當(dāng)歸新病害
——炭疽病病原鑒定及發(fā)病規(guī)律研究

卞靜，陳泰祥，陳秀蓉＊，王涵琦，楊小利，王艷，2

（1．甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)草業(yè)學(xué)院，草業(yè)生態(tài)系統(tǒng)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，中－美草地畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展研究中心，甘肅 蘭州730070；2．甘肅中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，甘肅 蘭州730000）

當(dāng)歸（Angelicasinensis）屬傘形科當(dāng)歸屬，其干燥的貯藏根是我國(guó)一味常用中藥材，味苦、辛，性溫，藥用歷史悠久，在方劑中的應(yīng)用頻度甚高，素有“十藥九歸”之稱［1］。由于其藥用價(jià)值以及保健價(jià)值得到了廣泛的認(rèn)可，因此在全國(guó)范圍內(nèi)的種植面積逐漸擴(kuò)大，主產(chǎn)于甘肅、四川、云南等省，陜西、貴州、湖北等省也有生產(chǎn)，尤以甘肅的產(chǎn)量最大，年均種植5400hm2，總產(chǎn)量12000多噸，占全國(guó)總產(chǎn)量的70%以上，外銷(xiāo)量占全國(guó)總銷(xiāo)量的90%以上，國(guó)內(nèi)銷(xiāo)售量占全國(guó)當(dāng)歸總產(chǎn)量的70%以上［2］。

關(guān)于當(dāng)歸病害國(guó)內(nèi)報(bào)道有腐爛莖線蟲(chóng)（麻口）病、根腐病、褐斑病、菌核病、銹病和白粉病6種［3－7］，近年來(lái)甘肅省由于種植面積擴(kuò)大，病害逐年加重，其中當(dāng)歸腐爛莖線蟲(chóng)（麻口）病和根腐病已成為造成當(dāng)歸產(chǎn)量下降，品質(zhì)變劣的主要因素之一。2012年筆者在甘肅省當(dāng)歸病害調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，在甘肅省定西市渭源縣、岷縣、漳縣等當(dāng)歸種植區(qū)，自7月初開(kāi)始可見(jiàn)，在當(dāng)歸植株的中、下部葉片干枯死亡現(xiàn)象較普遍，根據(jù)癥狀，初步認(rèn)為可能是當(dāng)歸炭疽病，但查閱資料，未見(jiàn)有關(guān)此病的報(bào)道。2013年經(jīng)系統(tǒng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，8月初以后癥狀表現(xiàn)明顯，發(fā)病普遍，如渭源縣會(huì)川鎮(zhèn)發(fā)病率約為44%、漳縣大草灘約為55%、岷縣麻子川約為65%，至9月中旬則均達(dá)到100%，但各地不同地塊嚴(yán)重程度有差異，因此，筆者對(duì)其病害癥狀、病原特征、生物學(xué)特性以及發(fā)病規(guī)律、傳播方式及條件等進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究。本研究?jī)H報(bào)道病害癥狀、病原學(xué)鑒定以及發(fā)病規(guī)律、傳播方式及條件等方面的研究，旨意為此病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 試驗(yàn)材料

1．1．1 供試培養(yǎng)基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH自然。

當(dāng)歸汁液培養(yǎng)基：當(dāng)歸葉10g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH自然。

馬鈴薯瓊脂蔗糖培養(yǎng)基（PSA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200g，蔗糖20g，瓊脂15g，蒸餾水1000mL，pH自然。

察氏培養(yǎng)基：NaNO32g、KCl 0．5g、FeSO40．01g、K2HPO 41．0g、MgSO4·7H2O 0．5g、瓊脂15g、蔗糖30 g、蒸餾水1000mL。

1．1．2 供試儀器 主要儀器有NIKON光學(xué)顯微鏡，NIKON圖像分析系統(tǒng)，BI－2000圖像分析系統(tǒng)，Bioneer水平凝膠電泳裝置，Bioneer PCR熱循環(huán)儀，Bioneer凝膠成像系統(tǒng)，Biometra高速冷凍離心機(jī)，pHS－3C精密數(shù)顯酸度計(jì)、Apresys溫濕度記錄儀等。

