Galectin—3和E—cadherin蛋白在胃癌中的表達(dá)及其意義

[摘要] 目的 探討Galectin-3和E-cadherin蛋白在胃癌中的表達(dá)及其意義。 方法 選擇60例胃癌組織標(biāo)本，采用免疫組化方法檢測胃癌組織中Galectin-3和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況，同時(shí)選擇60例正常胃黏膜檢測Galectin-3和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況作為對照。 結(jié)果 胃癌組織Galectin-3陽性表達(dá)率高于正常胃黏膜組織（P < 0.01），E-cadherin蛋白陽性表達(dá)率低于正常胃黏膜組織（P < 0.01）。分化程度越高、浸潤程度越淺、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的胃癌組織E-cadherin蛋白陽性率越高（P < 0.01）。浸潤程度越深、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的胃癌組織Galectin-3的陽性表達(dá)率越高（P < 0.01）。 結(jié)論 胃癌組織中E-cadherin陽性表達(dá)率低于正常胃黏膜組織、Galectin-3的陽性表達(dá)率高于正常胃黏膜組織。E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而Galectin-3表達(dá)率與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；Galectin-3；E-cadherin蛋白

[中圖分類號] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）24-0086-03

胃癌是臨床常見的惡性腫瘤，近年來死于胃癌的患者呈逐年上升的趨勢。癌癥的發(fā)生與多種因素相關(guān)，而胃癌的侵襲以及轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一。Galectin-3是一種凝集素，參與多種生理以及病理過程，其在細(xì)胞生長、凋亡、粘附以及新生血管形成、腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和浸潤中均發(fā)揮重要的作用。E-cadherin蛋白是一類介導(dǎo)細(xì)胞間同質(zhì)粘附的鈣依賴性跨膜糖蛋白，其表達(dá)與惡性腫瘤的分化程度、侵襲力、轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，與預(yù)后呈正相關(guān)[1]。本研究探討胃癌組織中Galectin-3及E-cadherin蛋白的表達(dá)，分析其在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1資料與方法

1.1 一般資料

選擇2010～2012年在我院手術(shù)治療切除的胃癌組織標(biāo)本60例，其中男28例，女32例，年齡31～66歲，平均（53.1±18.4）歲。腫瘤直徑<4 cm者25例，≥4 cm者35例。腫瘤浸潤深度：黏膜及黏膜下層（T1+T2）者8例，肌層及漿膜層（T3+T4）者52例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有32例，無28例。分化程度：高分化及中分化29例，低分化31例。同時(shí)取手術(shù)切除組織正常切緣的正常胃黏膜組織作為對照組。

1.2檢測方法

采用免疫組化法對胃癌黏膜組織以及正常胃黏膜組織中Galectin-3及E-cadherin蛋白表達(dá)進(jìn)行檢測。Galectin-3兔抗人單克隆抗體由上海研生生物技術(shù)科技有限公司提供，E-cadherin兔抗人單克隆抗體由上海研生生物技術(shù)科技有限公司提供。標(biāo)本甲醛固定、石蠟包埋、連續(xù)4 μm切片。清洗玻片后烤干，濃硫酸中浸泡24 h，沖洗后烘干，多聚拉氨酸進(jìn)行放脫片處理，烤干，備用。切片，梯度酒精脫水、水洗。3%的過氧化氫溶液室溫下孵育15 min，以封閉內(nèi)源性過氧化物酶的活性。水沖洗后，PBS緩沖液洗滌3次。將切片置于枸櫞酸緩沖液中，微波爐內(nèi)高火烘烤5 min，中高火烘烤8 min，冷卻至室溫。然后自來水沖洗，蒸餾水沖洗，PBS緩沖液洗滌3次。甩干，加入封閉血清，在37℃下孵育15 min。倒去血清，滴加一抗或者一抗的工作液，37℃，孵育2 h。PBS緩沖液洗滌3次。加二抗工作液，37℃，孵育20 min，PBS緩沖液洗滌3次。加DAB顯色液，有表達(dá)后立即終止顯色。

1.3 免疫組化結(jié)果判定

1.3.1 Galectin-3結(jié)果判定 位于上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，棕黃色顆粒。判斷結(jié)果[2]：每張切片隨機(jī)觀察5個(gè)視野，統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞數(shù)，取平均陽性率記分。0分：<5%；1分：5%～24%；2分25%～49%；3分：50%～74%；4分：≥75%。染色強(qiáng)度：0分：無著色；1分：淡黃色；2分：黃色或者棕黃色；3分：褐色或者棕褐色。陽性細(xì)胞率得分+染色強(qiáng)的得分3～6分者為染色陽性。

