趨化因子GROα、MCP—1在宮頸癌發(fā)病機制中的作用

[摘要] 目的 探討生長相關癌基因α（GRO α）和單核細胞趨化蛋白1（MCP-1）在宮頸癌中的作用。 方法 免疫組化法檢測49例宮頸癌組織中GRO α和MCP-1的表達，并與30例癌旁正常宮頸上皮組織作對照。 結果 宮頸癌組GRO α和MCP-1的陽性率（分別為76%、69%）顯著高于對照組（分別為47%、40%）（P < 0.01或P < 0.05）。31例伴有淋巴結轉移的宮頸癌組中GRO α的陽性率顯著高于不伴有淋巴結轉移組（分別為68%、28%），P < 0.01。MCP-1的陽性率差異無統(tǒng)計學意義（分別為61%、39%），P > 0.05。 結論 宮頸癌組織中GRO α和MCP-1的表達增強，它們可能參與了宮頸癌的形成過程，GRO α還可能與宮頸癌的轉移有關。

[關鍵詞] 宮頸癌；趨化因子；生長相關癌基因；單核細胞趨化蛋白；免疫組化

[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）19-0060-03

宮頸癌是一種常見的婦科腫瘤疾病，是近十年來發(fā)展中國家常見的死亡原因之一[1]。其治療效果和預后與淋巴結轉移密切相關。但是影響腫瘤生長、浸潤和轉移的機制十分復雜，至今尚未完全闡明。目前研究發(fā)現，趨化因子在此過程中可能起著非常重要的作用[2，3]，有望成為腫瘤治療的新靶點。趨化因子具有雙向調節(jié)作用：一方面，它可以通過趨化免疫活性細胞達到增強抗腫瘤免疫作用，或者通過抑制腫瘤內新生血管的生成從而抑制腫瘤的生長[4]；另一方面，它可刺激腫瘤細胞的生長[5]。本研究通過觀察趨化因子生長相關癌基因（growth-related oncogene，GRO）和單核細胞趨化蛋白（MCP-1）在子宮頸癌中的表達， 探討其在子宮頸癌發(fā)病中的可能作用機制，為臨床的靶向治療提供新的理論依據。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

49例病例均來自我院、臺州市腫瘤醫(yī)院和臺州市中心醫(yī)院2009年2月～2011年2月收治的住院手術患者，均行根治性子宮切除+盆腔淋巴結清掃術，均經術后病理確診，且術前均未接受放療或化療。術畢立即取腫瘤組織及癌旁組織，常規(guī)HE染色發(fā)現淋巴結轉移31例。年齡26～71歲，平均（45±10）歲。并選取30例癌旁正常宮頸上皮組織作為對照組。

1.2 主要試劑

多克隆兔抗人GRO α抗體（購自美國 Biomedical Technologies公司），多克隆兔抗人MCP-1抗體（購自Santa Cruz公司），即用型SP試劑盒（PV-6000）（購自北京中杉金橋生物技術有限公司）。采用免疫組化SP法測定GRO α和MCP-1的表達，抗體稀釋濃度均為1∶50[6]。

1.3 結果判定

光鏡下觀察細胞著色情況，陽性細胞的胞漿呈棕黃色表達。每張切片觀察5個視野（×200），取其平均值即為每張切片的觀察結果。按陽性細胞所占比例及分布情況判定如下：陰性（-）：單個細胞染色，陽性細胞數<5%；弱陽性（+）：散在的或小的細胞團染色，陽性細胞數為5%～24%；陽性（++）：片狀或簇狀細胞染色，陽性細胞數為25%～50%；強陽性（+++）彌散的細胞染色，陽性細胞數>50%[7]。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0 統(tǒng)計軟件，計數資料采用χ2檢驗的確切概率法，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 GRO α蛋白的表達

陽性細胞的胞漿呈棕黃色表達，GRO α蛋白主要表達在宮頸癌組織和正常宮頸上皮組織的細胞漿內。宮頸癌組有37例GRO α蛋白表達陽性，其陽性表達率為76%；對照組有14例GRO α蛋白表達陽性，其陽性表達率為47%，宮頸癌組GRO α蛋白陽性表達率顯著高于對照組（P < 0.01）。伴有淋巴結轉移的宮頸癌組中GRO α蛋白表達水平在（++）～（+++）的陽性率為68%（21/31），顯著高于不伴有淋巴結轉移組[陽性率為28%（5/18）] （P < 0.01），見表1、2，圖1。