1．1．3 供試試劑 主要試劑有Rnase，Proteinase K，PCR Master Mix，Marker購(gòu)于上海生工生物技術(shù)公司，通用引物ITS1（5′－TCC GTA GGT GAA CCT GCG G－3′），ITS4（5′－TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC－3′）由上海生工生物技術(shù)公司合成。

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 采樣時(shí)間和方法 于2012年7，8月至2013年7，8月由甘肅省定西市渭源縣、漳縣、岷縣各當(dāng)歸主產(chǎn)區(qū)調(diào)查發(fā)病率和嚴(yán)重度，同時(shí)進(jìn)行癥狀描述，并采集典型病株，備用。

1．2．2 病原菌分離純化 采用常規(guī)組織分離法，將典型病株莖部切成0．4cm見(jiàn)方小塊，用1%的升汞消毒1 min，無(wú)菌水沖洗3次，分別置PDA、PSA、察氏和當(dāng)歸汁液平板培養(yǎng)基上，每皿接種5塊，置25℃下培養(yǎng)7d后純化，編號(hào)，置4℃保存?zhèn)溆茫?］。

1．2．3 致病性測(cè)定 當(dāng)歸種子浸泡后，盆栽育苗，待植株長(zhǎng)到約20cm高，并長(zhǎng)出5個(gè)莖稈以上時(shí)，進(jìn)行致病性測(cè)定［9－10］。采用針刺法接種，即用針輕輕刺傷健康的當(dāng)歸植株的莖基部，將當(dāng)歸汁液培養(yǎng)基培養(yǎng)的純菌種，配制成分生孢子濃度為3×106個(gè)／mL懸浮液澆灌于刺傷部位，用蘸滅菌水的棉球包在接種部位保濕，同時(shí)以刺傷健康植株澆灌無(wú)菌水后保濕作為對(duì)照，處理與對(duì)照均接種10株，保濕24h后，置于室溫下，每隔2d觀察其發(fā)病情況。待發(fā)病后對(duì)其病株進(jìn)行鏡檢和再分離，并計(jì)算發(fā)病率。

1．3 病原菌的鑒定

1．3．1 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定 將分別在PDA、PSA、察氏和當(dāng)歸汁液4種平板培養(yǎng)基保存的菌株轉(zhuǎn)接后，置25℃下培養(yǎng)，7d后觀察菌落性狀，鏡檢菌絲顏色、分生孢子盤(pán)、分生孢子形態(tài)，觀察是否產(chǎn)生剛毛，測(cè)量100個(gè)分生孢子及50個(gè)分生孢子盤(pán)的大小及剛毛的長(zhǎng)度，并顯微拍照，根據(jù)病原形態(tài)、大小，查閱相關(guān)資料進(jìn)行病原鑒定［11－12］。

1．3．2 病原菌的rDNA－ITS序列分析 將菌株轉(zhuǎn)接到PDA平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)7d后，挑取菌絲塊接入PDA液體培養(yǎng)基中，置25℃，120r／min的恒溫振蕩箱培養(yǎng)7d，用滅菌的紗布過(guò)濾后，再用無(wú)菌水沖洗2～3次，然后用濾紙吸干水分，保存?zhèn)溆茫瑓⒖紡埧≈遥?3］的方法提取 DNA。參考相關(guān)文獻(xiàn)［14－17］，選擇ITS1（5′－TCCGTAGGTGAACCTGCGG－3′）和ITS4（5′－TCCTCCGCTTATTGATATGC－3′）作為擴(kuò)增引物，由上海生物公司合成引物。PCR反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行，PCR反應(yīng)體系為50μL，PCR反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性3min，循環(huán)1次；95℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，循環(huán)30次；最后72℃延伸10min。用1%瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用上海生物公司提供的試劑盒進(jìn)行純化，并由其對(duì)純化產(chǎn)物直接測(cè)序。將序列與GenBank中相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行同源性分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。

