、木瓜、薏苡仁由廣東藥學院附屬醫(yī)院中藥房提供，經(jīng)廣東藥學院中藥學院中藥鑒定教研室李書淵教授鑒定為正品);尿酸(購自美國Sigma 公司);PGE2Elisa 檢測試劑盒(上海研謹生物科技有限公司，產(chǎn)品編號CSB-E07967r)、尿酸測定試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20120525)。

1.3 儀器 TDL80-2B 型臺式離心機(上海安亭科學儀器廠制造)，UV-24500 紫外分光光度計(日本島津公司)，足趾容積測量儀(成都泰盟科技有限公司)。

2 方法

2.1 尿酸鈉制備 參照韓彬等［6］的方法，配制10 mL 尿酸鈉溶液。

2.2 薏仁降濁水煎液制備 按配伍稱取中藥，加入5 倍水量煎煮45 min，過濾，再加入同樣的水量煎煮30 ～45 min，過濾，合并兩次的水煎液加熱濃縮到1 g/mL 備用。實驗時配成所需質(zhì)量濃度使用。

2.3 給藥和模型復(fù)制 48 只SD 大鼠隨機分為6 組，分別為正常組、模型組、陽性藥秋水仙堿組、薏仁降濁湯高劑量組(9.6 g/kg)、薏仁降濁湯中劑量組(4.8 g/kg)、薏仁降濁湯低劑量組 (2.4 g/kg);給藥組每只灌胃給藥0.2 mL/10 g，正常組、模型組每日灌胃等體積生理鹽水，各組連續(xù)灌胃給藥7d。試驗前用記號筆于每鼠兩后足踝關(guān)節(jié)下0.5 mm 處畫一條清晰的直線，以備測量足容積時使用。第5 天給藥1 h 后，參照文獻［7］ 所提供的方法造模，分別于造模后1、2、4、8、24、48 h 用足趾容積測量儀測量各組大鼠右后足踝關(guān)節(jié)下0.5 mm 處的體積，并測相同部位的左側(cè)后足踝關(guān)節(jié)體積作為對照。按下列公式計算足腫脹率。其中V右和V左分別為各組大鼠右側(cè)和左側(cè)后足踝關(guān)節(jié)下0.5 mm處的體積。

2.4 薏仁降濁湯對大鼠血清尿酸、PGE2水平的影響 給藥結(jié)束后，用乙醚將各組動物麻醉后，眼眶后靜脈叢取血，然后將血液離心分離，所得血清置于-20 ℃冰箱保存待測。血尿酸水平的檢測按試劑盒說明書進行，血清PGE2水平采用酶聯(lián)免疫法測定，操作亦按試劑盒說明書步驟進行。

2.5 關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)學檢測 給藥結(jié)束后，處死大鼠，摘取右后足踝關(guān)節(jié)經(jīng)固定，切片，染色處理后于光鏡下觀察其病理組織形態(tài)學變化?；ぱ装Y程度依據(jù)王穎芳等［8］方法分為:無炎癥(-)計為0 分;關(guān)節(jié)囊壁內(nèi)層見灶性炎性細胞浸潤(+)，計為1 分;關(guān)節(jié)囊壁內(nèi)、外層見彌散性分布炎性細胞浸潤，計為2 分;比較各組關(guān)節(jié)滑膜炎癥變化的分值。

3 統(tǒng)計方法

4 結(jié)果

4.1 薏仁降濁湯對大鼠痛風性關(guān)節(jié)炎足腫脹的影響 結(jié)果顯示:3 個劑量的薏仁降濁湯在給藥后4、8 h 均可顯著降低足腫脹率，與模型組有統(tǒng)計學差異 (P ＜0.05，P ＜0.01)。薏仁降濁湯高劑量組在給藥后2 h 開始見效，在致炎后48 h 仍顯示出顯著的抑制作用，而薏仁降濁湯中、低劑量組在致炎后不同時間也顯示出抑制作用，但抑制時間相對較短。結(jié)果見表1。

