潰瘍性結(jié)腸炎和腸易激綜合征結(jié)腸黏膜HBD—2、NF—κB、IL—6和IL—23的表達(dá)

[摘要] 目的 探討潰瘍性結(jié)腸炎和腸易激綜合征患者結(jié)腸黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23的表達(dá)及臨床意義。 方法 選擇潰瘍性結(jié)腸炎（UC組）和腹瀉型腸易激綜合征（腹瀉型IBS組）各40例，另選擇正常對照組20例，取結(jié)腸黏膜標(biāo)本采用免疫組化SP法進(jìn)行HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23染色。 結(jié)果 UC組HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23陽性率及表達(dá)均顯著高于腹瀉型IBS組和對照組（P < 0.05），UC組不同病情程度之間HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)均與病情程度呈正相關(guān)（P < 0.05），而腹瀉型IBSIL-6和IL-23陽性率及表達(dá)與輕度UC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。UC患者黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)之間均呈正相關(guān)（P < 0.05）。 結(jié)論 HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23在UC結(jié)腸黏膜中高表達(dá)，參與UC的發(fā)生發(fā)展過程，而IL-6和IL-23在IBS結(jié)腸黏膜中高表達(dá)，IBS黏膜炎癥改變與輕度UC相似，IBS與UC之間存在相關(guān)性。

[關(guān)鍵詞] 潰瘍性結(jié)腸炎；腸易激綜合征；HBD-2；NF-κB；細(xì)胞因子

[中圖分類號] R574.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）22-0042-03

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種非特異性的慢性結(jié)腸炎癥，病因尚未明確，炎癥性細(xì)胞浸潤及大量細(xì)胞因子釋放參與UC的發(fā)生發(fā)展，導(dǎo)致結(jié)腸黏膜及黏膜下層受損，發(fā)生充血、糜爛、潰瘍，臨床上主要表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、黏液膿血便等消化道癥狀。腸易激綜合征（irritable bowel syndrome，IBS）是一種發(fā)病機(jī)制尚未明確的常見功能性胃腸道疾病，主要包括腹瀉型、便秘型及腹瀉便秘交替型，慢性炎癥反應(yīng)是主要的原因之一。核轉(zhuǎn)錄因子κB（NF-κB）與炎癥性反應(yīng)密切相關(guān)，而人β-防御素2（HBD-2）在炎癥性腸道黏膜中高表達(dá)，與腸道慢性炎癥密切相關(guān)。本研究通過檢測UC及腹瀉型IBS結(jié)腸黏膜中HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23的表達(dá)，探討UC和IBS的發(fā)生發(fā)展及之間的關(guān)系，為臨床診斷治療提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2011年1月～2012年6月在上虞市中醫(yī)院進(jìn)行電子結(jié)腸鏡檢查，并符合2010年世界胃腸病學(xué)組織制定UC診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，且經(jīng)病理學(xué)檢驗(yàn)證實(shí)的40例患者患處黏膜標(biāo)本，以及符合功能性胃腸病羅馬Ⅲ診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]的腹瀉型IBS40例患者降結(jié)腸黏膜標(biāo)本。UC患者根據(jù)疾病嚴(yán)重程度分為輕度11例、中度17例、重度12例，男22例，女18例，升結(jié)腸12例，降結(jié)腸13例，乙狀結(jié)腸15例，年齡19～62歲，平均（38.94±10.68）歲；腹瀉型IBS患者，大便常規(guī)和潛血檢查均為陰性，排除腸道器質(zhì)性病變，男21例，女19例，年齡20～64歲，平均（39.27±11.84）歲；另選擇20例行電子結(jié)腸鏡檢查并經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為正常黏膜的健康者降結(jié)腸黏膜標(biāo)本為對照組，男11例，女9例，年齡18～63歲，平均（41.93±10.57），無消化系統(tǒng)癥狀和體征，取降結(jié)腸黏膜樣本；三組均排除急性胃腸道感染、免疫系統(tǒng)疾病、近期服用水楊酸制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、激素等藥物史。

1.2試劑與儀器

兔抗人HBD-2多克隆抗體、兔抗人NF-κp65多克隆抗體購自美國Santa CruZ公司；兔抗人IL-6多克隆抗體、兔抗人IL-23多克隆抗體及即用型快速免疫組化MaxVisionTM試劑盒購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；日本奧林巴斯CX41顯微鏡；Image-pro-plus 6.0專業(yè)圖像分析系統(tǒng)。