1．4 發(fā)病規(guī)律研究

1．4．1 侵入途徑 盆栽當(dāng)歸苗，選擇高約20cm，分支多于5個(gè)莖稈的健株用于試驗(yàn)。將純培養(yǎng)的菌株配成濃度為3×106個(gè)／mL的菌懸液，分別采用針刺、灌根和噴霧3種方式進(jìn)行接種，每處理10株。針刺接種：即用滅菌的細(xì)昆蟲(chóng)針在莖基部輕微刺傷，將菌懸液澆灌于刺傷部位，用棉球蘸取無(wú)菌水保濕接種部位，同時(shí)以針刺莖基部，用無(wú)菌水澆灌刺傷部位并保濕的植株作為對(duì)照；灌根接種：即直接將菌懸液灌入根部，以無(wú)菌水澆灌的植株為對(duì)照；噴霧處理：即將菌懸液均勻噴灑于整株植物，并套塑料袋保濕，同時(shí)以噴無(wú)菌水同樣保濕植株為對(duì)照，以上處理均保濕24h后置于室溫下，觀察其發(fā)病情況，統(tǒng)計(jì)不同接種方式的發(fā)病率，確定該病原菌的侵入途徑。

1．4．2 田間發(fā)病進(jìn)程 2013年在甘肅省渭源縣會(huì)川鎮(zhèn)新城村唐家灘發(fā)病田塊進(jìn)行發(fā)病規(guī)律調(diào)查，自8月11日起，每7d定點(diǎn)調(diào)查1次，共調(diào)查7次，每次隨機(jī)調(diào)查100株，觀察發(fā)病進(jìn)程，統(tǒng)計(jì)每株當(dāng)歸植株莖稈的發(fā)病率及嚴(yán)重度，計(jì)算病情指數(shù)。病害分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，查閱相關(guān)資料［18］制定如下：0級(jí)：無(wú)??；1級(jí)：輕微發(fā)病，莖稈上有零星病斑，病斑面積占莖稈表面積的5%以下；3級(jí)：輕度發(fā)病，病斑面積占莖稈表面積的6%～50%；5級(jí)：中等發(fā)病，病斑面積占莖稈表面積的50%以上；7級(jí)：高度發(fā)病，50%以上的莖稈枯死發(fā)黑；9級(jí)：嚴(yán)重發(fā)病，整株枯死，并在莖稈上密生小黑點(diǎn)。

1．4．3 病害與溫、濕度的相關(guān)性 在發(fā)病規(guī)律調(diào)查田塊放置Apresys自記溫濕度記錄儀，設(shè)置每h記錄1次田間，自動(dòng)測(cè)定田間小氣候溫、濕度變化情況，做出日均氣溫、濕度變化曲線，結(jié)合發(fā)病率及嚴(yán)重度調(diào)查結(jié)果進(jìn)行回歸分析［19］，作出回歸方程，分析病害發(fā)生情況與田間溫濕度的相關(guān)性。

1．5 統(tǒng)計(jì)分析

采用Excel 2003和DPS 6．55軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)及方差分析。

2 結(jié)果與分析

圖1 病害癥狀Fig．1 Disease of symptoms

2．1 病害癥狀

2012年至2013年田間調(diào)查結(jié)果表明，此病一般在6月中、下旬開(kāi)始發(fā)生，8月下旬到9月上旬達(dá)到發(fā)病高峰，該病害主要危害植株莖稈。如圖1所示，發(fā)病初期先在植株外部莖稈上出現(xiàn)淺褐色病斑，隨后病斑逐漸擴(kuò)大，形成深褐色長(zhǎng)條形病斑，葉片變黃枯死，莖稈從外向內(nèi)逐漸干枯死亡，后期在病斑上出現(xiàn)黑色小顆粒，即病原菌的分生孢子盤(pán)，最后整株枯死。

2．2 致病性測(cè)定

挑選典型純化菌株（編號(hào)T1），針刺接種到健康的當(dāng)歸植株20d后，植株均陸續(xù)開(kāi)始發(fā)病，而對(duì)照未發(fā)?。▓D2a）。鏡檢莖稈上的小黑點(diǎn)，均為已形成的分生孢子盤(pán)，與病株上的分生孢子盤(pán)形態(tài)一致（圖2b，c）。對(duì)發(fā)病植株進(jìn)行再分離，獲得菌株的培養(yǎng)形狀、分生孢子形態(tài)與原接種菌株一致，因此可確定該菌株為致病菌。