1.3.2 E-cadherin蛋白結(jié)果判定 在正常組織內(nèi)位于上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，在癌組織中位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜中。染色呈一致的棕黃色顆粒。染色陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)與Galectin-3結(jié)果判定相同。

1.4 觀察指標(biāo)

比較胃癌組織與正常胃黏膜組織中Galectin-3及E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率。統(tǒng)計(jì)患者的一般資料以及臨床資料，分析不同臨床病理參數(shù)與Galectin-3及E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織與正常胃黏膜組織中Galectin-3及E-cadherin蛋白表達(dá)情況

Galectin-3位于上皮細(xì)胞的胞漿內(nèi)，呈棕黃色顆粒，見圖1。E-cadherin蛋白在癌組織中細(xì)胞膜和細(xì)胞漿均有表達(dá)，在正常胃黏膜中主要位于上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜上，呈棕黃色顆粒，見圖2。60例胃癌組織中Galectin-3陽性例數(shù)44例，占73.3%。60例正常胃黏膜中23例陽性，占38.3%。E-cadherin蛋白在胃癌組織中有23例患者呈陽性染色，占38.4%，在正常胃黏膜中60例為陽性，占100.0%。見表1。

2.2 不同臨床資料Galectin-3及E-cadherin蛋白陽性表達(dá)情況

分化程度越高、浸潤程度越淺、淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的胃癌組織E-cadherin蛋白陽性率越高（P < 0.01）。浸潤程度越深、淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移的胃癌組織Galectin-3的陽性表達(dá)率越高（P < 0.01）。見表2。

3討論

正常胃黏膜上皮細(xì)胞是由原始新生細(xì)胞分裂生長分化而來，受到嚴(yán)格的調(diào)控，不會發(fā)生癌癥。干細(xì)胞包含各種原癌基因和抑癌基因，絕大多數(shù)情況下原癌基因的特性不表達(dá)，不會形成致癌物質(zhì)，因此也就不能發(fā)育成癌細(xì)胞。有胃癌家族史者原癌基因可能更容易表達(dá)出來，這就是遺傳的因素。除了遺傳等內(nèi)在因素外，還有很多外在的致癌因素，如高危人群面臨的各種非遺傳因素，也可直接誘發(fā)或長期破壞胃黏膜屏障使促癌物質(zhì)更易誘發(fā)干細(xì)胞癌基因表達(dá)或基因突變而產(chǎn)生致癌物，使新生不成熟的原始細(xì)胞不能分化成具有正常功能的胃黏膜上皮細(xì)胞，而是變成各種分化程度不良且生長失控的非正常細(xì)胞。若機(jī)體的免疫監(jiān)測功能正常，往往可以清除少量的異常細(xì)胞，但當(dāng)長期心理狀態(tài)不佳引起內(nèi)分泌系統(tǒng)異常及免疫功能長期低下、或異常細(xì)胞由于某種未知原因逃逸了機(jī)體的免疫監(jiān)測時(shí)，則異常細(xì)胞最終發(fā)展成機(jī)體無法控制其生長的胃癌細(xì)胞，完成癌變過程。