1.3方法

標(biāo)本經(jīng)10%甲醛溶液固定后石蠟包埋，連續(xù)切片，選擇典型切片，進(jìn)行脫蠟、水化、3%過氧化氫室溫孵育15 min，高溫修復(fù)抗原，采用免疫組化SP法進(jìn)行HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23染色，操作按試劑盒說明進(jìn)行。顯色、沖洗、蘇木精復(fù)染、脫水、透明。

1.4 結(jié)果判定

HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23均定位于細(xì)胞質(zhì)，以棕黃色顆粒為染色陽性。光鏡下進(jìn)行定性判斷，200倍視野下隨機(jī)選擇10個(gè)不重疊視野進(jìn)行觀察，計(jì)算陽性率；400倍視野下隨機(jī)選擇5個(gè)不重疊視野進(jìn)行定量分析，采用Image-pro-plus 6.0圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，表達(dá)強(qiáng)度以陽性部分累及吸光度值表示。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 各組結(jié)腸黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23陽性率比較

UC組HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23陽性率均顯著高于腹瀉型IBS組和對照組（P < 0.05），UC組不同病情程度之間HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），隨著病情程度的加重而升高，而腹瀉型IBS組IL-6和IL-23陽性率與輕度UC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.846，2.068，P > 0.05），見表1。

2.2各組結(jié)腸黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)強(qiáng)度比較

UC組HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)均顯著高于腹瀉型IBS組和對照組（P < 0.05），UC組不同病情程度之間HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)均與病情程度呈正相關(guān)（r = 0.634，0.529，0.682，0.612，P < 0.05）而腹瀉型IBS組IL-6和IL-23表達(dá)與輕度UC差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t = 1.051，1.143，P > 0.05），見表2。

2.3 UC結(jié)腸黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23的表達(dá)關(guān)系

HBD-2表達(dá)與NF-κB、IL-6和IL-23表達(dá)呈正相關(guān)（r = 0.813，0.838，0.719，P < 0.05），NF-κB表達(dá)與IL-6和IL-23表達(dá)呈正相關(guān)（r = 0.817，0.762，P < 0.05），IL-6表達(dá)和IL-23表達(dá)呈正相關(guān)（r = 0.909，P < 0.05）。

3 討論

UC是一種炎癥性腸?。╥nflammatory bowel disease，IBD），受到遺傳、免疫、環(huán)境、感染、精神等方面影響[3]。近年來多項(xiàng)研究認(rèn)為腸黏膜免疫屏障功能改變是UC發(fā)病的關(guān)鍵機(jī)制，而各種原因引起的炎癥性反應(yīng)，導(dǎo)致結(jié)腸黏膜組織大量炎癥細(xì)胞浸潤和細(xì)胞因子釋放，免疫細(xì)胞趨化，介導(dǎo)和擴(kuò)大炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答反應(yīng)，破壞黏膜結(jié)構(gòu)，提高通透性，是腸道內(nèi)環(huán)境失衡[4]。IBS則以胃腸道癥狀表現(xiàn)為主，排除腸道器質(zhì)性病變的一種功能性疾病，發(fā)病原因復(fù)雜，機(jī)制尚未明確，近來有研究認(rèn)為其發(fā)病與IBD尤其是UC存在相關(guān)性，甚至被認(rèn)為可能是一種輕癥的UC[5]。