2．3 病原菌的鑒定

2．3．1 病原菌培養(yǎng)性狀 分別在4種培養(yǎng)基上培養(yǎng)，菌落形態(tài)及顏色有差異，如圖3所示，在PDA、PSA和當(dāng)歸浸汁液培養(yǎng)基菌落生長(zhǎng)速度沒(méi)有明顯差異，菌落初期均為白色，后期在PDA上菌落變?yōu)楹谏赑SA上菌落變?yōu)楹诤稚?，在?dāng)歸汁液培養(yǎng)基上菌落則為白色，菌絲稀疏且產(chǎn)生大量灰黑色小顆粒，而在PDA、PSA培養(yǎng)基均未見(jiàn)小顆粒；在察氏培養(yǎng)基上菌落為白色，菌絲稀疏，生長(zhǎng)速率明顯低于其他3種，也未見(jiàn)小顆粒。鏡檢培養(yǎng)的組織，在察氏和PDA培養(yǎng)基的組織，僅看到菌絲而未見(jiàn)分生孢子；在PSA培養(yǎng)基上雖能產(chǎn)生孢子但數(shù)量很少，未見(jiàn)分生孢子盤(pán)；僅在當(dāng)歸浸汁液上鏡檢到大量的分生孢子，并且產(chǎn)生分生孢子盤(pán)，因此，當(dāng)歸浸汁液培養(yǎng)基為病原菌生長(zhǎng)的適宜培養(yǎng)基。

圖2 致病性測(cè)定Fig．2 Results of pathogenicity identification

圖3 不同培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)Fig．3 Colonies on the different media forms

圖4 形態(tài)學(xué)鑒定Fig．4 Results of morphological identification

2．3．2 病原菌形態(tài)學(xué)特征 鏡檢和測(cè)量當(dāng)歸培養(yǎng)基上的菌絲、分生孢子、分生孢子盤(pán)以及剛毛。結(jié)果表明，菌絲無(wú)色，有隔膜具分枝；分生孢子盤(pán)為黑褐色，大小為50～400μm，周?chē)泻谏珓偯?，剛毛長(zhǎng)度為45～200μm，頂端尖基部寬4～8μm，有0～7個(gè)隔膜；分生孢子有2種形態(tài)，一種孢子為新月形，兩端尖，無(wú)色透明，單胞，中間有一個(gè)油球，孢子大小為（18．0～24．5）×（3．5～5．0）μm，另一種孢子為卵圓形或橢圓形，無(wú)色透明，單胞，孢子大小為（9．7～16．5）×（2．5～4．0）μm（圖4）。查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料［17］，初步確定該病病原菌為半知菌亞門(mén)腔孢綱黑盤(pán)孢目炭疽菌屬的束狀炭疽菌（Colletotrichumdematium，Grove）。

2．3．3 病原菌的rDNA－ITS序列分析 將菌株的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序、校對(duì)、剪切和拼接，獲得全長(zhǎng)550 bp序列 （圖5）。將序列與GenBank中相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行同源性分析，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)（圖6），結(jié)果表明，該菌的ITS與已登錄的Colletotrichumdematium的ITS同源性均為99%。

圖5 PCR電泳檢測(cè)結(jié)果Fig．5 Electrophoresis results of PCR

綜合上述形態(tài)學(xué)和ITS序列鑒定，結(jié)果表明，甘肅省當(dāng)歸炭疽病病原菌為束狀炭疽菌（Colletotrichum dematium，Grove）。

2．4 發(fā)病規(guī)律研究

2．4．1 侵入途徑 采用3種不同方式接種健株，15d后針刺接種的植株先發(fā)病，最初在莖部產(chǎn)生淺褐色病斑，后逐漸擴(kuò)大形成深褐色條形病斑，葉片逐漸枯死，造成植株干枯死亡，莖部產(chǎn)生小黑點(diǎn)；18d后灌根的植株開(kāi)始發(fā)病，癥狀與針刺接種的相同；20d后噴霧處理的植株開(kāi)始發(fā)病，但發(fā)病率略低于其他兩種處理，癥狀同針刺接種的。30d后統(tǒng)計(jì)發(fā)病率，結(jié)果表明，針刺接種10株全部發(fā)病；灌根接種10株，8株發(fā)??；噴霧接種10株，5株發(fā)病；對(duì)照株均未發(fā)?。▓D7）。以上結(jié)果說(shuō)明，該病原菌可通過(guò)植物傷口、根部及地上部分自然孔口或直接侵入危害，傷口有利于病原菌的侵入。

圖6 T1菌株的rDNA系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig．6 rDNA phylogenetic tree of strain T1