表1 薏仁降濁湯對MSU 大鼠足腫脹(足體積)的影響(±s，n=8)

表1 薏仁降濁湯對MSU 大鼠足腫脹(足體積)的影響(±s，n=8)

注:與模型組比較，* P ＜0.05;＊＊P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)致炎后不同時間足腫脹率/%1 h 2 h 4 h 8 h 24 h 48 h模型組 - 23.9 ±3.1 31.0 ±3.0 37.3 ±4.8 40.7 ±2.9 36.0 ±3.4 33.3 ±2.7薏仁降濁湯高劑量組 9.6 18.1 ±2.7 20.7 ±2.2* 21.3 ±2.8* 24.8 ±2.3＊＊ 27.0 ±2.2* 24.5 ±2.1*薏仁降濁湯中劑量組 4.8 19.3 ±2.1 21.8 ±4.5* 25.0 ±3.5* 26.2 ±3.0* 27.6 ±2.7* 29.9 ±2.9薏仁降濁湯低劑量組 2.4 18.8 ±2.5 22.8 ±2.9 25.6 ±2.5* 26.9 ±2.8* 30.9 ±3.5 30.2 ±2.4秋水仙堿組 0.33 12.1 ±1.8＊＊ 16.8 ±2.5＊＊ 20.8 ±4.4* 24.2 ±2.5＊＊ 26.5 ±2.7* 25.7 ±2.5*

4.2 薏仁降濁湯對痛風性關(guān)節(jié)炎大鼠血尿酸和血清PGE2水平的影響 大鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注入MSU 48 h 后，模型組大鼠血尿酸和血清PGE2水平顯著升高，與正常組統(tǒng)計學比較具有顯著性差異(P ＜0.01)，證明造模成功。給藥后3 個劑量組的薏仁降濁湯大鼠血清尿酸和PGE2水平均顯著降低，與模型組比較，差異具有統(tǒng)計學意義。結(jié)果見表2。

表2 薏仁降濁湯對MSU 大鼠血清尿酸和PGE2 影響(±s，n=8)

表2 薏仁降濁湯對MSU 大鼠血清尿酸和PGE2 影響(±s，n=8)

注:與正常組比較，# P ＜0.01;與模型組比較，* P ＜0.05;＊＊P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)尿酸/(μmol·L -1)PGE2/(pg·L -1)- 63.9 ±18.2 5.5 ±4.2模型組 - 139.4 ±38.5# 15.8 ±14.8#薏仁降濁湯高劑量組 9.6 85.8 ±35.3＊＊ 6.6 ±2.2＊＊薏仁降濁湯中劑量組 4.8 87.3 ±37.2* 8.7 ±3.8*薏仁降濁湯低劑量組 2.4 93.1 ±30.6* 8.9 ±5.0*秋水仙堿組 0.33 86.4 ±31.2* 5.4 ±2.5正常組＊＊

4.3 薏仁降濁湯對大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理改變和炎癥變化的影響 病理結(jié)果顯示:正常組大鼠足踝關(guān)節(jié)軟組織未見異常，滑膜組織光滑平整，軟組織內(nèi)可見正常血管、脂肪組織，未見炎細胞浸潤。模型組大鼠滑膜及周圍軟組織廣泛充血、水腫，表面有纖維素黏附，滑膜細胞呈灶性增生，炎細胞彌漫性浸潤，浸潤的細胞主要為中性粒細胞和淋巴細胞。陽性藥組滑膜及周圍軟組織內(nèi)可見灶性淋巴細胞浸潤，組織輕度水腫。薏仁降濁湯高劑量組大鼠滑膜及周圍軟組織內(nèi)僅見少量炎細胞浸潤，滑膜組織較平整。中劑量組大鼠滑膜及周圍軟組織內(nèi)見中等量淋巴細胞彌漫性浸潤，滑膜細胞局部呈灶性增生，間質(zhì)纖維組織增生。低劑量組大鼠滑膜及周圍軟組織內(nèi)見大量淋巴細胞彌漫性浸潤，滑膜細胞局部呈灶性增生，大部分小血管擴張充血。結(jié)果見圖1。