HBD-2是一種具有廣譜抗菌和細(xì)胞毒活性的多肽，可被促炎性細(xì)胞因子激活，發(fā)揮抗菌防御作用，是機(jī)體的保護(hù)性因子，在免疫性疾病組織中高表達(dá)，腸道黏膜中起促進(jìn)屏障保護(hù)功能的作用，而在非炎性腸道黏膜低表達(dá)，表明其與炎癥性反應(yīng)密切相關(guān)[6]。本研究結(jié)果顯示，UC患者結(jié)腸黏膜中HBD-2陽性率和表達(dá)強(qiáng)度明顯高于腹瀉型IBS和對照組，提示UC患者結(jié)腸黏膜炎癥性反應(yīng)劇烈，HBD-2被大范圍激活，合成增加，表達(dá)強(qiáng)度升高，以提高腸黏膜屏障抵御侵襲的功能。并且UC 病情越重HBD-2陽性率和表達(dá)強(qiáng)度越高，表達(dá)強(qiáng)度與病情程度呈正相關(guān)，說明炎癥性反應(yīng)是UC發(fā)病的主要原因，并促進(jìn)其病情進(jìn)展[7]。對NF-κB的觀察結(jié)果也顯示，在UC患者結(jié)腸黏膜中NF-κB高表達(dá)，并顯著高于腹瀉型IBS組和對照組，NF-κB是靜息狀態(tài)下失活，可被炎癥刺激活化的蛋白質(zhì)因子，通過與多種基因啟動子特異性結(jié)合增強(qiáng)其基因轉(zhuǎn)錄，活化后可啟動和調(diào)節(jié)IL-6、IL-8、TNF-α等的細(xì)胞因子合成釋放[8]。在本研究結(jié)果中，UC患者結(jié)腸黏膜中HBD-2和NF-κB高表達(dá)，并與病情呈正相關(guān)，而其在腹瀉型IBS患者結(jié)腸黏膜中的表達(dá)與對照組無顯著性差異，可能提示腹瀉型IBS組腸黏膜中的炎癥反應(yīng)與UC存在差異。

IL-6是主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞分泌的早期炎性細(xì)胞趨化因子，對機(jī)體的炎癥反應(yīng)、體液免疫應(yīng)答、細(xì)胞免疫應(yīng)答、腫瘤細(xì)胞生長都有介導(dǎo)和促進(jìn)作用，并進(jìn)一步的刺激巨噬細(xì)胞釋放細(xì)胞因子，擴(kuò)大和增強(qiáng)炎癥反應(yīng)[9]。同時(shí)其存在NF-κB的結(jié)合位點(diǎn)，受到NF-κB的調(diào)節(jié)。本研究結(jié)果可見，UC和腹瀉型IBS患者結(jié)腸黏膜中IL-6陽性率和表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于對照組，而腹瀉型IBS患者結(jié)腸黏膜中IL-6陽性率和表達(dá)強(qiáng)度與輕度UC無顯著性差異，提示IL-6在UC和IBS的發(fā)病中發(fā)揮重要作用，但導(dǎo)致其大量釋放的原因和炎癥強(qiáng)度可能不盡相同，UC患者炎癥反應(yīng)更劇烈，即使輕度UC，其炎癥反應(yīng)強(qiáng)度已經(jīng)大量激活NF-κB參與促炎反應(yīng)和HBD-2發(fā)揮防御作用，而IBS腸黏膜中IL-6可能更多發(fā)揮了促進(jìn)炎癥反應(yīng)之外的作用，IBS的發(fā)展可能在較低強(qiáng)度的炎癥反應(yīng)過程中，未達(dá)到腸黏膜防御系統(tǒng)的有效的抵御。IL-6是IL-23的介導(dǎo)因子，IL-23與Th17相關(guān)的腸道抗原炎性反應(yīng)密切相關(guān)，IL-6促使Th0向Th17分化，IL-23的表達(dá)升高，不僅促使單核巨噬細(xì)胞釋放IL-17、IFN-γ及TNF-α等促炎因子，擴(kuò)大炎癥反應(yīng)，并且能穩(wěn)定Th17的表型，引起自身免疫反應(yīng)，進(jìn)一步破壞腸道黏膜的免疫屏障[10，11]。本研究結(jié)果顯示，在UC和腹瀉IBS患者結(jié)腸黏膜中IL-23均高表達(dá)，在UC患者結(jié)腸黏膜中HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23的表達(dá)之間相互呈正相關(guān)，而在IBS中HBD-2、NF-κB則無顯著升高，提示炎癥反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)可能參與了UC和IBS的發(fā)生發(fā)展過程，IBS與輕癥UC的病理學(xué)基礎(chǔ)可能有共同點(diǎn)，而IBS的炎癥反應(yīng)強(qiáng)度不及UC，其機(jī)制則仍需進(jìn)一步研究證明。

綜上所述，炎癥反應(yīng)和自身免疫反應(yīng)可能參與UC和IBS的發(fā)生發(fā)展。UC患者結(jié)腸黏膜HBD-2、NF-κB、IL-6和IL-23高表達(dá)，炎癥性反應(yīng)明顯且腸道黏膜屏障防御反應(yīng)顯著增強(qiáng)，IBS炎癥性反應(yīng)不及UC，HBD-2、NF-κB表達(dá)無顯著升高，但可能與輕癥UC存在聯(lián)系。

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（收稿日期：2013-04-18）