凝集素動物細(xì)胞和植物細(xì)胞都能夠合成和分泌，能與糖結(jié)合的蛋白質(zhì)，在細(xì)胞識別和粘著反應(yīng)中起重要作用，主要是促進(jìn)細(xì)胞間的粘著。凝集素具有一個(gè)以上同糖結(jié)合的位點(diǎn)，因此能夠參與細(xì)胞的識別和粘著，將不同的細(xì)胞聯(lián)系起來。凝集素具有多方面的特性，最大的特點(diǎn)在于他們能識別糖蛋白和糖肽，特別是細(xì)胞膜中復(fù)雜的碳水化合物結(jié)構(gòu)，即細(xì)胞膜表面的碳脂化合物決定簇。Galectins是一種可溶性凝集素，能夠結(jié)合含半乳糖的糖結(jié)合物。Galectin-3（β-半乳糖苷結(jié)合蛋白）是凝集素中的一種，廣泛表達(dá)于腫瘤組織和正常組織中，主要表達(dá)在上皮細(xì)胞中和免疫下?lián)苤校瑓⑴c細(xì)胞的多種生物學(xué)過程，包括細(xì)胞生長、分化、凋亡、粘附、血管生成等。目前有多種研究結(jié)果顯示Galectin-3與腫瘤細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移具有一定的關(guān)系。孫春旭[3]研究結(jié)果顯示食管癌組織中Galectin-3表達(dá)較高。呂云福等[4]研究結(jié)果顯示，甲狀腺乳頭癌患者腫瘤細(xì)胞中Galectin-3的表達(dá)陽性率顯著高于正常甲狀腺組織。冶俊玲[5]研究結(jié)果認(rèn)為Galectin-3是診斷甲狀腺微小乳頭狀癌的重要標(biāo)志。王曄等[6]研究結(jié)果顯示Galectin-3不僅可以促進(jìn)膀胱癌的發(fā)生發(fā)展，還可以促腫瘤中的血管生成。本文研究中胃癌組織中Galectin-3的陽性表達(dá)率顯著高于正常胃黏膜組織，這與以上研究結(jié)果相似，說明其參與了胃癌的發(fā)生和發(fā)展。張征等[7]研究結(jié)果顯示Galectin-3陽性表達(dá)與結(jié)腸腺癌腫瘤體積、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)（P < 0.05），與結(jié)腸腺癌患者性別、年齡無相關(guān)關(guān)系。在本次研究中不同性別、年齡的患者Galectin-3陽性表達(dá)率沒有差異，而浸潤程度達(dá)肌層及漿膜層的患者Galectin-3陽性表達(dá)率顯著高于浸潤程度達(dá)黏膜及黏膜下層的患者（P < 0.01）。而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P < 0.01）。說明Galectin-3的陽性表達(dá)與腫瘤的浸潤深度以及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，但在本次研究中，其陽性表達(dá)率與胃癌的浸潤深度以及分化程度沒有關(guān)系。這與琚晨焰等[8]的研究結(jié)果相似。Galectin-3與胃癌的臨床分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和預(yù)后有關(guān)（P < 0.05）。

鈣粘附蛋白（cadherin）是一類介導(dǎo)細(xì)胞間同質(zhì)粘附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。主要分為于上皮組織中的E-cadherin，分布于神經(jīng)和肌肉組織中的N-cadherin和胎盤組織中的P-cadherin三類。人類的E-cadherin編碼基因定位于16號染色體q22.1附近，由723～748個(gè)氨基酸組成，分子量為80～124 kD，分子中存在一個(gè)疏水基因，位于跨膜區(qū)，氨基末端位于細(xì)胞膜外，是鈣離子的結(jié)合位點(diǎn)，對Ca2+有高度敏感性，羧基末端位于細(xì)胞漿內(nèi)，與肌動蛋白相連，由α、β、γ三個(gè)亞單位（catenins）及其他一些連接蛋白組成，對維持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運(yùn)動和調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附具有重要作用。絕大多數(shù)研究表明，E-cadherin的表達(dá)與惡性腫瘤的分化程度、侵襲力、轉(zhuǎn)移負(fù)相關(guān)與預(yù)后正相關(guān)。楊萬廣等[9]研究結(jié)果顯示結(jié)腸癌中E-cadherin表達(dá)低于癌旁組織。李昌秀等[10]研究結(jié)果顯示E-cadherin在食管癌中表達(dá)為38.33%，明顯低于兩者正常食管組織中的陽性率（P < 0.01），及E-cadherin共同參與食管癌的發(fā)生且影響癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。許健等[11]研究結(jié)果顯示，E-cadherin低表達(dá)的乳腺癌患者更容易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。高源等[12]研究結(jié)果顯示E-cadherin表達(dá)均與腫瘤TNM分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及浸潤深度相關(guān)（P < 0.05）。在本次研究中，胃癌組織中E-cadherin的陽性表達(dá)率顯著低于正常胃黏膜組織（P < 0.01）。這與既往的一些研究結(jié)果相似。分化程度越高的患者其E-cadherin的陽性表達(dá)率越高，浸潤越深的癌組織E-cadherin的陽性表達(dá)率越低，而有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織表達(dá)率低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織。說明E-cadherin的陽性表達(dá)率下調(diào)與腫瘤的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度等有關(guān)。E-cadherin的作用主要是參與維護(hù)正常細(xì)胞之間的連接[13]。當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或者缺失的時(shí)候，細(xì)胞間的連接黏附力下降，細(xì)胞更容易向四周浸潤生長，這可能是導(dǎo)致E-cadherin表達(dá)率低的癌組織浸潤程度深、容易有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的原因之一[14，15]。分化越差的腫瘤細(xì)胞E-cadherin的表達(dá)率越低，而分化差的癌細(xì)胞更容易發(fā)生浸潤生長以及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。

綜上所述，胃癌組織中E-cadherin陽性表達(dá)率低于正常胃黏膜組織、Galectin-3的陽性表達(dá)率高于正常胃黏膜組織。E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而Galectin-3表達(dá)率與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

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（收稿日期：2013-05-13）