圖1 大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織病理形態(tài)學改變(×200)

足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥結(jié)果表明:模型組足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥分值顯著升高，與正常組比較有顯著性差異(P ＜0.01);薏仁降濁湯高、中劑量組大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥分值均顯著降低，與模型組統(tǒng)計學比較有顯著性差異(P ＜0.01)。見表3。

表3 薏仁降濁湯對大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥變化的影響(±s，n=8)

表3 薏仁降濁湯對大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥變化的影響(±s，n=8)

注:與正常組比較，#P ＜0.01;與模型組比較，* P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥分值正常組0.3 ±0.2模型組 - 1.9 ±0.3#薏仁降濁湯高劑量組 9.6 0.7 ±0.2*薏仁降濁湯中劑量組 4.8 0.8 ±0.3*薏仁降濁湯低劑量組 2.4 1.3 ±0.6秋水仙堿組 0.33 0.4 ±0.4-*

5 討論

血尿酸濃度過高，尿酸以鈉鹽的形式沉積在關(guān)節(jié)、軟骨，形成痛風［9］。中醫(yī)學認為痛風歸屬“痹證”、 “歷節(jié)風”等范疇，其發(fā)病多由飲食不節(jié)、情志緊張、感受六淫之邪，尤其是外感風、寒、濕之邪，引起氣血凝滯，經(jīng)絡(luò)痹阻，久之蘊而化熱，導(dǎo)致該病寒熱錯雜，風濕俱存，故痛風之癥纏綿難愈［10］。根據(jù)該病的病機，目前中醫(yī)對本病的治療多使用大量清熱祛濕的中藥，但祛風散寒的中藥運用不足，臨床療效不夠理想［11］。本方以甘寒的薏苡仁為君，可清熱利濕，健脾止瀉。 《本草經(jīng)》記載“薏苡仁主筋急拘攣……風濕痹”;《世醫(yī)得效方》記載“薏苡仁治久風濕痹，補正氣，……”。溫性木瓜臣，可祛風除濕。平性的百合為佐，可潤肺止咳、滋養(yǎng)心神。方中薏苡仁和木瓜相配，寒溫共用，使寒而不滯血、溫而不生熱，風祛濕清而經(jīng)絡(luò)暢通，加入性平的百合，全方可收清熱祛濕、消腫止痛之功。

本次實驗結(jié)果顯示:薏仁降濁湯可抑制尿酸鹽引起的急性大鼠足腫脹、降低血清尿酸和PGE2水平、改善大鼠足踝關(guān)節(jié)滑膜組織炎癥?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn):薏苡仁浸出物具有顯著的鎮(zhèn)痛抗炎作用，能顯著抑制多種關(guān)節(jié)炎及毛細血管通透性，亦可明顯降低炎性組織中的PGE2的量，臨床報道含有薏苡仁的方劑用于亞急性和慢性風濕性關(guān)節(jié)炎，療效確切［12］。木瓜中所含的木瓜總苷經(jīng)藥效學的篩選，發(fā)現(xiàn)其具有抗炎鎮(zhèn)痛免疫調(diào)節(jié)作用，能有效對抗多種關(guān)節(jié)炎和足腫脹［13］。百合含有秋水仙堿等多種生物堿，可用于痛風發(fā)作關(guān)節(jié)痛的輔助治療，其機理是通過抑制多核白細胞的趨化、增殖和吞噬尿酸鹽晶體;抑制乳酸和溶酶體在組織中的釋放;提高關(guān)節(jié)腔內(nèi)pH 值，減少尿酸鹽結(jié)晶析出而起到迅速減輕炎癥，止痛的作用［14］。

總之，薏仁降濁湯能有效地對抗急性痛風性大鼠關(guān)節(jié)炎癥;降低血尿酸濃度、減少血清PGE2含量可能是其作用的機理。薏仁降濁湯防治痛風具有良好的開發(fā)和應(yīng)用前景。

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