圖7 室內(nèi)盆栽傳播方式Fig．7 The mode of transmission of indoor plants

2．4．2 田間發(fā)病進(jìn)程 6月調(diào)查時(shí)，田間僅有零星發(fā)病，但癥狀不典型，也未見(jiàn)病癥，不能確定為炭疽病危害所致。進(jìn)入8月，出現(xiàn)典型癥狀后開(kāi)始進(jìn)行發(fā)病進(jìn)程調(diào)查。由圖8可以看出，從6月開(kāi)始發(fā)病到8月11日調(diào)查時(shí)，田間發(fā)病率和病情指數(shù)分別為44%和24%，隨后發(fā)病率穩(wěn)定增長(zhǎng)，9月1日，發(fā)病率已高達(dá)87%，僅僅20d的時(shí)間，發(fā)病率增長(zhǎng)了43%，到9月15日發(fā)病率已達(dá)到100%；病情指數(shù)在8月11日至8月25日近半個(gè)月的時(shí)間增長(zhǎng)了15%，而從8月25日到9月1日僅僅6d時(shí)間，病情指數(shù)高達(dá)68%，隨后病情增加緩慢，9月15日后病情指數(shù)不再增加，由此可見(jiàn)，8月11日至9月初是病害普遍發(fā)生時(shí)期，8月下旬病害嚴(yán)重度顯著加重，這與該時(shí)間段田間的溫濕度有一定的關(guān)系。

2．4．3 病害發(fā)生與溫度、濕度的相關(guān)性 經(jīng)調(diào)查，試驗(yàn)地塊的日均氣溫變化見(jiàn)圖9，夜間平均氣溫變化見(jiàn)圖10。由圖9可見(jiàn)，從8月13日至9月23日測(cè)定的43 d中，日均氣溫為10～27℃，夜間平均氣溫則為5～15℃。而在8月13日至9月1日中，發(fā)病率不斷增長(zhǎng)時(shí)，白天日均氣溫為16～25℃，有利于病害的發(fā)生，與筆者測(cè)定病菌生長(zhǎng)對(duì)溫度的要求一致。

圖8 田間發(fā)病進(jìn)程Fig．8 The pathogenesis regularity in the field

經(jīng)調(diào)查，試驗(yàn)地塊的日均濕度變化見(jiàn)圖11，夜間平均濕度變化見(jiàn)圖12。在8月13日至9月23日調(diào)查的43d中，日均濕度高于90%的有27d，夜間平均濕度高于95%的共有40d，可見(jiàn)該地區(qū)相對(duì)濕度普遍高，有利于病害發(fā)生，特別是8月25日后，日、夜?jié)穸让黠@增高，日均濕度為87%～100%，而夜間平均濕度則均高達(dá)95%～100%，這與筆者測(cè)定的病原菌孢子萌發(fā)需要95%以上相對(duì)濕度相一致，此時(shí)濕度有利于病菌孢子的萌發(fā)和生長(zhǎng)，加重了危害。

圖9 日均氣溫變化Fig．9 Changes of daily average temperature

圖10 夜間平均氣溫變化Fig．10 Changes of average temperature at night

圖11 日均濕度變化Fig．11 Changes of daily average humidity

圖12 夜間平均濕度變化Fig．12 Changes of average humidity at night

采用DPS 6．55軟件對(duì)當(dāng)歸炭疽病的病情指數(shù)與平均氣溫、平均相對(duì)濕度等進(jìn)行回歸分析。其相關(guān)性分別可用以下回歸方程表述：Y＝2．362X1－1．536，r1＝0．907；Y＝2．230X2－1．192，r2＝0．942。Y＝0．629X1＋0．746X2－22．976，r＝0．986。Y為病情指數(shù)；X1為平均氣溫；X2為平均相對(duì)濕度；r1為病情指數(shù)與平均氣溫的相關(guān)系數(shù)，r2為病情指數(shù)與平均相對(duì)濕度的相關(guān)系數(shù)?；貧w分析表明，田間當(dāng)歸炭疽病的病情指數(shù)與平均氣溫、平均相對(duì)濕度之間存在著極顯著的相關(guān)性。r為平均氣溫和平均相對(duì)濕度同時(shí)與病情指數(shù)的相關(guān)系數(shù)，因此從影響程度來(lái)看，病情指數(shù)受濕度影響大于溫度的影響，與室內(nèi)生物學(xué)特性測(cè)定相一致。