2.2 MCP-1蛋白的表達

陽性細胞的胞漿呈棕黃色表達，MCP-1蛋白主要表達在宮頸癌組織和正常宮頸上皮組織的細胞漿內。宮頸癌組有34例MCP-1蛋白表達陽性，其陽性表達率為69%，對照組有12例MCP-1蛋白表達陽性，其陽性表達率為40%，宮頸癌組MCP-1蛋白陽性表達率顯著高于對照組（P < 0.05）。伴有或不伴有淋巴結轉移的宮頸癌組中MCP-1蛋白表達水平在（++）～（+++）的陽性表達率分別為61%（19/31）和39%（7/18），兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05），見表1、 2，圖2。

3 討論

趨化因子是細胞因子超家族成員中一類小分子量（8～11 kD）的可溶性蛋白質，由不同類型細胞分泌，對免疫細胞具有趨化作用。一般將趨化因子分為四類：C、CC、CXC和CX3 C，其中CXC類又可分為谷氨酸-亮氨酸-精氨酸（ELR）+趨化因子和 ELR-趨化因子[8]。目前認為，ELR+-CXC趨化因子是一類能促進腫瘤血管生長的因子，例如白細胞介素（IL）-8等[9]；而ELR--CXC趨化因子則具有抑制腫瘤血管生長的作用，如巨噬細胞移動抑制因子（MIP）-1α等。以往研究發(fā)現[10]，CC類趨化因子CCR7和CCL21在子宮頸癌腫瘤細胞中呈高表達，還可能與腫瘤細胞的分化、子宮旁浸潤、淋巴結轉移等密切相關。其機制可能通過旁分泌方式促進腫瘤細胞浸潤生長，而且癌旁組織中存在趨化因子及其配體的表達，可能子宮頸癌中也存在腫瘤細胞模擬淋巴歸巢過程。也有研究發(fā)現，不同亞型的趨化素樣因子（CKLF）在不同癌組織中的表達不盡相同[11，12]。因此，趨化因子在腫瘤細胞發(fā)生、發(fā)展中所起的作用如何，值得進一步深入研究。

GRO α屬于ELR+-CXC趨化因子，能參與機體的多種病理生理過程，如介導白細胞趨化、炎性反應、創(chuàng)傷愈合、病毒感染等。但隨著研究的深入，發(fā)現GRO α還與惡性腫瘤相關。它可能在促進腫瘤細胞的發(fā)生發(fā)展及侵襲和轉移、血管的新生、白細胞浸潤等過程中起了重要的作用。本研究發(fā)現，宮頸癌組織中GRO α的陽性表達率顯著高于癌旁正常宮頸上皮組織，提示GRO α的過度表達可能參與了宮頸癌的形成過程。且伴有淋巴結轉移的宮頸癌組中，GRO α蛋白表達水平在（++）～（+++）的陽性率顯著高于不伴有淋巴結轉移組，進一步提示GRO α的表達強度還與宮頸癌轉移有關，推測GRO α呈強陽性表達可能預示宮頸癌的預后較差。而在結、直腸癌組織標本中，也發(fā)現GRO α mRNA的表達水平高于腫瘤周圍未受影響的黏膜組織[13]，表明GRO α可能與腫瘤相關。

MCP與CCL21相似，同屬于CC類趨化因子超家族，由不同類型的免疫和非免疫細胞產生，包括小泡狀的巨噬細胞。CC類趨化因子在感染疾病、變態(tài)反應性疾病、新生血管生成、損傷修復等的發(fā)生、發(fā)展中都有重要作用。MCP是一個有力的趨化劑，主要能吸附、趨化單核細胞，還能誘導間皮纖維母細胞、內皮細胞、血管平滑肌細胞的增生和遷移。最近認為它在腫瘤的形成中起了重要作用[14，15]，其基因多態(tài)性還與肺癌的發(fā)病有關[16]。

本研究發(fā)現，宮頸癌組織中MCP-1的陽性表達率顯著高于癌旁正常宮頸上皮組織，提示MCP-1的過度表達可能參與了宮頸癌的形成過程。同時還發(fā)現，在伴有或不伴有淋巴結轉移的宮頸癌組中MCP-1蛋白的陽性表達率相近，推測MCP-1可能與宮頸癌的轉移沒有密切相關。張小艷等[17]的研究也表明，MCP-1在慢性宮頸炎、宮頸上皮內瘤變、宮頸鱗癌組織中的表達水平逐漸升高，其表達水平還與宮頸鱗癌的病理分級有關，中、低分化腫瘤明顯高于高分化腫瘤。

上述表明，宮頸癌組織中GRO α和MCP-1的表達增強，它們可能參與了宮頸癌的形成過程，GRO α還可能與宮頸癌的轉移有關。趨化因子可能在腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展、侵入、轉移過程中起了重要作用，其機制有待于進一步深入研究，趨化因子將可能成為一種新的腫瘤治療靶點。

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（收稿日期：2013-03-06）