3 討論

3．1 當(dāng)歸炭疽病及其病原

查閱相關(guān)資料［20－21］，當(dāng)歸屬植物的炭疽病在國(guó)外有報(bào)道，分別危害當(dāng)歸屬中的白芷（Angelicadahurica）和川姜活（Angelicasylvestris），而當(dāng)歸炭疽病在國(guó)內(nèi)僅有1次簡(jiǎn)單報(bào)道［22］，但其病原與本研究不是同一個(gè)屬，且未進(jìn)行詳細(xì)的鑒定及研究，查閱其病原分子序列與Colletotrichumdematium沒(méi)有相似性，國(guó)外則未見(jiàn)報(bào)道。因此本研究系首次報(bào)道。據(jù)報(bào)道［23－25］，炭疽菌屬的成員寄主范圍廣，它們可寄生或腐生于不同科屬植物上，如束狀炭疽菌可侵染葡萄（Vitisvinifera）、蘿卜（Raphanussativus）、薯芋（Dioscoreagrandifolia）、大麗花（Dahliapinnata）、知母（Dahliapinnata）、枸杞（Lyciumchinense）、玉竹（Polygonatumodratum）、菠菜（Spinaciaoleracea）以及曼陀羅（Daturastramonium）等不同科屬植物，引起炭疽病。而Grove［27］報(bào)道，束狀炭疽菌僅寄生在枯死的莖稈和葉片，但本研究表明，將當(dāng)歸炭疽病菌接種當(dāng)歸健株，引起發(fā)病較重，田間調(diào)查亦表明，此菌危害當(dāng)歸后，發(fā)病普遍且較重，可見(jiàn)此菌的致病性較強(qiáng)，與Grove［27］報(bào)道的有差異。另外，楊連娟和徐紅［28］報(bào)道，束狀炭疽菌在PDA上能夠產(chǎn)生大量孢子，并且相關(guān)資料表明，多種植物的炭疽病菌均可在PDA培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并產(chǎn)孢［28－31］。而本試驗(yàn)菌株在當(dāng)歸汁液培養(yǎng)基上產(chǎn)生大量孢子且產(chǎn)生分生孢子盤(pán)，在PSA培養(yǎng)基上僅能產(chǎn)生少量孢子，而在PDA不產(chǎn)孢。由此可見(jiàn)，本試驗(yàn)的當(dāng)歸炭疽病菌在致病性和生理特性上與其他寄生植物上有差異，此菌能否侵染其他植物，是否有生理分化還有待進(jìn)一步研究。

3．2 侵入途徑

郭彩霞和遲曉紅［29］報(bào)道，萬(wàn)年青炭疽刺盤(pán)孢菌（Colletotrichummontemartinii）接種14d后有傷口的葉片開(kāi)始發(fā)病，17d后沒(méi)有傷口的葉片也開(kāi)始發(fā)病，室內(nèi)接種試驗(yàn)比室外早2d。朱桂寧和蔡健和［30］報(bào)道山藥炭疽病病原菌（Colletotrichumgloeosporioides）也可侵入有傷口和無(wú)傷口的葉片。范永山和劉海英［31］等報(bào)道，唐山綠寶石炭疽病菌（Colletotrichumgloeosporioides）噴霧接種7d后開(kāi)始發(fā)病。本試驗(yàn)采用針刺、灌根和噴霧3種接種方式均能使健株發(fā)病，但針刺造成傷口有利于發(fā)病，與上述報(bào)道一致。因此，在田間進(jìn)行農(nóng)事操作時(shí)應(yīng)盡量避免機(jī)械損傷，注意田間防蟲(chóng)，以減少病害危害。灌根接種發(fā)病較重，說(shuō)明該病原菌可以通過(guò)土壤帶菌，從根部或莖基部侵入。筆者在田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，重茬地的發(fā)病率高，這說(shuō)明病菌可在田間病殘?bào)w上或土壤中越冬，造成土壤中病原菌積累，發(fā)病加重，因此，建議采取輪作倒茬、精耕細(xì)作、深翻土壤、清除帶病當(dāng)歸殘?bào)w等措施。

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